วิธีทำอิมมูโนล็อตสำหรับเอชไอวี การตรวจหาแอนติบอดีต่อไวรัส Immunoblot - มันคืออะไร? Immunoblot ในการวินิจฉัยโรคติดเชื้อ

ในทางปฏิบัติ การวินิจฉัยทางห้องปฏิบัติการในโรคติดเชื้อ บางครั้งมีความจำเป็นต้องตรวจแอนติบอดี ไม่ใช่ต่อเชื้อโรคโดยทั่วไป แต่ต่อโปรตีน (แอนติเจน) บางตัว นั่นคือ สเปกตรัมของแอนติบอดีจำเพาะ หากใช้วิธีการทดสอบอิมมูโนซอร์เบนท์ที่เชื่อมโยงกับเอนไซม์เพื่อจุดประสงค์นี้ ในกรณีนี้จำเป็นต้องแยกและทำให้แอนติเจนที่จำเป็นบริสุทธิ์จากการเพาะเลี้ยงเชื้อโรคก่อน โปรตีนที่ได้จะถูกนำไปใช้แยกกันกับเฟสของแข็ง ในกรณีที่ใช้เพลต 96 หลุม แต่ละหลุมจะมีแอนติเจน 1 ชนิด จากนั้นแอนติบอดีจำเพาะจะถูกกำหนดโดยวิธีทางอ้อม

ตามความพร้อม ปฏิกิริยาเชิงบวกในหลุมที่มีแอนติเจนหนึ่งหรืออีกอัน เราสามารถตัดสินการมีอยู่ของแอนติบอดีจำเพาะที่สอดคล้องกันได้ บริษัทผู้ผลิตนำเสนอระบบการทดสอบอิมมูโนเอ็นไซม์ประเภทนี้ แต่วิธีอิมมูโนบล็อกติง (Western blot) แพร่หลายมากขึ้น เนื่องจากมีเนื้อหาข้อมูลมากกว่าและดำเนินการศึกษาได้ง่ายด้วย

การซับภูมิคุ้มกันช่วยให้คุณตรวจแอนติบอดีในซีรั่มในเลือดพร้อมกันและในเวลาเดียวกันก็แยกความแตกต่างจากการวินิจฉัยทั้งหมด โปรตีนที่สำคัญเชื้อโรค การแปลจากภาษาอังกฤษ Western blot หมายถึงการถ่ายโอนแบบตะวันตก (ตัวอักษร - blotting) ประวัติความเป็นมาของคำที่ไม่ธรรมดานี้มีดังนี้

ในปี 1975 นักวิทยาศาสตร์ชื่อ E. Southern ได้เสนอวิธีการถ่ายโอนชิ้นส่วน DNA ที่แยกด้วยไฟฟ้าจากเจลไปยังเมมเบรนเป็นครั้งแรก ตามที่ผู้เขียนระบุ วิธีการนี้เรียกว่า Southern blot ซึ่งแปลว่า "การถ่ายโอนทางใต้" ในทางกลับกันวิธีการถ่ายโอนโมเลกุล RNA ได้รับฉายาโดยผู้เชี่ยวชาญ Northern blot - "การถ่ายโอนทางเหนือ" ตอนแรกเป็นเรื่องตลกแล้วชื่อนี้ก็ได้รับการยอมรับในวรรณกรรมทางวิทยาศาสตร์อย่างเป็นทางการ

ในปี 1979 G. Towbin ตีพิมพ์ผลการทดลองครั้งแรกเกี่ยวกับการซับโปรตีน เพื่อความต่อเนื่องของชื่อ "ทางภูมิศาสตร์" สำหรับวิธีการถ่ายโอนโมเลกุลทางชีววิทยา วิธีนี้เริ่มถูกเรียกว่าการโอนแบบ "ตะวันตก" - Western blot

ขั้นตอนแรกของวิธีนี้เกี่ยวข้องกับการแยกอิเล็กโตรโฟเรติกของส่วนผสมของโปรตีนที่ทำให้เกิดโรคในเจลโพลีอะคริลาไมด์โดยมีโซเดียมโดเดซิลซัลเฟต (SDS) อยู่ด้วย DSN เป็นเพียงผิวเผิน สารออกฤทธิ์ห่อหุ้มโมเลกุลโปรตีนเท่าๆ กัน และให้ประจุลบทั้งหมดที่มีขนาดเท่ากันโดยประมาณ ดังนั้นโมเลกุลจึงเคลื่อนที่ในสนามไฟฟ้าในทิศทางเดียว และความเร็วของการเคลื่อนที่ขึ้นอยู่กับขนาดของโมเลกุล (น้ำหนักโมเลกุล) ของโปรตีนเท่านั้น

อันเป็นผลมาจากขั้นตอนอิเล็กโตรโฟเรติกจะได้แผ่นเจลซึ่งมีความหนาซึ่งโปรตีนอยู่ในรูปแบบของโซนเชิงเส้นบาง ๆ ที่แยกจากกัน ตามทิศทางของการเคลื่อนไหวพวกมันจะถูกแบ่งตามลำดับต่อไปนี้: โปรตีนที่มีน้ำหนักโมเลกุลขนาดใหญ่ประมาณ 120-150 kDa อยู่ใกล้กับจุดเริ่มต้นมากขึ้นและโปรตีนที่มีมวล 5-10 kDa ได้เคลื่อนตัวไปไกลที่สุดจนถึงจุดสิ้นสุด เส้น. ในขั้นตอนที่สอง แผ่นเจลจะถูกวางบนแผ่นไนโตรเซลลูโลส และวางโครงสร้างนี้ไว้ระหว่างอิเล็กโทรดของแหล่งกำเนิด ดี.ซี- ภายใต้อิทธิพลของสนามไฟฟ้า โปรตีนจะไหลจากเจลที่มีรูพรุนไปยังเมมเบรนที่มีความหนาแน่นมากขึ้น ซึ่งพวกมันจะถูกยึดไว้อย่างแน่นหนา

ผลลัพธ์ที่ได้จะได้รับการบำบัดด้วยสารละลายปิดกั้นซึ่งประกอบด้วยโปรตีนที่ไม่แยแสต่อแอนติเจนและ/หรือผงซักฟอกที่ไม่มีประจุ (Tween 20) ซึ่งจะปิดกั้นตำแหน่งที่ปราศจากแอนติเจนบนเมมเบรน จากนั้นแผ่นเมมเบรนจะถูกตัดเป็นแถบแคบๆ เพื่อให้แต่ละแถบมีเศษส่วนของแอนติเจนทั้งหมด ขั้นตอนที่อธิบายไว้ดำเนินการโดยผู้ผลิต

