การทดสอบเชิงลบที่เป็นเท็จ - การทดสอบคูมบ์สทางอ้อม การทดสอบคูมบ์ส: ทางตรงและทางอ้อม

โรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกซึ่งเกิดจากร่างกายภูมิต้านทานตนเองที่มุ่งตรงต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงของตัวเองนั้นยังไม่เป็นที่เข้าใจแน่ชัด อย่างไรก็ตาม มีการสันนิษฐานว่าปัจจัยบางอย่าง (เช่น ไวรัส โปรตีนที่ผิดปกติ) เปลี่ยนเซลล์เม็ดเลือดแดงในลักษณะที่ร่างกายรับรู้ว่าเซลล์เหล่านี้ "เป็นสิ่งแปลกปลอม" และต่อสู้กับเซลล์เหล่านี้ด้วยความช่วยเหลือของแอนติบอดี ตามทฤษฎีอื่น แอนติบอดีที่มุ่งตรงต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงเกิดขึ้นโดยบังเอิญในระหว่างการก่อตัวของร่างกายโปรตีนพลาสมาผิดปกติในบางโรค ร่างกายที่เป็นโปรตีนดังกล่าวสามารถให้ปฏิกิริยาที่สามารถนำไปใช้ในการวินิจฉัยได้เช่นเดียวกับ "แบบสุ่ม" (ตัวอย่างเช่น โรคปอดบวมจากไวรัสเป็นที่รู้กันว่าให้ ปฏิกิริยาเชิงบวกวาสเซอร์แมน ปฏิกิริยาพอล-บันเนลล์เชิงบวก และปฏิกิริยาการเกาะติดกันเย็น)

มีอยู่สองคน autoantibodies ประเภทหลักสำหรับโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตก ได้แก่ แอนติบอดีอุ่น (ทำปฏิกิริยาที่ 37°C) และแอนติบอดีเย็น (ปฏิกิริยาจะเพิ่มขึ้นเมื่ออุณหภูมิเข้าใกล้ศูนย์) แอนติบอดีอุ่นพบได้บ่อยกว่าแอนติบอดีเย็น Dacie พบว่าเม็ดเลือดแดงอุ่นเกิดขึ้นบ่อยกว่าเม็ดเลือดเย็นถึง 2 เท่า เฮโมไลซินและแอกกลูตินินไม่ใช่แอนติบอดีที่แตกต่างกันโดยพื้นฐาน แต่จะต่างกันเพียงในลักษณะการออกฤทธิ์เท่านั้น แอกกลูตินินเกาะกันเป็นเม็ดเลือดแดง และเฮโมไลซินทำให้เซลล์เหล่านี้ไวต่อกระบวนการที่ซับซ้อนของเม็ดเลือดแดงแตกมากขึ้น (เสริม!) Autoantibodies ซึ่งจับจ้องอยู่ที่เม็ดเลือดแดงก่อให้เกิดสารเชิงซ้อนของเม็ดเลือดแดง - โกลบิน สารเชิงซ้อนนี้ตรวจพบโดยใช้การทดสอบแอนติโกลบินของคูมบ์ส

การทดสอบคูมบ์สดำเนินการกับซีรั่มคูมบ์สสำหรับการเตรียมกระต่ายที่ไวต่อซีรั่มของมนุษย์ซึ่งสร้างแอนติบอดีในซีรั่มของกระต่าย เมื่อซีรั่มที่มีความไวดังกล่าวออกฤทธิ์ต่อเม็ดเลือดแดงของมนุษย์ เม็ดเลือดแดงเหล่านี้จะเกาะติดกันหากตัวรับเม็ดเลือดแดงถูกครอบครองโดยการปิดกั้นแอนติบอดี เนื่องจากแอนติบอดีที่ขัดขวางเหล่านี้ได้มาจากซีรั่มของมนุษย์ จึงจับกันเป็นก้อนกับซีรั่มของกระต่ายที่ไวต่อพลาสมาของมนุษย์และมีพรีซิปิติน ปฏิกิริยานี้เรียกว่าการทดสอบคูมบ์ส สำหรับโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากภูมิต้านทานผิดปกติ (Lo tit) เกือบจะเฉพาะเจาะจง (ดูรายละเอียดใน Maier)

โดยทั่วไปสำหรับโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกด้วยความผิดปกติหลักของเม็ดเลือดแดง การทดสอบคูมบ์สจะเป็นลบ และเมื่อได้รับมาก็จะเป็นบวก อย่างไรก็ตาม มีข้อยกเว้นบางประการสำหรับกฎนี้: การทดสอบคูมบ์สที่ให้ผลบวกลวงถูกพบในระหว่างวิกฤตของโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกตามรัฐธรรมนูญ และในระดับที่ไม่รุนแรง บางครั้งอาจเกิดขึ้นหลังจากการตัดม้ามออก ด้วยโรคข้ออักเสบรูมาติก ซาร์คอยโดซิส หลังจากการถ่ายเลือดบ่อยครั้งและโรคลูปัสทั่วร่างกาย เม็ดเลือดแดง โดยธรรมชาติแล้วในโรคโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกที่ได้มาโดยไม่มีการก่อตัวของภูมิต้านทานผิดปกติจะเป็นค่าลบ

โรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกที่เกิดจากภูมิต้านทานตนเองสามารถแบ่งออกเป็น:
ก) เฉียบพลัน กึ่งเฉียบพลัน และ รูปแบบเรื้อรังเช่นเดียวกับบน
b) ไม่ทราบสาเหตุโดยไม่ทราบสาเหตุ และ c) อาการ [โรคปอดบวมจากไวรัส (เฉพาะ agglutinins เย็นเท่านั้น), มะเร็งเม็ดเลือดขาวน้ำเหลืองเรื้อรัง, reticulosarcoma, lymphosarcoma, systemic lupus erythematosus (ส่วนใหญ่อบอุ่น, มักไม่ค่อยมี agglutinins เย็น), ซิฟิลิส (agglutinins เย็น), เนื้องอกรังไข่ (Miescher กับพนักงาน))
c) อาการ [โรคปอดบวมจากไวรัส (agglutinins เย็นเท่านั้น), มะเร็งเม็ดเลือดขาวน้ำเหลืองเรื้อรัง, reticulosarcoma, lymphosarcoma, lupus erythematosus ระบบ (ส่วนใหญ่อบอุ่น, มักไม่ค่อยเย็น agglutinins), ซิฟิลิส (agglutinins เย็น), เนื้องอกรังไข่ (Miescher และเพื่อนร่วมงาน))

คลินิกโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกการพัฒนาภายใต้อิทธิพลของร่างกายแพ้ภูมิตัวเองนั้นมีความหลากหลายมากดังนั้นจึงแทบจะเป็นไปไม่ได้เลยที่จะดึงเอาลักษณะทั่วไปออกมา ภาพทางคลินิก- คนทุกวัยและทั้งสองเพศได้รับผลกระทบเท่าเทียมกัน ถึงกระนั้น ดูเหมือนว่ารูปแบบที่ไม่ทราบสาเหตุจะพบได้บ่อยในผู้หญิง (กระสอบและคนงาน)