ระบบทดสอบเชิงพาณิชย์สำหรับการตรวจหาแอนติบอดีโดยใช้อิมมูโนลอตติ้งมีแถบ (แถบหรือแถบ) ที่พร้อมสำหรับการทดสอบ ผู้ใช้กำหนดสเปกตรัมทั้งหมดของแอนติบอดีจำเพาะต่อโปรตีนของเชื้อโรคโดยใช้วิธีทางอ้อม สารไม่มีสีที่ละลายน้ำได้นั้นถูกใช้เป็นโครโมเจนในการทำปฏิกิริยาสี (เอนไซม์) ซึ่งผลิตภัณฑ์ที่ได้สีนั้นจะไม่ละลายน้ำและตกตะกอน (ตกตะกอน) บนไนโตรเซลลูโลส

อันเป็นผลมาจากปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันและเอนไซม์ตามลำดับเมื่อมีแอนติบอดีต่อโปรตีนของเชื้อโรคในตัวอย่างทดสอบแถบขวางสีเข้มจะปรากฏบน blot ซึ่งตำแหน่งซึ่งอยู่ในโซนของโปรตีนของเชื้อโรคบางชนิด แต่ละแถบดังกล่าวบ่งชี้ถึงการมีอยู่ของแอนติบอดีจำเพาะต่อแอนติเจนที่สอดคล้องกัน ผลการศึกษาที่ดำเนินการโดย immunoblotting จะได้รับในรูปแบบของรายการแอนติบอดีต่อโปรตีนจำเพาะของเชื้อโรค ตัวอย่างเช่น: “ตรวจพบแอนติบอดีต่อโปรตีน p17 และ p24”

ไนโตรเซลลูโลสบล็อตสามารถเก็บไว้ให้แห้งได้เป็นเวลานานหลังการพัฒนา อย่างไรก็ตาม ความเข้มของสีจะลดลงอย่างมาก สามารถถ่ายภาพหรือฉีดจุดเปียกได้โดยใช้เครื่องสแกน ภาพกราฟิกเข้าสู่หน่วยความจำของคอมพิวเตอร์ส่วนบุคคล พิเศษ โปรแกรมคอมพิวเตอร์ช่วยให้คุณประมวลผลผลลัพธ์ที่ได้รับและตรวจสอบการเปลี่ยนแปลงของสเปกตรัมแอนติบอดีอย่างรวดเร็วในระหว่างการสังเกตแบบไดนามิก

ชุดรีเอเจนต์ "MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2" มีวัตถุประสงค์เพื่อยืนยันการตรวจหาแอนติบอดีต่อโปรตีน (แอนติเจน) ของ HIV-1 และ/หรือ HIV-1 กลุ่ม O และ/หรือ HIV-2 ใน เซรั่มหรือพลาสมา เลือดมนุษย์โดยวิธีอิมมูโนล็อตติง

คุณสมบัติที่โดดเด่น:

• ชุดรีเอเจนต์ "MPBA - Blot - HIV-1, HIV-2" ประกอบด้วยโปรตีนไวรัสไลซีนบริสุทธิ์ของ HIV 1 และเปปไทด์ - ตัวกำหนดแอนติเจน gp36 ของ HIV-2;
• ให้การตรวจหาแอนติบอดีต่อ HIV-1, HIV-1 กลุ่ม O, HIV 2 ในแถบเดียว
• ขั้นตอนง่ายๆการเตรียมและดำเนินการวิเคราะห์
• การควบคุมคุณภาพปฏิกิริยาภายใน*
• ความเร็วสูงสุดดำเนินการวิเคราะห์ (3 ชั่วโมง)
• ตัวอย่างทดสอบปริมาณน้อย - 20 µl;
• ไม่ต้องการ อุปกรณ์เพิ่มเติมเพื่อการวิจัย
• คุณภาพของชุดรับประกันด้วยการใช้ตัวอย่างมาตรฐานจากรัสเซียและสากล**

* การควบคุมคุณภาพภายในทำให้มั่นใจได้เมื่อมี:

• แถบควบคุมภายในให้การควบคุมการแนะนำตัวอย่างซีรัมหรือพลาสมา
• ควบคุมซีรั่มเชิงลบ (K-);
• ควบคุมซีรัมเชิงบวก (K+) ซึ่งช่วยให้สามารถระบุแถบที่ตรวจพบบนแถบได้
• ควบคุมซีรั่มที่ให้ผลบวกอย่างอ่อน (K+cl) ซึ่งให้การควบคุมความไวของชุดรีเอเจนต์

**การประกันคุณภาพ:

คุณลักษณะของชุดรีเอเจนต์ MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 ถูกกำหนดโดยตัวอย่างการทดสอบจากตัวอย่างสุ่มของผู้บริจาค ผู้ป่วยที่ได้รับการวินิจฉัยว่าติดเชื้อ HIV แผงเปลี่ยนซีโรคอนเวอร์ชันเชิงพาณิชย์ แผงมาตรฐาน และตัวอย่างที่มี "อาจรบกวนการทำงานของ ส่วนประกอบของความมุ่งมั่น”

ชุดรีเอเจนต์ไม่ให้ผลบวกลวงเมื่อตรวจซีรั่มแผงมาตรฐานที่ไม่มีแอนติบอดีต่อ HIV 1,2 และแอนติเจน HIV-1 (“AT (-) HIV Standard”, เลขที่ FSR 2007/00953 ลงวันที่ 10.25.2007 ). ความจำเพาะ - 100%

ความจำเพาะในการวินิจฉัยถูกกำหนดโดยการศึกษาตัวอย่างสุ่มของผู้บริจาค 200 รายจากศูนย์โลหิตและคลินิกต่างๆ ที่ได้รับการยืนยันก่อนหน้านี้ว่าไม่มีการติดเชื้อ HIV-1 และ HIV-2 ความจำเพาะเมื่อศึกษากลุ่มตัวอย่างแบบสุ่มของผู้บริจาคคือ 100%;

ความจำเพาะของชุดรีเอเจนต์ถูกกำหนดโดยการทดสอบ 250 ตัวอย่าง ซึ่งรวมถึงตัวอย่างซีรั่มหรือพลาสมาที่ได้รับจากหญิงตั้งครรภ์ ผู้ป่วยที่เข้ารับการรักษาในโรงพยาบาล ผู้ป่วยโรคตับอักเสบซีและอี และตัวอย่างที่มีส่วนประกอบ "ที่อาจรบกวน" เมื่อใช้ชุด MPBA-Blot-HIV-1, HIV-2 สำหรับตัวอย่างเหล่านี้ จะตรวจไม่พบผลบวกลวง

ความไวในการวินิจฉัยถูกกำหนดโดยใช้:
- ตัวอย่างพลาสมาจากกลุ่มตัวอย่าง HIV-1 ของ Boston Biomedica, Inc (WWRB 301) จากภูมิภาคต่างๆ ที่มีเชื้อ HIV-1 ชนิดย่อยที่แตกต่างกัน: กลุ่ม M (ชนิดย่อย A, B, C, D, E, F) และกลุ่ม O; ความไวของชุดรีเอเจนต์คือ 100%;

ความไวของชุดรีเอเจนต์ถูกกำหนดในการศึกษาแผงการแปลงซีโรคอนเวอร์ชันระหว่างประเทศของบริษัท Boston Biomedica, Inc (SeraCare Life Sciences) cat หมายเลข PRB 903, PRB 904, PRB 909, PRB 912, PRB 916, PRB 917, PRB 918, PRB 919, PRB 921, PRB 923, PRB 924, PRB 927, PRB 928, PRB 932, PRB 940

ชุดรีเอเจนต์ตรวจพบแอนติบอดีต่อ HIV-1 ในชุดแผงมาตรฐานที่ประกอบด้วยแอนติบอดีต่อ HIV-1 (“AT (+) HIV-1 Standard”, เลขที่ FSR 2007/00953 ลงวันที่ 25 ตุลาคม 2550) ตรวจพบแอนติบอดีต่อ HIV-2 ในซีรั่มแผงมาตรฐานที่มีแอนติบอดีต่อ HIV-2 (“AT (+) มาตรฐาน HIV-2”, เลขที่ FSR 2007/00953 ลงวันที่ 25 ตุลาคม 2550) ความไว - 100%

หนังสือรับรองการจดทะเบียนเลขที่ FSR 2010/07958 ลงวันที่ 13 กรกฎาคม 2554 (ไม่จำกัดอายุ)

สารประกอบ:

• ภูมิคุ้มกัน แถบเมมเบรนไนโตรเซลลูโลส สีขาวด้วยโปรตีน HIV-1 แต่ละตัว (gp160, gp120, p66, p55, p51, gp41, p31, p24, p17) ดูดซับลงบนพวกมันด้วยการถ่ายโอนด้วยไฟฟ้าและนำไปใช้กับแถบด้วยเปปไทด์ HIV-2 สังเคราะห์ซึ่งเป็นอะนาล็อกของโปรตีน gp36 และ IgG ต่อต้านมนุษย์ ( การควบคุมภายใน) - 18 ชิ้น;
• K- - ควบคุมซีรั่มเชิงลบ ซีรั่มในเลือดของมนุษย์ที่ไม่มีแอนติบอดีต่อ HIV-1,2, HCV, แอนติเจนของ HIV, HBsAg จะถูกปิดใช้งานโดยการให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 560C; ของเหลวสีเหลืองอ่อนใส - หลอดทดลอง 1 หลอด (0.08 มล.) ประกอบด้วยสารกันบูด: ไธเมอโรซอลและโซเดียมอะไซด์
• K+ - ควบคุมซีรั่มเชิงบวก ซีรั่มในเลือดของมนุษย์ที่มีแอนติบอดีต่อ HIV-1,2 (ไทเทอร์ไม่น้อยกว่า 1:10,000) ที่ไม่มี HBsAg, แอนติเจนของ HIV, แอนติบอดีต่อ HCV จะถูกปิดใช้งานโดยการให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 560C; ของเหลวสีเหลืองอ่อนใส - หลอดทดลอง 1 หลอด (0.08 มล.) ประกอบด้วยสารกันบูด: ไธเมอโรซัลและโซเดียมอะไซด์
• K+sl - ควบคุมซีรั่มที่เป็นบวกอย่างอ่อน ซีรั่มในเลือดของมนุษย์ที่มีแอนติบอดีต่อ HIV-1,2 (ระดับไม่เกิน 1:200) ที่ไม่มี HBsAg แอนติเจนของ HIV แอนติบอดีต่อ HCV จะถูกปิดใช้งานโดยการให้ความร้อนที่อุณหภูมิ 560C; ของเหลวสีเหลืองอ่อนใส - หลอดทดลอง 1 หลอด (0.08 มล.) ประกอบด้วยสารกันบูด: ไธเมอโรซอลและโซเดียมอะไซด์
• RPOKk (x10) - สารละลายสำหรับการเจือจางตัวอย่างและคอนจูเกต เข้มข้น - บัฟเฟอร์ Tris ที่มีเซรั่มแพะธรรมดาที่ผ่านการบำบัดล่วงหน้า ของเหลวสีเทาทึบแสง - 1 ขวด (10 มล.) ประกอบด้วยสารกันบูด: ไธเมอโรซอล;
• PRk (x20) - น้ำยาซักผ้า เข้มข้น - บัฟเฟอร์ Tris ที่มี Tween-20; ของเหลวใสไม่มีสี - 1 ขวด (70 มล.) ประกอบด้วยสารกันบูด: ไธเมอโรซอล;
• ผัน. แอนติบอดีต่อต้าน IgG ของแพะที่เชื่อมต่อกับอัลคาไลน์ฟอสฟาเตส ของเหลวใสไม่มีสี - หลอดทดลอง 1 หลอด (0.06 มล.)
• พื้นผิว (สารละลายสี) สารละลายของ 5-โบรโม-4-ฟลูออโร-อินโดลิล ฟอสเฟต (BCIP) และไนโตรบลู เตตราโซเลียม (NBT); ของเหลวสีเหลืองอ่อนใส - 1 ขวด (50 มล.)
• แป้งสำหรับ ภูมิคุ้มกันบกพร่อง- นมผงพร่องมันเนย - ผงสีขาวหรือสีเหลืองอ่อนอสัณฐาน - 5 แพ็ค x 1 กรัม;
• แท็บเล็ตพร้อมฝาปิดสำหรับตั้งค่าปฏิกิริยา - 2 ชิ้น;
• แหนบพลาสติก - 1 ชิ้น