ภาพทางคลินิกของรูปแบบที่ไม่ทราบสาเหตุขึ้นอยู่กับความรุนแรงของโรค ใน กรณีเรื้อรังการโจมตีจะค่อยเป็นค่อยไปโรคจะดำเนินต่อไปหลายปีและมีอาการกำเริบบ่อยครั้ง ความรุนแรงของโรคโลหิตจางจะแตกต่างกันไปขึ้นอยู่กับระดับของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก สังเกตการลดลงของฮีโมโกลบินมากถึง 10% ในกรณีอื่นเฮโมโกลบินยังคงอยู่ที่ 50-60% เป็นเวลานาน ความรุนแรงของการเกิด reticulocytosis และการเปลี่ยนสีของผิวหนังและซีรั่มนั้นสอดคล้องกับระดับของภาวะเม็ดเลือดแดงแตก บิลิรูบินพบได้น้อยมากในปัสสาวะเนื่องจากไม่ผ่านไต แต่สังเกตพบฮีโมโกลบินนูเรีย ในกรณีเรื้อรัง ม้ามมักจะขยายใหญ่ขึ้นและอาจถึงขนาดที่สำคัญมากด้วยซ้ำ แต่ในกรณีอื่น ๆ ก็ยังรู้สึกได้ ตับไม่ค่อยขยายใหญ่

ในเลือดเป็นส่วนใหญ่มีการสังเกต Macrocytosis ใน ระยะเฉียบพลันนอกจากนี้ยังมีไมโครไซต์จำนวนมาก normoblastosis และ polychromasia ไม่ค่อยขาด เม็ดเลือดขาวสามารถเข้าถึง 30,000 เกล็ดเลือดเป็นเรื่องปกติ อย่างไรก็ตาม ในบางกรณีอาจเกิดภาวะเกล็ดเลือดต่ำอย่างรุนแรง อีแวนส์อธิบายกรณีเหล่านี้ด้วยการมีแอนติบอดีต่อเกล็ดเลือดพร้อมกันเพื่อให้เกิดพร้อมกัน โรคโลหิตจาง hemolyticและภาวะเกล็ดเลือดต่ำเนื่องจากการกระทำของร่างกายแพ้ภูมิตัวเอง - Evans syndrome ความต้านทานต่อออสโมซิสจะลดลงเล็กน้อย แต่ไม่เท่าเดิมและไม่ถาวรเท่ากับในภาวะโลหิตจางจากเซลล์ทรงกลมตามรัฐธรรมนูญ การทดสอบความต้านทานความร้อน (Hegglin-Maier) หลังจากผ่านไป 6 ชั่วโมง อาจทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกเล็กน้อย (การสังเกตของตัวเอง) แต่จะมีระดับน้อยกว่าสำหรับโรคโลหิตจาง Marchiafava เฮโมซิเดรินยังพบได้ในปัสสาวะ (การสังเกตของตัวเอง)

แอนติบอดีซึ่งตั้งอยู่บนพื้นผิวของเม็ดเลือดแดงสามารถอยู่ในสถานะคงที่หรืออิสระก็ได้ พลาสมาในเลือด- ขึ้นอยู่กับสถานะของแอนติบอดี ปฏิกิริยาคูมบ์สทั้งทางตรงและทางอ้อมจะดำเนินการ หากมีเหตุผลที่เชื่อได้ว่าแอนติบอดีติดอยู่บนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดง จะทำการทดสอบคูมบ์สโดยตรง ในกรณีนี้การทดสอบจะเกิดขึ้นในขั้นตอนเดียว - การเพิ่ม เซรั่มแอนติโกลบูลิน- หากมีแอนติบอดีที่ไม่สมบูรณ์บนผิวเม็ดเลือดแดง การเกาะติดกันเซลล์เม็ดเลือดแดง

ปฏิกิริยาทางอ้อม

ปฏิกิริยาคูมบ์สทางอ้อมเกิดขึ้นใน 2 ระยะ ก่อนอื่นคุณต้องใช้งานแบบเทียม อาการแพ้เซลล์เม็ดเลือดแดง เมื่อต้องการทำเช่นนี้ เซลล์เม็ดเลือดแดงและซีรั่มในเลือดที่กำลังทดสอบจะถูกบ่ม ซึ่งทำให้แอนติบอดีจับตัวอยู่บนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดง หลังจากนั้นขั้นตอนที่สองของการทดสอบคูมบ์สจะดำเนินการ - การเติมซีรั่มแอนติโกลบูลิน

ปฏิกิริยาการตกตะกอน - RP (จากภาษาละติน praecipilo ถึง precipitate) คือการก่อตัวและการตกตะกอนของคอมเพล็กซ์ของแอนติเจนโมเลกุลที่ละลายน้ำได้กับแอนติบอดีในรูปของความขุ่นที่เรียกว่า ตะกอน- มันเกิดขึ้นเมื่อแอนติเจนและแอนติบอดีผสมกันในปริมาณที่เท่ากัน ส่วนเกินหนึ่งในนั้นจะช่วยลดระดับการก่อตัวของภูมิคุ้มกันที่ซับซ้อน ปฏิกิริยาการตกตะกอนจะดำเนินการในหลอดทดลอง (ปฏิกิริยาการตกตะกอนแบบวงแหวน) ในเจล ตัวกลางของสารอาหาร ฯลฯ ความหลากหลายของปฏิกิริยาการตกตะกอนในวุ้นกึ่งของเหลวหรือเจลอะกาโรส ดับเบิลอิมมูโนดิฟฟิวชันโดย Ouchterlony, การแพร่กระจายของภูมิคุ้มกันแบบเรเดียป, อิมมูโนเอเพคโตรโฟรีซิสฯลฯ

ปฏิกิริยาการตกตะกอนของวงแหวน- ปฏิกิริยาจะดำเนินการในหลอดตกตะกอนแคบ: แอนติเจนที่ละลายได้จะถูกวางลงบนซีรั่มภูมิคุ้มกัน ด้วยอัตราส่วนที่เหมาะสมของแอนติเจนและแอนติบอดี ชั้นทึบแสงจะเกิดขึ้นที่ขอบของสารละลายทั้งสองนี้ แหวนตกตะกอน- หากใช้สารสกัดเนื้อเยื่อต้มและกรองเป็นแอนติเจนในปฏิกิริยา ปฏิกิริยานี้เรียกว่าปฏิกิริยาเทอร์โมตกตะกอนครั้งแรก (ปฏิกิริยาที่ตรวจพบโรคแอนแทรกซ์)
ปฏิกิริยาภูมิคุ้มกันแบบ Double Immunodiffusion ของ Ouchterlony- เพื่อตั้งค่าปฏิกิริยา ให้เทเจลวุ้นที่ละลายแล้วเป็นชั้นบาง ๆ ลงบนจานแก้ว และหลังจากแข็งตัวแล้ว จะมีการตัดหลุมในนั้นออกไป
แอนติเจนและซีรั่มภูมิคุ้มกันจะถูกวางแยกกันในหลุมของเจล ซึ่งกระจายเข้าหากัน ที่จุดนัดพบจะเกิดตะกอนเป็นแถบสีขาวในสัดส่วนที่เท่ากัน ในระบบหลายองค์ประกอบ มีการตกตะกอนหลายสายปรากฏขึ้นระหว่างหลุมที่มีแอนติเจนและแอนติบอดี ใน AG ที่เหมือนกัน เส้นที่ตกตะกอนจะรวมกัน ใน AG ที่ไม่เหมือนกัน พวกมันจะตัดกันปฏิกิริยาการแพร่กระจายของภูมิคุ้มกันในแนวรัศมี
เทเซรั่มภูมิคุ้มกันที่มีเจลวุ้นหลอมเหลวลงบนแก้วอย่างสม่ำเสมอ หลังจากการแข็งตัวในเจล จะมีการสร้างหลุมเพื่อใส่แอนติเจนในการเจือจางต่างๆแอนติเจนที่แพร่กระจายเข้าไปในเจลจะสร้างเขตตกตะกอนรูปวงแหวนรอบๆ บ่อด้วยแอนติบอดี เส้นผ่านศูนย์กลางของวงแหวนตกตะกอนเป็นสัดส่วนกับความเข้มข้นของแอนติเจน
ปฏิกิริยานี้ใช้เพื่อกำหนดอิมมูโนโกลบูลินประเภทต่างๆ ส่วนประกอบของระบบเสริม ฯลฯ ในซีรั่มในเลือดอิมมูโนอิเล็กโทรโฟรีซิส

- การรวมกันของวิธีการอิเล็กโตรโฟเรซิสและอิมมูโนพรีซิพีเทชัน: นำส่วนผสมของแอนติเจนเข้าไปในบ่อของเจลและแยกในเจลโดยใช้อิเล็กโตรโฟรีซิสจากนั้นอิมมูโนเซอรัมจะถูกเพิ่มเข้าไปในร่องขนานกับโซนอิเล็กโตรโฟรีซิสซึ่งเป็นแอนติบอดีที่แพร่กระจายเข้าไปใน เจลและก่อตัวเป็นเส้นตกตะกอนบริเวณที่ "ประชุม" กับแอนติเจนปฏิกิริยาการตกตะกอน

(ตาม Ramon) (จากภาษาละติน f1oecus - เกล็ดขนแกะ) - การปรากฏตัวของสีเหลือบหรือมวลตกตะกอน (การตกตะกอนของภูมิคุ้มกัน) ในหลอดทดลองระหว่างปฏิกิริยาสารพิษ - แอนติทอกซินหรือทอกซอยด์ - แอนติทอกซิน ใช้เพื่อกำหนดกิจกรรมของเซรั่มต้านพิษหรือทอกซอยด์ การพิมพ์ HLAอาจแตกต่างกันมาก - การจำแนกทางชีวภาพ (ประเภท HLA ได้รับการถ่ายทอดพร้อมกับยีนของผู้ปกครอง) การกำหนดความโน้มเอียง โรคต่างๆการคัดเลือกผู้บริจาคเพื่อการปลูกถ่ายอวัยวะ - เป็นการเปรียบเทียบผลลัพธ์ของการพิมพ์ HLA ของเนื้อเยื่อผู้บริจาคและผู้รับ การใช้การพิมพ์ HLA จะพิจารณาว่าคู่สมรสมีความคล้ายคลึงหรือต่างกันอย่างไรในแง่ของแอนติเจนที่เข้ากันได้ของเนื้อเยื่อ เพื่อวินิจฉัยภาวะมีบุตรยาก

การพิมพ์ HLA แนะนำ การวิเคราะห์ความหลากหลายของ HLAและดำเนินการในสองวิธี - พันธุกรรมทางเซรุ่มวิทยาและอณูพันธุศาสตร์ วิธีการทางเซรุ่มวิทยาแบบคลาสสิกของการพิมพ์ HLA นั้นใช้การทดสอบ microlymphocytotoxic และวิธีการทางโมเลกุลใช้ PCR (ปฏิกิริยาลูกโซ่โพลีเมอเรส)

เซรุ่มวิทยา การพิมพ์ HLAดำเนินการกับประชากรเซลล์ที่แยกได้ แอนติเจนที่ซับซ้อนของความเข้ากันได้ทางจุลพยาธิวิทยาที่สำคัญส่วนใหญ่ดำเนินการโดยเซลล์เม็ดเลือดขาว ดังนั้นสารแขวนลอยของ T lymphocytes จึงถูกใช้เป็นพาหะหลักของแอนติเจนคลาส I และสารแขวนลอยของ B lymphocytes เพื่อตรวจหาแอนติเจน HLA คลาส II เพื่อแยกประชากรเซลล์ที่ต้องการออกจากเลือดครบส่วน จะใช้การหมุนเหวี่ยงหรือการแยกทางอิมมูโนแมกเนติก เชื่อกันว่าวิธีแรกสามารถนำไปสู่ข้อมูลที่เป็นบวกลวงได้ เนื่องจากส่งผลให้เซลล์บางเซลล์เสียชีวิต วิธีที่สองได้รับการยอมรับว่ามีความเฉพาะเจาะจงมากขึ้น - มากกว่า 95% ของเซลล์ยังคงทำงานได้

แต่เป็นพื้นฐานในการทำการทดสอบ lymphocytotoxic การพิมพ์ HLAเป็นซีรั่มเฉพาะที่มีแอนติบอดีต่ออัลลีลต่างๆ ของแอนติเจน HLA คลาส I และ II การทดสอบทางเซรุ่มวิทยาสามารถระบุชนิดของ HLA ได้โดยการตรวจสอบว่าซีรั่มใดทำปฏิกิริยากับเซลล์เม็ดเลือดขาว และชนิดใดที่ไม่ทำ

หากเกิดปฏิกิริยาระหว่างเซลล์กับซีรั่ม ผลที่ได้คือการก่อตัวของแอนติเจนและแอนติบอดีที่ซับซ้อนบนพื้นผิวของเซลล์ หลังจากเติมสารละลายที่มีส่วนเสริมแล้ว การสลายเซลล์และความตายจะเกิดขึ้น การทดสอบการพิมพ์ HLA ทางซีรัมวิทยาได้รับการประเมินโดยใช้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนซ์เพื่อประเมินปฏิกิริยาเชิงบวก (เรืองแสงสีแดง) และเชิงลบ (เรืองแสงสีเขียว) หรือใช้กล้องจุลทรรศน์คอนทราสต์เฟสเพื่อย้อมสีนิวเคลียสของเซลล์ที่ตายแล้ว ผลลัพธ์ของการพิมพ์ HLA นั้นได้มาจากความจำเพาะของซีรั่มที่ทำปฏิกิริยาและกลุ่มแอนติเจนที่ทำปฏิกิริยาข้าม และความรุนแรงของปฏิกิริยาความเป็นพิษต่อเซลล์

ข้อเสียของเซรุ่มวิทยา การพิมพ์ HLAคือการมีอยู่ของปฏิกิริยาข้าม ความสัมพันธ์ของแอนติบอดีที่อ่อนแอ หรือมีการแสดงออกของแอนติเจน HLA ต่ำ การไม่มีผลิตภัณฑ์โปรตีนในยีน HLA จำนวนหนึ่ง

วิธีการทางโมเลกุลที่ทันสมัยยิ่งขึ้น การพิมพ์ HLAพวกเขาใช้ตัวอย่างสังเคราะห์ที่ได้มาตรฐานอยู่แล้วซึ่งไม่ทำปฏิกิริยากับแอนติเจนบนพื้นผิวของเม็ดเลือดขาว แต่ทำปฏิกิริยากับ DNA และระบุโดยตรงว่ามีแอนติเจนใดบ้างที่มีอยู่ในตัวอย่าง วิธีทางโมเลกุลไม่ต้องการเม็ดเลือดขาวที่มีชีวิต เซลล์ของมนุษย์สามารถศึกษาได้และเลือดไม่กี่ไมโครลิตรก็เพียงพอที่จะทำงานหรือคุณสามารถ จำกัด ตัวเองให้ขูดออกจากเยื่อเมือกในช่องปากได้

อณูพันธุศาสตร์ การพิมพ์ HLAใช้วิธีการ PCR ขั้นตอนแรกคือการได้รับ DNA จีโนมบริสุทธิ์ (จากเลือดครบส่วน สารแขวนลอยของเม็ดเลือดขาว และเนื้อเยื่อ)