ชื่อของเขาคือ AIDS Vyacheslav Zalmanovich Tarantul

Immunoblotting - วิธีทางอ้อมเพิ่มเติม

นอกจาก ELISA แล้ว ในบางกรณี ยังมีการใช้ขั้นตอนที่เรียกว่า "immunoblotting" หรือ "immune blotting" (บางครั้งเรียกว่า "Western blot") เพื่อทดสอบการติดเชื้อ HIV ตามคำแนะนำของ WHO มีการใช้อิมมูโนลอตต์ในการวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวีเป็นวิธีการของผู้เชี่ยวชาญเพิ่มเติมซึ่งควรยืนยันผลลัพธ์ของ ELISA โดยทั่วไปแล้ว วิธีการนี้จะตรวจสอบผลลัพธ์ ELISA ที่เป็นบวกอีกครั้ง เนื่องจากถือว่ามีความละเอียดอ่อนและเฉพาะเจาะจงมากกว่า แม้ว่าจะซับซ้อนและมีราคาแพงกว่าก็ตาม แต่ก่อนที่จะลงนามคำตัดสินขั้นสุดท้ายเกี่ยวกับผู้ป่วย แพทย์จะต้องแน่ใจในความถูกต้องของการวินิจฉัย ดังนั้นคำถามเกี่ยวกับความซับซ้อนและต้นทุนสูงจึงไม่สามารถชี้ขาดได้

ทั้งในแง่ของวัตถุประสงค์และวิธีการดำเนินการ สำนวนที่รู้จักกันดีว่า "ใส่กระดาษซับ" เหมาะอย่างยิ่งกับอิมมูโนล็อตติง Immunoblotting รวมกัน เอนไซม์อิมมูโนแอสเสย์(ELISA) ด้วยการแยกโปรตีนของไวรัสด้วยไฟฟ้าเบื้องต้นในเจลและถ่ายโอนไปยังเยื่อหุ้มไนโตรเซลลูโลส (“กระดาษซับ”) ขั้นตอนอิมมูโนลอตประกอบด้วยหลายขั้นตอน (รูปที่ 27) ประการแรก เอชไอวีซึ่งก่อนหน้านี้ทำให้บริสุทธิ์และถูกทำลายไปเป็นส่วนประกอบต่างๆ จะถูกอิเล็กโตรโฟเรซิส และแอนติเจนทั้งหมดที่รวมอยู่ในไวรัสจะถูกแยกออกจากกันด้วยน้ำหนักโมเลกุล จากนั้น ใช้วิธีการซับ (คล้ายกับการบีบหมึกส่วนเกินลงบนแผ่นซับ) แอนติเจนจะถูกถ่ายโอนจากเจลไปยังแถบไนโตรเซลลูโลสหรือตัวกรองไนลอน ซึ่งขณะนี้มีสเปกตรัมของโปรตีนที่มีลักษณะเฉพาะของ HIV ซึ่งมองไม่เห็นด้วยตาเปล่า . จากนั้น วัสดุที่ใช้ทดสอบ (ซีรั่ม พลาสมาในเลือดของผู้ป่วย ฯลฯ) จะถูกนำไปใช้กับแถบ และหากมีแอนติบอดีจำเพาะในตัวอย่าง สารเหล่านี้จะจับกับแถบโปรตีนแอนติเจนที่สอดคล้องกับสารเหล่านั้นอย่างเคร่งครัด อันเป็นผลมาจากการปรับเปลี่ยนในภายหลัง (คล้ายกับ ELISA) ผลลัพธ์ของการโต้ตอบนี้จะถูกมองเห็น - ทำให้มองเห็นได้ ท้ายที่สุด การมีอยู่ของแถบในบางพื้นที่ของแถบเป็นการยืนยันการมีอยู่ของแอนติบอดีในซีรั่มที่ทดสอบแล้วเพื่อกำหนดแอนติเจนของ HIV อย่างเคร่งครัด

Immunoblotting มักใช้เพื่อยืนยันการวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวี WHO พิจารณาซีรั่มเชิงบวกที่ตรวจพบแอนติบอดีต่อโปรตีนซอง HIV สองชนิดใดๆ ก็ตามโดยวิธีอิมมูโนบลูตต์ ตามคำแนะนำเหล่านี้ หากมีปฏิกิริยากับโปรตีนซองจดหมายเพียงชนิดเดียว (gp160, gp120, gp41) ร่วมกันหรือไม่ทำปฏิกิริยากับโปรตีนอื่นๆ จะถือว่าผลลัพธ์เป็นที่น่าสงสัย และแนะนำให้ทำการทดสอบซ้ำโดยใช้ชุดอุปกรณ์จาก ซีรีส์อื่นหรือจากบริษัทอื่น เพื่อความปลอดภัยหาก

ข้าว. 27. ในการดำเนินการอิมมูโนลอตต์ ในระยะแรก โปรตีนที่มีอยู่ในซีรั่มเลือดจะถูกแยกออกเป็นเจลตามน้ำหนักโมเลกุลและประจุโดยใช้สนามไฟฟ้า (โดยเจลอิเล็กโตรโฟรีซิส) จากนั้นจึงวางไนโตรเซลลูโลสหรือเมมเบรนไนลอนไว้บนเจลและ "ซับ" (นี่คือการซับ) ซึ่งดำเนินการในห้องพิเศษซึ่งช่วยให้สามารถถ่ายโอนวัสดุจากเจลไปยังเมมเบรนได้อย่างสมบูรณ์ เป็นผลให้รูปแบบการจัดเรียงโปรตีนที่อยู่บนเจลถูกสร้างขึ้นซ้ำบนเมมเบรน (blot) ซึ่งสามารถจัดการได้อย่างง่ายดาย ในขั้นแรก เมมเบรนจะได้รับการบำบัดด้วยแอนติบอดีต่อแอนติเจนที่ต้องการ และหลังจากล้างวัสดุที่ไม่ถูกผูกออกแล้ว คอนจูเกตที่มีป้ายกำกับกัมมันตภาพรังสีจะถูกเติมเข้าไปซึ่งจะจับกับแอนติบอดีโดยเฉพาะ (เช่นใน ELISA) ตำแหน่งของสารเชิงซ้อนคอนจูเกตที่ติดฉลากแอนติเจน-แอนติบอดีที่เป็นผลลัพธ์ถูกกำหนดหาโดยการใช้การถ่ายภาพรังสีอัตโนมัติโดยใช้ฟิล์มเอ็กซ์เรย์ หลังจากการสำแดงจะชัดเจนว่ามีแอนติเจนในเลือดหรือไม่ และหลังจากนั้นผลลัพธ์ยังคงเป็นที่น่าสงสัย แนะนำให้ติดตามผลเป็นเวลาหกเดือน (การวิจัยดำเนินต่อไปทุกสามเดือน)