จากนั้น ตัวอย่าง DNA จะถูกคัดลอก - ขยายในหลอดทดลองโดยใช้ไพรเมอร์ (DNA สายเดี่ยวแบบสั้น) ซึ่งจำเพาะต่อตำแหน่ง HLA ที่เฉพาะเจาะจง ส่วนปลายของไพรเมอร์แต่ละคู่จะต้องประกอบกันอย่างเคร่งครัดกับลำดับเฉพาะที่สอดคล้องกับอัลลีลเฉพาะ มิฉะนั้น การขยายจะไม่เกิดขึ้น

หลังจาก PCR ปรากฎว่าระหว่างการคัดลอกซ้ำ จำนวนมากชิ้นส่วนดีเอ็นเอซึ่งสามารถประเมินได้ด้วยสายตา เมื่อต้องการทำเช่นนี้ ส่วนผสมของปฏิกิริยาจะต้องผ่านกระบวนการอิเล็กโทรไลซิสหรือไฮบริไดเซชัน และดูว่ามีการขยายสัญญาณเฉพาะหรือไม่นั้นจะถูกกำหนดโดยใช้โปรแกรมหรือตาราง ผลลัพธ์ของการพิมพ์ HLA นำเสนอในรูปแบบรายงานที่ครอบคลุมระดับยีนและอัลลีล เนื่องจากได้มาตรฐานของตัวอย่างที่ใช้โมเลกุล การพิมพ์ HLAทางเซรุ่มวิทยาที่แม่นยำยิ่งขึ้น นอกจากนี้ยังให้ข้อมูลเพิ่มเติม (อัลลีล DNA ใหม่เพิ่มเติม) และอื่นๆ อีกมากมาย ระดับสูงรายละเอียดเนื่องจากทำให้สามารถระบุได้ไม่เพียง แต่แอนติเจนเท่านั้น แต่ยังรวมถึงอัลลีลด้วยซึ่งกำหนดว่าแอนติเจนใดที่มีอยู่ในเซลล์

ปฏิกิริยาสลายภูมิคุ้มกันปฏิกิริยานี้ขึ้นอยู่กับความสามารถของแอนติบอดีจำเพาะในการสร้างสารเชิงซ้อนภูมิคุ้มกันกับเซลล์ รวมถึงเม็ดเลือดแดงและแบคทีเรีย ซึ่งนำไปสู่การกระตุ้นการทำงานของระบบเสริมตามวิถีดั้งเดิมและการสลายเซลล์ ในบรรดาปฏิกิริยาสลายภูมิคุ้มกันนั้น ปฏิกิริยาการแตกของเม็ดเลือดแดงมักถูกใช้บ่อยที่สุด และปฏิกิริยาการสลายของแบคทีเรียนั้นไม่ค่อยได้ใช้ (โดยส่วนใหญ่อยู่ที่การแยกความแตกต่างของอหิวาตกโรคและวิบริโอที่คล้ายอหิวาตกโรค)

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกภายใต้อิทธิพลของปฏิกิริยากับแอนติบอดีเมื่อมีส่วนประกอบเสริมเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มีเมฆมากจะกลายเป็นของเหลวใสสีแดงสด - "เลือดแล็คเกอร์" เนื่องจากการปล่อยเฮโมโกลบิน เมื่อตั้งค่าปฏิกิริยาการตรึงส่วนเสริมการวินิจฉัย (FFR) ปฏิกิริยาการแตกของเม็ดเลือดแดงจะถูกใช้เป็นตัวบ่งชี้: เพื่อทดสอบการมีอยู่หรือไม่มี (การตรึง) ของส่วนเสริมอิสระ

ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกเฉพาะที่ในเจล(ปฏิกิริยาเออร์น) ถือเป็นปฏิกิริยาหนึ่งของปฏิกิริยาภาวะเม็ดเลือดแดงแตก ช่วยให้คุณสามารถกำหนดจำนวนเซลล์ที่สร้างแอนติบอดีได้ จำนวนเซลล์ที่หลั่งแอนติบอดี - ฮีโมไลซิน - ถูกกำหนดโดยจำนวนแผ่นเม็ดเลือดแดงแตกที่ปรากฏในเจลวุ้นที่มีเม็ดเลือดแดงซึ่งเป็นสารแขวนลอยของเซลล์ของเนื้อเยื่อน้ำเหลืองที่กำลังศึกษาและเสริม

วิธีอิมมูโนฟลูออเรสเซนต์

(RIF, ปฏิกิริยาอิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์) เป็นวิธีการตรวจจับ Ags (Abs) ที่เฉพาะเจาะจงโดยใช้ Abs (Ags) คอนจูเกตกับฟลูออโรโครม มีความไวและความจำเพาะสูง ใช้สำหรับวินิจฉัยการติดเชื้อแบบด่วน โรค (การระบุเชื้อโรคในเอกสารการวิจัย) เช่นเดียวกับการกำหนด Ab และตัวรับที่พื้นผิวและเครื่องหมายของเม็ดเลือดขาว (อิมมูโนฟีโนไทป์) และเซลล์อื่น ๆ โดยตรงประกอบด้วยการประมวลผลส่วนของเนื้อเยื่อหรือสเมียร์จากวัสดุทางพยาธิวิทยาหรือเปลือกจุลินทรีย์ที่มี Abs เฉพาะที่เชื่อมต่อกับฟลูออโรโครม สารเตรียมจะถูกล้างเพื่อกำจัด Abs ที่ไม่ได้ผูกไว้ และตรวจสอบภายใต้กล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์ ในกรณีที่เป็นบวก คอมเพล็กซ์ภูมิคุ้มกันเรืองแสงจะปรากฏขึ้นรอบๆ ขอบของวัตถุ จำเป็นต้องมีการควบคุมเพื่อแยกการเรืองแสงที่ไม่จำเพาะเจาะจงออก ที่ ทางอ้อม ฉัน.ในระยะแรกส่วนเนื้อเยื่อหรือสเมียร์จะได้รับการรักษาด้วยสารที่ไม่เรืองแสงโดยเฉพาะในระยะที่สองโดยใช้สารเรืองแสงกับ-โกลบูลินของสัตว์ที่ใช้ในระยะแรก ในกรณีที่เป็นบวก จะเกิดสารเชิงซ้อนการส่องสว่างซึ่งประกอบด้วย Ar, At to it และ At เทียบกับ At (วิธีแซนด์วิช) นอกจากกล้องจุลทรรศน์ฟลูออเรสเซนต์แล้ว RIF ยังใช้เพื่อคำนึงถึงฟีโนไทป์ของเซลล์ด้วย เครื่องคัดแยกเซลล์ด้วยเลเซอร์ .