ปัจจุบันในสหพันธรัฐรัสเซียแนะนำให้ใช้ระบบทดสอบ 5 ระบบเพื่อใช้ในการวินิจฉัยการติดเชื้อ HIV ซึ่งมีทั้งระบบรัสเซียและต่างประเทศ

จากหนังสือวิสัญญีวิทยาและ Reanimatology ผู้เขียน มารีนา อเล็กซานดรอฟนา โคเลสนิโควา

จากหนังสือเรื่อง Oddities of our body กายวิภาคศาสตร์ที่สนุกสนาน โดย สตีเฟน ฮวน

จากหนังสือคู่มือการปฐมพยาบาล โดยนิโคไล เบิร์ก

จากหนังสือวิธีเลิกบุหรี่ 100% หรือรักตัวเองและเปลี่ยนชีวิตคุณ โดย เดวิด คิปนิส

จากหนังสือ คู่มือฉบับสมบูรณ์การพยาบาล ผู้เขียน เอเลนา ยูริเยฟนา คราโมวา

จากสารบบหนังสือ การดูแลฉุกเฉิน ผู้เขียน เอเลนา ยูริเยฟนา คราโมวา

จากหนังสือ CESAREAN SECTION: ทางออกที่ปลอดภัยหรือภัยคุกคามต่ออนาคต? โดย มิเชล โอเดน

โดย แกรี่ กริฟฟิน

จากหนังสือวิธีเพิ่มขนาดอวัยวะเพศชาย โดย แกรี่ กริฟฟิน

จากหนังสือ Flatfoot มากที่สุด วิธีการที่มีประสิทธิภาพการรักษา ผู้เขียน อเล็กซานดรา วาซิลีวา

จากหนังสือเรื่องความงามและสุขภาพสตรี ผู้เขียน วลาดิสลาฟ เกนนาดีวิช ลิฟลายแลนด์สกี้

จากหนังสือโยคะและการปฏิบัติทางเพศ โดย นิค ดักลาส

การวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวีอย่างทันท่วงทีกลายเป็นมาตรการที่สำคัญอย่างยิ่ง เนื่องจากการเริ่มการรักษาก่อนหน้านี้สามารถกำหนดได้เป็นส่วนใหญ่ การพัฒนาต่อไปโรคและยืดอายุของผู้ป่วย ใน ปีที่ผ่านมามีความก้าวหน้าที่สำคัญในการระบุสิ่งนี้ โรคร้าย: ระบบการทดสอบแบบเก่าถูกแทนที่ด้วยระบบที่ก้าวหน้ากว่า วิธีการทดสอบก็เข้าถึงได้มากขึ้น และความแม่นยำก็เพิ่มขึ้นอย่างมาก

ในบทความนี้เราจะพูดถึง วิธีการที่ทันสมัยการวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวีซึ่งเป็นประโยชน์ต่อการทราบ การรักษาทันเวลาปัญหานี้และการรักษาคุณภาพชีวิตตามปกติของผู้ป่วย

วิธีการวินิจฉัยเอชไอวี

ในรัสเซีย มีการดำเนินการตามขั้นตอนมาตรฐานเพื่อวินิจฉัยการติดเชื้อ HIV ซึ่งประกอบด้วยสองระดับ:

• เอลิซา ระบบทดสอบ(การวิเคราะห์แบบคัดกรอง);
• อิมมูโนล็อตติง (IB)

สามารถใช้วิธีอื่นในการวินิจฉัยได้:

• การทดสอบอย่างรวดเร็ว

ระบบทดสอบ ELISA

ในระยะแรกของการวินิจฉัย การตรวจคัดกรอง (ELISA) ใช้เพื่อตรวจหาการติดเชื้อ HIV ซึ่งใช้โปรตีนของ HIV ที่สร้างขึ้นในห้องปฏิบัติการที่จับแอนติบอดีจำเพาะที่ผลิตในร่างกายเพื่อตอบสนองต่อการติดเชื้อ หลังจากทำปฏิกิริยากับรีเอเจนต์ (เอนไซม์) ของระบบทดสอบ สีของตัวบ่งชี้จะเปลี่ยนไป จากนั้น การเปลี่ยนสีเหล่านี้จะถูกประมวลผลโดยใช้อุปกรณ์พิเศษ ซึ่งเป็นตัวกำหนดผลลัพธ์ของการวิเคราะห์ที่ดำเนินการ

การทดสอบ ELISA ดังกล่าวสามารถแสดงผลลัพธ์ได้ภายในไม่กี่สัปดาห์หลังจากมีการติดเชื้อ HIV การทดสอบนี้ไม่ได้ระบุการมีอยู่ของไวรัส แต่ตรวจจับการผลิตแอนติบอดีต่อไวรัส บางครั้งในร่างกายมนุษย์ การผลิตแอนติบอดีต่อเอชไอวีจะเริ่มขึ้นหลังจากผ่านไป 2 สัปดาห์ของการติดเชื้อ แต่ในคนส่วนใหญ่ แอนติบอดีต่อเอชไอวีจะเกิดขึ้นมากกว่านั้น ภายหลังหลังจากผ่านไป 3-6 สัปดาห์

การทดสอบ ELISA มีทั้งหมดสี่รุ่นซึ่งมีความไวที่แตกต่างกัน ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา มีการใช้ระบบการทดสอบรุ่นที่สามและสี่มากขึ้น ซึ่งใช้เปปไทด์สังเคราะห์หรือโปรตีนรีคอมบิแนนท์ และมีความจำเพาะและความแม่นยำมากขึ้น สามารถใช้เพื่อวินิจฉัยการติดเชื้อ HIV ติดตามความชุกของ HIV และรับรองความปลอดภัยในระหว่างการทดสอบ บริจาคเลือด- ความแม่นยำของระบบทดสอบ ELISA รุ่นที่ III และ IV คือ 93-99% (การทดสอบที่ผลิตในยุโรปตะวันตกมีความละเอียดอ่อนมากกว่า - 99%)