โฟลว์ไซโตเมทรี- วิธีการวัดค่าพารามิเตอร์ของเซลล์ ออร์แกเนลล์ของเซลล์ และกระบวนการที่เกิดขึ้นในเซลล์ด้วยแสง

เทคนิคนี้เกี่ยวข้องกับการตรวจจับการกระเจิงของแสงจากลำแสงเลเซอร์เมื่อเซลล์ผ่านไปในกระแสของเหลว และระดับการกระจายแสงทำให้เข้าใจขนาดและโครงสร้างของเซลล์ได้ นอกจากนี้ การวิเคราะห์ยังคำนึงถึงระดับการเรืองแสงของสารประกอบเคมีที่เป็นส่วนหนึ่งของเซลล์ (ออโตฟลูออเรสเซนซ์) หรือเพิ่มลงในตัวอย่างก่อนโฟลว์ไซโตเมทรี

สารแขวนลอยของเซลล์ซึ่งมีการติดฉลากไว้ล่วงหน้าด้วยโมโนโคลนอลแอนติบอดีเรืองแสงหรือสีย้อมฟลูออเรสเซนต์ เข้าสู่กระแสของของไหลที่ไหลผ่านเซลล์ไหล เงื่อนไขจะถูกเลือกในลักษณะที่เซลล์เรียงกันเนื่องจากสิ่งที่เรียกว่า การโฟกัสแบบอุทกพลศาสตร์ของเจ็ทในเจ็ท ในขณะที่เซลล์ตัดผ่านลำแสงเลเซอร์ เครื่องตรวจจับจะบันทึก:

การกระเจิงของแสงในมุมเล็กๆ (ตั้งแต่ 1° ถึง 10°) (คุณลักษณะนี้ใช้เพื่อกำหนดขนาดของเซลล์)

การกระเจิงของแสงที่มุม 90° (ช่วยให้เราสามารถตัดสินอัตราส่วนนิวเคลียส/ไซโตพลาสซึม ตลอดจนความหลากหลายและรายละเอียดของเซลล์)

ความเข้มของแสงเรืองแสงผ่านช่องเรืองแสงหลายช่อง (ตั้งแต่ 2 ถึง 18-20) - ช่วยให้คุณสามารถกำหนดองค์ประกอบประชากรย่อยของสารแขวนลอยของเซลล์ ฯลฯ

การทดสอบแอนติโกลบูลินหรือการทดสอบคูมบ์สดำเนินการเพื่อระบุแอนติบอดีจำเพาะที่โจมตีสีแดง เซลล์เม็ดเลือด(เม็ดเลือดแดง)

แอนติบอดีคือโปรตีนที่ผลิตโดยระบบภูมิคุ้มกัน โดยทั่วไปแล้ว แอนติบอดีจะจับกับสารแปลกปลอม เช่น แบคทีเรียและไวรัส แล้วทำลายสิ่งเหล่านั้น

คลินิกของเรามีผู้เชี่ยวชาญเฉพาะทางในเรื่องนี้

(ผู้เชี่ยวชาญ 4 คน)

2. เหตุใดจึงต้องมีการทดสอบแอนติบอดี?

การทดสอบแอนติบอดีอาจทำได้ในกรณีต่อไปนี้:

ก่อนการถ่ายเลือด

คุณคงรู้ว่าคน ๆ หนึ่งสามารถมีกรุ๊ปเลือดได้หนึ่งในสี่กรุ๊ป และสามารถทำการทดสอบแอนติโกลบูลินเพื่อตรวจสอบความเป็นไปได้ของการถ่ายเลือด หากคุณได้รับการถ่ายเลือด เลือดของผู้บริจาคจะต้องตรงกับประเภทของคุณ (มีแอนติเจนเหมือนกัน) หากแอนติเจนแตกต่างกันระหว่างการถ่ายเลือด ระบบภูมิคุ้มกันจะทำลายเซลล์ที่ถูกถ่ายโอน ซึ่งอาจนำไปสู่ โรคร้ายแรงและแม้กระทั่งความตาย นี่คือเหตุผลว่าทำไมการค้นหากรุ๊ปเลือดที่ถูกต้องจึงมีความสำคัญมาก

เพื่อระบุความเสี่ยงของการแพ้ Rh

จำพวกเป็นแอนติเจน ชื่อเต็มคือ Rh factor การทดสอบคูมบ์สใช้เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อปัจจัย Rh ในเลือดของหญิงตั้งครรภ์ หากผู้หญิงที่มีเลือด Rh เป็นลบ กำลังตั้งครรภ์ลูกที่มีปัจจัย Rh เป็นบวก (สามารถส่งต่อจากพ่อได้) ก็มีความเสี่ยงที่จะเกิดอาการแพ้ Rh อาการแพ้ Rh เกิดขึ้นเมื่อเลือดของทารกผสมกับเลือดของแม่ในระหว่างตั้งครรภ์หรือการคลอดบุตร หากกรุ๊ปเลือดของแม่เข้ากันไม่ได้กับกรุ๊ปเลือดของทารก ระบบภูมิคุ้มกันของเธออาจโจมตีทารกในครรภ์โดยมองว่าเป็นสิ่งแปลกปลอม ในกรณีนี้อาจเกิดโรคร้ายแรงที่เรียกว่าเม็ดเลือดแดงในครรภ์ได้ ใน ในบางกรณีหากไม่รักษาโรค ทารกในครรภ์หรือทารกแรกเกิดอาจเสียชีวิตได้

ผู้หญิงที่มีเลือด Rh ลบอาจได้รับการฉีด gammaglobulin anti-Rh (เช่น RhoGAM) ซึ่งใช้เพื่อป้องกันการพัฒนาของ Rh โรคเม็ดเลือดแดงแตก.

สำหรับการวินิจฉัยโรคโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิต้านตนเอง

โรคโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกอัตโนมัติคือ โรคที่หายากเกี่ยวข้องกับการก่อตัวของแอนติบอดีต่อแอนติเจนในตนเองของเม็ดเลือดแดง

3. ประเภทของการทดสอบแอนติโกลบูลิน

การทดสอบแอนติโกลบูลินมีสองประเภทหรือการทดสอบคูมบ์ส: ทางตรงและทางอ้อม

การทดสอบโดยตรงคูมบ์สหรือการทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงตรวจจับแอนติบอดีที่จับกับเซลล์เม็ดเลือดแดง มันถูกใช้เพื่อระบุภาวะโลหิตจาง ในโรคนี้เซลล์เม็ดเลือดแดงจะถูกทำลายเร็วกว่าที่ผลิตได้

การทดสอบคูมบ์สทางอ้อมหรือการทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมดำเนินการค้นหาแอนติบอดีที่ไม่เกี่ยวข้องกับเซลล์เม็ดเลือดแดง การทดสอบใช้ซีรั่มในเลือดซึ่งมีแอนติบอดี ขั้นตอนนี้ค่อนข้างหายาก: ส่วนใหญ่จะดำเนินการเพื่อตรวจสอบความเป็นไปได้ของการถ่ายเลือดหรือเป็นขั้นตอนของการตรวจหญิงตั้งครรภ์

4. ผลลัพธ์ของปฏิกิริยาคูมบ์ส

บรรทัดฐาน:

ผลการทดสอบเป็นลบ - ตรวจไม่พบแอนติบอดี

• การทดสอบคูมบ์สโดยตรง- การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงเป็นลบหมายความว่าเลือดของคุณไม่มีแอนติบอดีที่เกี่ยวข้องกับเซลล์เม็ดเลือดแดง
• การทดสอบทางอ้อมคูมบ์ส- ผลการทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมที่เป็นลบหมายความว่าเลือดของคุณเข้ากันได้กับเลือดของผู้บริจาค สำหรับหญิงตั้งครรภ์ ผลลัพธ์นี้หมายความว่าร่างกายของเธอไม่ได้ผลิตแอนติบอดีต่อหมู่เลือด Rh-positive ของลูก (ไม่เกิดอาการแพ้ Rh)

การเบี่ยงเบนจากบรรทัดฐาน:

• การทดสอบคูมบ์สโดยตรง- การทดสอบแอนติโกลบูลินโดยตรงที่เป็นบวกหมายความว่าเลือดของคุณมีแอนติบอดีที่ต่อสู้กับเซลล์เม็ดเลือดแดง สาเหตุนี้อาจเกิดจากการถ่ายเลือดที่เข้ากันไม่ได้หรือโรคต่างๆ เช่น โรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกหรือโรคเม็ดเลือดแดงแตกในทารกแรกเกิด (HDN)
• การทดสอบทางอ้อมคูมบ์ส- การทดสอบแอนติโกลบูลินทางอ้อมที่เป็นบวกหมายความว่าเลือดของคุณเข้ากันไม่ได้กับเลือดของผู้บริจาค ในหญิงตั้งครรภ์ ผลลัพธ์ดังกล่าวหมายถึงการมีอยู่ของแอนติบอดีต่อปัจจัย Rh ที่เป็นบวกของเลือดของเด็ก (การแพ้ Rh) หากทารกมีปัจจัยเลือด Rh เป็นบวก แพทย์จะดูแลแม่อย่างใกล้ชิดตลอดการตั้งครรภ์

การทดสอบคูมบ์ส

การทดสอบคูมบ์ส– การทดสอบแอนติโกลบูลินมีวัตถุประสงค์เพื่อระบุแอนติบอดีต่อต้านเม็ดเลือดแดงที่ไม่สมบูรณ์ในเลือด Rh-negative ต่อปัจจัย Rh ซึ่งเป็นโปรตีนเฉพาะที่อยู่บนพื้นผิวของเม็ดเลือดแดงของเลือด Rh-positive การทดสอบนี้มีสองประเภท: การตรวจหาแอนติบอดีโดยตรงบนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดง การตรวจหาแอนติบอดีในซีรัมในเลือดโดยอ้อม การทดสอบโดยตรงดำเนินการในการวินิจฉัยและติดตามการรักษาโรคเลือด: โรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตก, โรคเม็ดเลือดแดงแตกในทารกแรกเกิดและอื่น ๆ การทดสอบทางอ้อมดำเนินการเพื่อประเมินความเข้ากันได้ของเลือดของผู้บริจาคและผู้รับในระหว่างการถ่ายเลือด ตลอดจนเพื่อระบุการมีอยู่และความเสี่ยงของความขัดแย้ง Rh เมื่อวางแผนและจัดการการตั้งครรภ์ วัสดุสำหรับการทดสอบคูมบ์สคือ เลือดดำการศึกษาดำเนินการโดยใช้วิธีการตามปฏิกิริยาการเกาะติดกัน โดยปกติแล้วการทดสอบทั้งสองอย่างจะให้ผลลัพธ์เป็นลบ การวิเคราะห์จะเสร็จสิ้นภายในหนึ่งวัน

การทดสอบคูมบ์ส – การทดลองทางคลินิกเลือด Rh-negative มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อปัจจัย Rh การทดสอบนี้ใช้เพื่อระบุความเสี่ยงในการเกิดความขัดแย้งของ Rh และปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก ในแต่ละคนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดงมีชุดของแอนติเจนหรือ agglutinogens บางชุด - สารประกอบที่มีลักษณะต่าง ๆ การมีหรือไม่มีซึ่งใช้ในการกำหนดกรุ๊ปเลือดและปัจจัย Rh แอนติเจนมีหลายประเภทได้แก่ การปฏิบัติทางการแพทย์ Agglutinogens A และ B ซึ่งเป็นตัวกำหนดหมู่เลือด และ agglutinogen D ซึ่งเป็นปัจจัย Rh มีความสำคัญในทางปฏิบัติมากที่สุด หากปัจจัย Rh เป็นบวก จะตรวจพบแอนติเจน D ที่เยื่อหุ้มด้านนอกของเม็ดเลือดแดง แต่หากปัจจัยลบจะตรวจไม่พบ

การทดสอบคูมบ์สหรือที่เรียกว่าการทดสอบแอนติโกลบูลิน มีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อต้านเม็ดเลือดแดงที่ไม่สมบูรณ์ต่อระบบ Rh factor ในเลือด แอนติบอดีต่อปัจจัย Rh คืออิมมูโนโกลบูลินเฉพาะที่ผลิตในเลือด Rh-negative เมื่อเซลล์เม็ดเลือดแดงที่มี agglutinogens D เข้าไป สิ่งนี้สามารถเกิดขึ้นได้เมื่อเลือดของทารกในครรภ์และหญิงตั้งครรภ์ผสมกันระหว่างการถ่ายเลือดที่ดำเนินการโดยไม่ต้องให้เลือดก่อน กำลังพิมพ์ การทดสอบคูมบ์สมีสองเวอร์ชัน - ทางตรงและทางอ้อม เมื่อดำเนินการ การทดสอบโดยตรงคูมบ์สตรวจพบแอนติบอดีที่ติดอยู่กับผิวเซลล์เม็ดเลือดแดง การศึกษานี้ใช้เพื่อระบุสาเหตุของปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก การทดสอบคูมบ์สทางอ้อมมีวัตถุประสงค์เพื่อตรวจหาแอนติบอดีต่อต้านเม็ดเลือดแดงในเลือด มีความจำเป็นต้องตรวจสอบความเข้ากันได้ของเลือดระหว่างผู้บริจาคและผู้รับหรือแม่และทารกในครรภ์ และช่วยป้องกันการเกิดความขัดแย้งของ Rh และภาวะเม็ดเลือดแดงแตกในภายหลัง

เลือดสำหรับการทดสอบคูมบ์สทั้งสองเวอร์ชันนั้นนำมาจากหลอดเลือดดำ การวิเคราะห์ทำได้โดยการเกาะติดกันโดยใช้ซีรั่มแอนติโกลบูลิน ผลการศึกษานี้ใช้ในโลหิตวิทยาเพื่อระบุสาเหตุของปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก ในการผ่าตัดและการช่วยชีวิตเมื่อทำการถ่ายเลือด ในสูติศาสตร์และนรีเวชวิทยาเมื่อติดตามการตั้งครรภ์ในสตรีที่มีเลือด Rh-ลบ

ข้อบ่งชี้

การทดสอบโดยตรงคูมบ์สซึ่งตรวจจับแอนติบอดีที่ติดอยู่กับพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดงนั้นถูกกำหนดไว้สำหรับปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตก (การทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดง) ของต้นกำเนิดต่างๆ- การศึกษานี้ระบุไว้สำหรับโรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิต้านตนเองขั้นต้น, โรคโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตกหลังการถ่ายเลือด, โรคเม็ดเลือดแดงแตกในทารกแรกเกิด, ภาวะเม็ดเลือดแดงแตกของเม็ดเลือดแดงที่เกิดจากภูมิต้านตนเอง, เนื้องอก หรือ โรคติดเชื้อตลอดจนการต้อนรับ ยาตัวอย่างเช่น ควินิดีน, เมทิลโดปา, โปรไคนาไมด์ การทดสอบคูมบ์สทางอ้อมซึ่งกำหนดแอนติบอดีในพลาสมาเลือดใช้เพื่อป้องกันการพัฒนาความขัดแย้งของ Rh ระบุไว้สำหรับผู้ป่วยในการเตรียมการถ่ายเลือดเช่นเดียวกับหญิงตั้งครรภ์ที่มีปัจจัย Rh ลบโดยมีเงื่อนไขว่าพ่อในอนาคตของเด็กมีปัจจัย Rh บวก