ในการทำการทดสอบ ELISA จะต้องนำเลือด 5 มล. จากหลอดเลือดดำของผู้ป่วย ระหว่าง นัดสุดท้ายอาหารและการวิเคราะห์ควรใช้เวลาอย่างน้อย 8 ชั่วโมง (ตามกฎแล้วจะดำเนินการในตอนเช้าขณะท้องว่าง) ขอแนะนำให้ทำการทดสอบดังกล่าวไม่ช้ากว่า 3 สัปดาห์หลังการติดเชื้อที่ต้องสงสัย (เช่น หลังจากการมีเพศสัมพันธ์โดยไม่มีการป้องกันกับคู่นอนใหม่)

ผลการทดสอบ ELISA จะได้รับภายใน 2-10 วัน:

• ผลลัพธ์เชิงลบ: บ่งชี้ว่าไม่มีการติดเชื้อ HIV และไม่จำเป็นต้องติดต่อผู้เชี่ยวชาญ
• ผลลบลวง: อาจสังเกตได้บน ระยะแรกการติดเชื้อ (นานถึง 3 สัปดาห์) ด้วย ช่วงปลายโรคเอดส์ที่มีภูมิคุ้มกันบกพร่องอย่างรุนแรงและการเตรียมเลือดที่ไม่เหมาะสม
• ผลบวกลวง: สามารถสังเกตได้ในบางโรคและในกรณีที่เตรียมเลือดไม่เหมาะสม
• ผลบวก: บ่งบอกถึงการติดเชื้อ การติดเชื้อเอชไอวีต้องทำ IB และผู้ป่วยติดต่อผู้เชี่ยวชาญที่ศูนย์เอดส์

เหตุใดการทดสอบ ELISA จึงให้ผลบวกลวงได้

ผลการตรวจ HIV ELISA ที่เป็นเท็จอาจเกิดขึ้นได้เนื่องจากการประมวลผลของเลือดที่ไม่เหมาะสม หรือในผู้ป่วยที่มีภาวะและโรคต่อไปนี้:

• มัลติเพิล มัยอิโลมา;
• โรคติดเชื้อที่เกิดจากไวรัส Epstein-Barr;
• สถานะหลังจาก;
• โรคแพ้ภูมิตัวเอง
• กับภูมิหลังของการตั้งครรภ์
• สภาพหลังการฉีดวัคซีน

ด้วยเหตุผลที่อธิบายไว้ข้างต้น อาจมีแอนติบอดีที่ทำปฏิกิริยาข้ามที่ไม่จำเพาะเจาะจงในเลือด ซึ่งการผลิตไม่ได้ถูกกระตุ้นโดยการติดเชื้อเอชไอวี

ในช่วงไม่กี่ปีที่ผ่านมา ความถี่ของผลบวกลวงลดลงอย่างมีนัยสำคัญเนื่องจากการใช้ระบบการทดสอบเจนเนอเรชั่นที่ 3 และ 4 ซึ่งมีเปปไทด์และโปรตีนรีคอมบิแนนท์ที่ไวกว่า (สังเคราะห์โดยใช้ พันธุวิศวกรรมในหลอดทดลอง) หลังจากเริ่มใช้การทดสอบ ELISA ดังกล่าว ความถี่ของผลบวกลวงลดลงอย่างมีนัยสำคัญคือประมาณ 0.02-0.5%

การตรวจจับเป็นเท็จ ผลลัพธ์ที่เป็นบวกไม่ได้หมายความว่าบุคคลนั้นติดเชื้อเอชไอวี ในกรณีเช่นนี้ WHO แนะนำให้ทำการทดสอบ ELISA อีกครั้ง (จำเป็นต้องมีการสร้าง IV)

เลือดของผู้ป่วยจะถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการอ้างอิงหรือห้องปฏิบัติการอนุญาโตตุลาการที่มีเครื่องหมาย "ทำซ้ำ" และทดสอบโดยใช้ระบบการทดสอบ ELISA รุ่น IV หากผลลัพธ์ของการวิเคราะห์ใหม่เป็นลบ ผลลัพธ์แรกจะถือว่าผิดพลาด (ผลบวกลวง) และจะไม่ดำเนินการ IS หากผลเป็นบวกหรือมีข้อสงสัยในระหว่างการทดสอบครั้งที่สอง ผู้ป่วยจะต้องเข้ารับการตรวจ IB หลังจากผ่านไป 4-6 สัปดาห์เพื่อยืนยันหรือปฏิเสธการติดเชื้อ HIV

ซับภูมิคุ้มกัน

การวินิจฉัยขั้นสุดท้ายของการติดเชื้อเอชไอวีสามารถทำได้หลังจากได้รับผลการตรวจอิมมูโนบล็อกติง (IB) เชิงบวกเท่านั้น ในการดำเนินการนี้จะใช้แถบไนโตรเซลลูโลสซึ่งใช้โปรตีนของไวรัส

การเก็บตัวอย่างเลือดสำหรับ IB ดำเนินการจากหลอดเลือดดำ จากนั้นจะต้องได้รับการดูแลเป็นพิเศษและโปรตีนที่มีอยู่ในซีรั่มจะถูกแยกออกเป็นเจลพิเศษตามประจุและน้ำหนักโมเลกุล (การจัดการจะดำเนินการโดยใช้อุปกรณ์พิเศษภายใต้อิทธิพลของสนามไฟฟ้า) แถบไนโตรเซลลูโลสถูกนำไปใช้กับเจลเซรั่มในเลือดและทำการซับ (“การซับ”) ในห้องพิเศษ แถบดังกล่าวได้รับการประมวลผล และหากวัสดุที่ใช้มีแอนติบอดีต่อเอชไอวี แถบเหล่านั้นจะจับกับแถบแอนติเจนบน IB และปรากฏเป็นเส้น

IB จะถูกพิจารณาว่าเป็นบวกหาก:

• ตามเกณฑ์ของ American CDC - มีสองหรือสามบรรทัด gp41, p24, gp120/gp160 บนแถบ;
• ตามเกณฑ์ของ American FDA แถบนี้มีสองบรรทัด p24, p31 และบรรทัด gp41 หรือ gp120/gp160