เพื่อตรวจสอบความเข้ากันได้ของ Rh การทดสอบคูมบ์สไม่ได้ถูกกำหนดให้กับผู้ป่วยที่มีเลือด Rh-positive ในกรณีเหล่านี้ มีแอนติเจนอยู่บนผิวเซลล์เม็ดเลือดแดงอยู่แล้ว ไม่สามารถกระตุ้นการผลิตแอนติบอดีได้โดยการถ่ายเลือดหรือการให้เลือดของทารกในครรภ์เข้าสู่กระแสเลือดของหญิงตั้งครรภ์ นอกจากนี้ การศึกษานี้ไม่ได้ระบุไว้สำหรับสตรีมีครรภ์หากทั้งพ่อและแม่มีปัจจัย Rh เป็นลบ - สืบทอดมา ลักษณะด้อย- ลูกในคู่รักเช่นนี้อยู่เสมอ Rh ลบเลือดความขัดแย้งทางภูมิคุ้มกันกับแม่เป็นไปไม่ได้ ในพยาธิสภาพของเม็ดเลือดแดงแตกการทดสอบแอนติโกลบูลินไม่ได้ใช้เพื่อติดตามความสำเร็จของการรักษาเนื่องจากผลลัพธ์ไม่ได้สะท้อนถึงกิจกรรมของกระบวนการทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดง

ข้อจำกัดของการทดสอบคูมบ์สคือความอุตสาหะของขั้นตอนการวิจัย เพื่อให้ได้ผลลัพธ์ที่เชื่อถือได้ จำเป็นต้องปฏิบัติตามเงื่อนไขอุณหภูมิและเวลา กฎเกณฑ์ในการเตรียมรีเอเจนต์และวัสดุชีวภาพ ข้อดีของการทดสอบคูมบ์สคือความไวสูง ในภาวะโลหิตจางจากเม็ดเลือดแดงแตก ผลลัพธ์ของการทดสอบนี้ยังคงเป็นบวก แม้ว่าระดับฮีโมโกลบิน บิลิรูบิน และเรติคูโลไซต์จะเป็นปกติก็ตาม

การเตรียมการวิเคราะห์และรวบรวมวัสดุ

วัสดุที่ใช้ในการทดสอบคูมบ์สคือเลือดดำ ไม่มีข้อกำหนดพิเศษสำหรับเวลาในการเก็บตัวอย่างเลือดและการเตรียมผู้ป่วย เช่นเดียวกับการศึกษาอื่นๆ แนะนำให้หยุดพักหลังรับประทานอาหารอย่างน้อย 4 ชั่วโมง และหยุดสูบบุหรี่ในช่วง 30 นาทีที่ผ่านมา การออกกำลังกาย, หลีกเลี่ยง ความเครียดทางอารมณ์- ควรปรึกษากับแพทย์ของคุณล่วงหน้าถึงความจำเป็นในการหยุดใช้ยา - ยาบางชนิดสามารถบิดเบือนผลการทดสอบคูมบ์สได้ เลือดจะถูกถ่ายโดยใช้หลอดฉีดยาจากหลอดเลือดดำ cubital หรือน้อยกว่านั้นจากหลอดเลือดดำที่หลังมือ ภายในไม่กี่ชั่วโมง วัสดุจะถูกส่งไปยังห้องปฏิบัติการ

เมื่อทำการทดสอบคูมบ์สโดยตรง เซรั่มแอนติโกลบูลินจะถูกเติมลงในซีรัมเลือดของผู้ป่วย หลังจากนั้นครู่หนึ่งจะตรวจสอบส่วนผสมว่ามีเกาะติดกันหรือไม่ - จะเกิดขึ้นหากมีแอนติบอดีในเซลล์เม็ดเลือดแดง หากผลลัพธ์เป็นค่าบวก จะพิจารณาไทเทอร์การจับกลุ่มกัน การทดสอบทางอ้อมคูมบ์สประกอบด้วย มากกว่าขั้นตอน ขั้นแรก แอนติบอดีที่อยู่ในซีรั่มจะถูกจับจ้องไปที่เซลล์เม็ดเลือดแดงที่ฉีดเข้าไปในระหว่างการฟักตัว จากนั้นจึงเติมซีรั่มแอนติโกลบูลินลงในตัวอย่าง หลังจากนั้นครู่หนึ่งจะพิจารณาการมีอยู่และไทเทอร์ของเกาะกลูติเนต ระยะเวลาการวิเคราะห์คือ 1 วัน

ผลลัพธ์ปกติ

โดยปกติ ผลลัพธ์ของการทดสอบคูมบ์สโดยตรงจะเป็นลบ (-) ซึ่งหมายความว่าไม่มีแอนติบอดีที่เกี่ยวข้องกับเซลล์เม็ดเลือดแดงในเลือด และไม่สามารถทำให้เกิดภาวะเม็ดเลือดแดงแตกได้ ผลลัพธ์ปกติการทดสอบคูมบ์สทางอ้อมก็เป็นลบ (-) นั่นคือไม่มีแอนติบอดีต่อปัจจัย Rh ในพลาสมาในเลือด เมื่อเตรียมการถ่ายเลือดให้กับผู้รับ สิ่งนี้หมายถึงความเข้ากันได้กับเลือดของผู้บริจาค เมื่อติดตามการตั้งครรภ์ นี่หมายถึงการไม่มีอาการแพ้ Rh ของมารดา ซึ่งมีความเสี่ยงต่ำที่จะเกิดความขัดแย้งทางภูมิคุ้มกัน ปัจจัยทางสรีรวิทยาเช่นพฤติกรรมการบริโภคอาหารหรือ การออกกำลังกายไม่สามารถส่งผลกระทบต่อผลการทดสอบได้ ดังนั้นหากผลออกมาเป็นบวกจำเป็นต้องปรึกษาแพทย์

ค่าวินิจฉัยของการวิเคราะห์

ผลการทดสอบคูมบ์สที่เป็นบวกจะแสดงออกมาในเชิงคุณภาพ ตั้งแต่ (+) ถึง (++++) หรือเชิงปริมาณ โดยไทเทอร์ตั้งแต่ 1:16 ถึง 1:256 การหาความเข้มข้นของแอนติบอดีต่อเซลล์เม็ดเลือดแดงและซีรั่มในเลือดจะดำเนินการในตัวอย่างทั้งสองประเภท หากการทดสอบโดยตรงของคูมบ์สเป็นบวก แอนติบอดีจะถูกตรวจพบที่เยื่อหุ้มด้านนอกของเซลล์เม็ดเลือดแดง ซึ่งนำไปสู่การทำลายเซลล์เม็ดเลือดเหล่านี้ สาเหตุอาจเกิดจากการถ่ายเลือดโดยไม่ต้องพิมพ์ก่อน - ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกหลังการถ่ายเช่นเดียวกับการเกิดเม็ดเลือดแดงของทารกแรกเกิด, ปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกเนื่องจากการใช้ยา, โรคโลหิตจางเม็ดเลือดแดงแตกภูมิต้านทานตนเองปฐมภูมิหรือทุติยภูมิ การทำลายเซลล์เม็ดเลือดแดงครั้งที่สองอาจเกิดจากโรคลูปัส erythematosus ระบบ, อีแวนส์ซินโดรม, Waldenström macroglobulinemia, ฮีโมโกลบินนูเรียเย็น paroxysmal, มะเร็งเม็ดเลือดขาวลิมโฟไซต์เรื้อรัง, มะเร็งต่อมน้ำเหลือง, mononucleosis ที่ติดเชื้อ, ซิฟิลิส, โรคปอดบวมจากเชื้อไมโคพลาสมา.