ใน 99.9% ของกรณี ผล IB เป็นบวกบ่งชี้ว่ามีการติดเชื้อ HIV

หากไม่มีเส้น IB จะเป็นลบ

เมื่อระบุบรรทัดด้วย gr160, gr120 และ gr41 IB จะเป็นที่น่าสงสัย ผลลัพธ์นี้อาจเกิดขึ้นเมื่อ:

• โรคมะเร็ง
• การตั้งครรภ์;
• การถ่ายเลือดบ่อยครั้ง

ในกรณีเช่นนี้ แนะนำให้ทำการทดสอบซ้ำโดยใช้ชุดอุปกรณ์จากบริษัทอื่น หากหลังจาก IB เพิ่มเติมแล้ว แต่ผลลัพธ์ยังคงเป็นที่น่าสงสัย จำเป็นต้องมีการสังเกตเป็นเวลาหกเดือน (IB จะดำเนินการทุกๆ 3 เดือน)

ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส

การทดสอบ PCR สามารถตรวจจับ RNA ของไวรัสได้ ความไวของมันค่อนข้างสูงและสามารถตรวจพบการติดเชื้อ HIV ได้ภายใน 10 วันหลังการติดเชื้อ ในบางกรณี PCR อาจให้ ผลลัพธ์บวกลวงเนื่องจากความไวสูงยังสามารถตอบสนองต่อแอนติบอดีต่อการติดเชื้ออื่นๆ ได้อีกด้วย

เทคนิคการวินิจฉัยนี้มีราคาแพงและต้องใช้อุปกรณ์พิเศษและผู้เชี่ยวชาญที่มีคุณสมบัติสูง เหตุผลเหล่านี้ไม่สามารถทำการทดสอบประชากรจำนวนมากได้

PCR ใช้ในกรณีต่อไปนี้:

• เพื่อตรวจหาเชื้อเอชไอวีในทารกแรกเกิดที่เกิดจากมารดาที่ติดเชื้อเอชไอวี
• เพื่อตรวจหาเชื้อเอชไอวีในช่วง “หน้าต่าง” หรือในกรณีที่สงสัย IB
• เพื่อควบคุมความเข้มข้นของเอชไอวีในเลือด
• เพื่อศึกษาผู้บริจาคโลหิต

การตรวจ PCR เพียงอย่างเดียวไม่ได้วินิจฉัยเชื้อ HIV แต่ดำเนินการในลักษณะ a วิธีการเพิ่มเติมการวินิจฉัยเพื่อแก้ไขสถานการณ์ที่ขัดแย้ง

วิธีการด่วน

นวัตกรรมอย่างหนึ่งในการวินิจฉัยเอชไอวีคือการตรวจแบบรวดเร็วซึ่งสามารถประเมินผลได้ภายใน 10-15 นาที ผลลัพธ์ที่มีประสิทธิภาพและแม่นยำที่สุดนั้นได้มาจากการทดสอบอิมมูโนโครมาโตกราฟีตามหลักการไหลของเส้นเลือดฝอย เป็นแถบพิเศษที่ใช้กับเลือดหรือของเหลวทดสอบอื่นๆ (น้ำลาย ปัสสาวะ) หากมีแอนติบอดีต่อเอชไอวีหลังจากผ่านไป 10-15 นาทีการทดสอบจะมีแถบสีและแถบควบคุมปรากฏขึ้น - ให้ผลลัพธ์ที่เป็นบวก หากผลลัพธ์เป็นลบ จะแสดงเฉพาะแถบควบคุมเท่านั้น

เช่นเดียวกับการทดสอบ ELISA ผลลัพธ์ของการทดสอบอย่างรวดเร็วจะต้องได้รับการยืนยันโดยการวิเคราะห์ของ IB หลังจากนี้ก็สามารถวินิจฉัยการติดเชื้อเอชไอวีได้

มีชุดทดสอบที่บ้านแบบด่วนจำหน่าย การทดสอบ OraSure Technologies1 (สหรัฐอเมริกา) ได้รับการอนุมัติจาก FDA มีวางจำหน่ายที่เคาน์เตอร์ และสามารถใช้เพื่อตรวจหาเชื้อ HIV หลังการทดสอบหากผลเป็นบวกแนะนำให้ผู้ป่วยเข้ารับการตรวจที่ศูนย์เฉพาะทางเพื่อยืนยันการวินิจฉัย

การทดสอบอื่น ๆ สำหรับ ใช้ในบ้านยังไม่ได้รับการอนุมัติจาก FDA และผลลัพธ์อาจเป็นที่น่าสงสัยมาก

แม้ว่าการทดสอบอย่างรวดเร็วจะมีความแม่นยำต่ำกว่าการทดสอบ ELISA รุ่น IV แต่ก็มีการใช้กันอย่างแพร่หลายสำหรับการทดสอบเพิ่มเติมของประชากร

การทดสอบเพื่อตรวจหาการติดเชื้อเอชไอวีสามารถทำได้ที่คลินิก โรงพยาบาลเขตกลาง หรือศูนย์โรคเอดส์เฉพาะทาง ในดินแดนของรัสเซีย จะดำเนินการอย่างเป็นความลับหรือไม่เปิดเผยตัวตน ผู้ป่วยแต่ละรายสามารถวางใจในการรับการรักษาพยาบาลหรือ การให้คำปรึกษาทางจิตวิทยาก่อนหรือหลังการวิเคราะห์ คุณจะต้องจ่ายค่าตรวจเอชไอวีในเชิงพาณิชย์เท่านั้น สถาบันการแพทย์และใน คลินิกของรัฐและโรงพยาบาลที่ให้บริการโดยไม่คิดค่าใช้จ่าย

อ่านเกี่ยวกับวิธีการติดเชื้อ HIV และความเชื่อผิดๆ เกี่ยวกับความเป็นไปได้ในการติดเชื้อ

อัล ความดันเลือดต่ำ, อิศวร, หายใจถี่, ตัวเขียว ที่ หลักสูตรที่รุนแรงอาจมีอาการป่วย มีเลือดออก และอาเจียนปนเลือดได้ ตับและม้ามจะขยายใหญ่ขึ้น มีการบันทึก Oliguria อุณหภูมิยังคงสูงอย่างต่อเนื่องเป็นเวลา 3-10 วัน ในเลือดส่วนปลาย - เม็ดเลือดขาวนิวโทรฟิลิกโดยเลื่อนไปทางซ้าย นอกเหนือจากที่อธิบายไว้แล้ว อาการทั่วไปกาฬโรค, รอยโรคพัฒนาซึ่งเป็นลักษณะเฉพาะของรูปแบบทางคลินิกแต่ละโรค