ผลบวกของการทดสอบคูมบ์สทางอ้อมบ่งชี้ว่ามีแอนติบอดีต่อปัจจัย Rh ในพลาสมา ในทางปฏิบัติ หมายความว่ามีอาการแพ้ Rh เกิดขึ้น และมีความเป็นไปได้ที่จะเกิดความขัดแย้งระหว่าง Rh ภายหลังการให้เลือดของผู้บริจาคในระหว่างตั้งครรภ์ เพื่อป้องกันภาวะแทรกซ้อนในการตั้งครรภ์ ผู้หญิงที่ผลการทดสอบคูมบ์สเป็นบวกจะได้รับการขึ้นทะเบียนพิเศษ

การรักษาความผิดปกติ

การทดสอบคูมบ์สหมายถึงการศึกษาทางไอโซวิทยา ผลลัพธ์ทำให้สามารถระบุปฏิกิริยาเม็ดเลือดแดงแตกได้ รวมถึงตรวจสอบความเข้ากันได้ของเลือดของผู้บริจาคและผู้รับ แม่และทารกในครรภ์ เพื่อป้องกันการพัฒนาของความขัดแย้ง Rh หากผลการทดสอบเป็นบวก คุณต้องขอคำแนะนำจากแพทย์ที่เข้ารับการรักษา เช่น สูติแพทย์-นรีแพทย์ แพทย์โลหิตวิทยา ศัลยแพทย์

หลักการต่อต้านโกลบูลิน- ตรวจพบแอนติบอดีต่อต้านเม็ดเลือดแดงประเภทที่ไม่สมบูรณ์และโมเลกุลเสริม (C) ที่อยู่บนพื้นผิวของเม็ดเลือดแดง - การทดสอบโดยตรง - โดยการเกาะติดกันเมื่อสัมผัสกับซีรั่มของสัตว์ที่มีแอนติบอดีต่อแอนติโกลบูลินของมนุษย์ (ซีรั่มแอนติโกลบูลิน) ตรวจพบแอนติบอดีบางส่วนที่ปราศจากในซีรั่ม - การทดสอบทางอ้อม - โดยการตรึงไว้บนส่วนผสม เม็ดเลือดแดงปกติกลุ่ม 0 แอนติเจนทั้งหมดที่อยู่ในระบบ Rh ที่รู้จักจากนั้นเกาะติดกันภายใต้อิทธิพลของซีรั่มแอนติโกลบูลิน

วัสดุ รีเอเจนต์สำหรับการทดสอบแอนติโกลบูลินของคูมบ์ส: หลอดทดลอง 10/100 มล.; ปิเปตสำเร็จการศึกษา 1, 2 มล.; ปิเปตปาสเตอร์; ขาตั้งกล้อง; สไลด์แก้วที่ไม่เรียบ สารละลาย NaCl 8.5‰; เซลล์เม็ดเลือดแดง เซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยรวมถึงเซลล์ที่อยู่ในกลุ่ม 0 จะได้รับจากเลือดที่เพิ่งดึงออกมาใหม่โดยใช้สารป้องกันการแข็งตัวของเลือด (สารละลาย EDTA)

ควรเลือกเซลล์เม็ดเลือดแดงกรุ๊ป 0 ในลักษณะที่มาจากคนปกติและมีทั้งหมด แอนติเจน Rh- สามารถเก็บไว้ได้นานถึง 7 วันในพลาสมาอัตโนมัติที่อุณหภูมิ + 4°C ในกรณีที่ไม่มีเซลล์เม็ดเลือดแดงกลุ่ม 0 สามารถใช้โมเสกแอนติเจนที่รู้จัก ส่วนผสมของเซลล์เม็ดเลือดแดงกลุ่ม 0 เซลล์เม็ดเลือดแดง Rh-positive และ Rh-negative สามารถใช้ได้

เซรั่มผู้ป่วยจะต้องได้รับการคัดเลือกใหม่

เซรั่มแอนติโกลบูลินผลิตโดยสถาบัน Dr. I. Cantacuzino มีจำหน่ายในรูปแบบไลโอฟิไลซ์ในหลอดขนาด 1 มล. หลังจากการละลาย ให้เก็บเซรั่มไว้ที่อุณหภูมิ -20°C

เทคนิคการทดสอบแอนติโกลบูลินของคูมบ์ส:
ก) การทดสอบคูมบ์สโดยตรง: ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงของผู้ป่วย 3 ครั้งด้วยสารละลาย NaCl 8.5‰
ใช้เซรั่มแอนติโกลบูลินเจือจางจำนวนมากลงบนสไลด์แก้วหลาย ๆ อันและถัดจากนั้นให้หยดตะกอนเม็ดเลือดแดงของผู้ป่วยเล็กน้อย ผสมหยดกับมุมแก้ว วางวัสดุที่เตรียมไว้ไว้บนโต๊ะเป็นเวลา 5 นาที จากนั้นตรวจดูว่ามีเกาะติดกันหรือไม่ ในกรณีที่ ผลลัพธ์ที่เป็นบวกกำหนดไทเทอร์เกาะติดกันสูงสุด

ข) การทดสอบทางอ้อมคูมบ์ส: เม็ดเลือดแดงของกลุ่ม 0, Rh-positive และ Rh-negative, ล้าง 3 ครั้งด้วยสารละลาย NaCl 8.5‰ และสัมผัสกับซีรั่มของผู้ป่วยในอัตรา 2 หยดของเม็ดเลือดแดงต่อ 8-10 หยดของซีรั่ม จากนั้นบ่มเป็นเวลา 60 นาทีที่ อุณหภูมิ 37° C หลังจากนั้น ให้ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดงอีกครั้งสามครั้งแล้วรักษาด้วยซีรัมแอนติโกลบูลิน ตามคำแนะนำสำหรับการทดสอบคูมบ์สโดยตรง

เมื่อไร เรากำลังพูดถึง เกี่ยวกับแอนติบอดี้ที่ออกฤทธิ์เย็นกระตุ้นเซลล์เม็ดเลือดแดงกลุ่ม 0 เป็นเวลา 60 นาที ที่อุณหภูมิ +4°C

บันทึก 1) อย่าทำการทดสอบคูมบ์สโดยตรงกับเซลล์เม็ดเลือดแดงที่เก็บไว้เป็นเวลาหนึ่งหรือหลายวันที่อุณหภูมิ + 4°C หรืออุณหภูมิห้อง เนื่องจากผลลัพธ์อาจเป็นผลบวกลวงเนื่องจากการตรึงแอนติบอดีที่ออกฤทธิ์เย็นที่ไม่สมบูรณ์ในซีรั่มปกติ 2) ในกรณีที่มีภาวะโปรตีนในเลือดสูงอย่างรุนแรง ให้ล้างเซลล์เม็ดเลือดแดง 4-5 ครั้ง และตรวจสอบการไม่มีโปรตีนในซีรั่มในน้ำยาล้างครั้งสุดท้ายโดยใช้กรดซัลโฟซาลิไซลิก

อาจเกิดการตกค้างของ 2 μg IgG/ml ในตะกอนของเม็ดเลือดแดง ต่อต้านเซรั่มแอนติโกลบูลิน- การทดสอบคูมบ์สยังสามารถทำได้โดยใช้ซีรั่มต่อต้าน IgG, -IgM, -IgA -C3 และ -C4 ที่มีความจำเพาะเจาะจงเดียว เพื่อชี้แจงประเภทของเซลล์ที่อยู่บนพื้นผิวของเซลล์เม็ดเลือดแดง เช่น ในผู้ป่วยที่เป็นโรคเม็ดเลือดแดงแตกจากภูมิต้านตนเอง โรคโลหิตจาง