รูปแบบผิวหนังพบได้น้อย (3–5%) บริเวณประตูทางเข้าของการติดเชื้อจะมีจุดปรากฏขึ้นจากนั้นมีเลือดคั่งเป็นตุ่ม (phlyctena) ที่เต็มไปด้วยเนื้อหาเลือดออกในซีรัมล้อมรอบด้วยบริเวณที่มีการแทรกซึมซึ่งมีภาวะเลือดคั่งและอาการบวมน้ำ Phlyctena มีอาการปวดอย่างรุนแรง เมื่อเปิดออก แผลจะก่อตัวโดยมีสะเก็ดสีเข้มที่ด้านล่าง แผลในกาฬโรคมีระยะเวลายาวนานและหายช้าทำให้เกิดแผลเป็น หากรูปแบบนี้ซับซ้อนจากภาวะโลหิตเป็นพิษ จะเกิดตุ่มหนองและแผลพุพองทุติยภูมิ การพัฒนา bubo ในระดับภูมิภาค (รูปแบบบูโบนิกทางผิวหนัง) เป็นไปได้

รูปแบบฟองสบู่เป็นรูปแบบที่พบบ่อยที่สุด (ประมาณ 80%) และมีลักษณะที่ไม่เป็นพิษเป็นภัย ตั้งแต่วันแรกของโรคอาการปวดเฉียบพลันจะปรากฏขึ้นในบริเวณต่อมน้ำเหลืองในระดับภูมิภาคซึ่งทำให้การเคลื่อนไหวยากขึ้นและบังคับให้ผู้ป่วยต้องเข้ารับตำแหน่งที่ถูกบังคับ ตามกฎแล้ว ฟองสบู่หลักจะเป็นฟองเดี่ยวหลายฟอง ในกรณีส่วนใหญ่ ขาหนีบและโคนขาจะได้รับผลกระทบ ค่อนข้างน้อยที่ซอกใบและปากมดลูก ต่อมน้ำเหลือง- ขนาดของฟองจะแตกต่างกันไป วอลนัทให้เป็นแอปเปิ้ลขนาดกลาง คุณสมบัติที่สดใส ได้แก่ ความเจ็บปวดที่คมชัดความหนาแน่นสม่ำเสมอการยึดเกาะกับเนื้อเยื่อที่อยู่ด้านล่างความเรียบเนียนของรูปทรงเนื่องจากการพัฒนาของเยื่อบุช่องท้องอักเสบ ฟองสบู่จะเริ่มก่อตัวในวันที่สองของการเจ็บป่วย เมื่อมันพัฒนา ผิวหนังบริเวณนั้นจะเปลี่ยนเป็นสีแดง มันเงา และมักจะมีโทนสีเขียวอมเขียว ในตอนแรกจะมีความหนาแน่น จากนั้นจะนิ่มลง ความผันผวนปรากฏขึ้น และรูปทรงไม่ชัดเจน ในวันที่ 10-12 ของการเจ็บป่วย จะเปิดขึ้น - รูทวารและแผลเปื่อย ด้วยโรคที่ไม่ร้ายแรงและ การรักษาด้วยยาปฏิชีวนะสมัยใหม่สังเกตการสลายหรือเส้นโลหิตตีบ อันเป็นผลมาจากการแนะนำเชื้อโรคทางโลหิตวิทยาทำให้เกิดฟองทุติยภูมิซึ่งปรากฏในภายหลังและมีขนาดเล็กเจ็บปวดน้อยลงและตามกฎแล้วอย่าให้หนอง ภาวะแทรกซ้อนที่ร้ายแรงของแบบฟอร์มนี้อาจเป็นการพัฒนารูปแบบทางเดินปัสสาวะในปอดหรือระบบบำบัดน้ำเสียทุติยภูมิซึ่งทำให้สภาพของผู้ป่วยแย่ลงอย่างมากถึงขั้นเสียชีวิตได้

ปอดปฐมภูมิพบน้อยในช่วงที่มีการแพร่ระบาดประมาณ 5-10% ของกรณี และเป็นอันตรายมากที่สุดในแง่ระบาดวิทยาและรุนแรง รูปแบบทางคลินิกโรคต่างๆ มันเริ่มต้นอย่างฉับไวและรุนแรง กับฉากหลังที่เด่นชัด กลุ่มอาการมึนเมาตั้งแต่วันแรกมีอาการไอแห้งหายใจถี่รุนแรงปรากฏขึ้น ตัดความเจ็บปวดที่หน้าอก อาการไอจะมีประสิทธิผลโดยมีการผลิตเสมหะซึ่งปริมาณอาจแตกต่างกันไปจากการถ่มน้ำลายเล็กน้อยไปจนถึงปริมาณมากก็แทบจะไม่หายไปเลย เสมหะ แรกเกิดฟองเป็นแก้วใส แล้วปรากฏเป็นเลือด ต่อมากลายเป็นเลือดล้วนๆ ประกอบด้วย จำนวนมากกาฬโรคแบคทีเรีย มักจะมีความคงตัวของของเหลว - หนึ่งในนั้น สัญญาณการวินิจฉัย- ข้อมูลทางกายภาพมีน้อย: เสียงกระทบเหนือกลีบที่ได้รับผลกระทบสั้นลงเล็กน้อยในการตรวจคนไข้ไม่มีเสียงหายใจดังเสียงฮืด ๆ มากนักซึ่งเห็นได้ชัดว่าไม่สอดคล้องกับสภาพร้ายแรงโดยทั่วไปของผู้ป่วย ระยะสุดท้ายมีลักษณะเฉพาะคือหายใจถี่เพิ่มขึ้น, ตัวเขียว, การพัฒนาของอาการมึนงง, อาการบวมน้ำที่ปอดและ ITS ความดันโลหิตลดลง ชีพจรเต้นเร็วและเหมือนเส้นด้าย เสียงหัวใจไม่ชัด ภาวะอุณหภูมิร่างกายสูงจะถูกแทนที่ด้วยภาวะอุณหภูมิต่ำกว่าปกติ หากไม่ได้รับการรักษา โรคจะสิ้นสุดลงด้วยการตายภายใน 2-6 วัน ด้วยการใช้ยาปฏิชีวนะตั้งแต่เนิ่นๆ การดำเนินโรคจะไม่เป็นอันตรายและแตกต่างกันเล็กน้อย