Diagnosticum Salmonella erythrocyte vi antigeninis skystis. Diagnosticum erythrocyte salmonella o. Ultragarsinis treponeminis antigenas

Diagnosticum Salmonella VI antigeno reagentų rinkinys skirtas specifiniams antikūnams prieš Salmonella typhus VI antigeną žmogaus kraujo serume aptikti pasyvios hemagliutinacijos reakcijos (RPHA) metu.

1. NUSTATYMO CHARAKTERISTIKOS

2.1. Metodo principas.

Aktyvus Diagnosticum Salmonella VI antigeno principas yra Vi-antigenas, fiksuotas raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje. Sąveikaujant su serumais, kuriuose yra antikūnų prieš Vi-antigeną, stebimas eritrocitų agliutinacijos reiškinys.

2.2. NUSTATYTI TURINĮ

Reagentai	Kiekis
Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigeninis skystis- yra formalinizuotų ir jautrintų Salmonella Typho avies eritrocitų su B-antigenu 1 % suspensija fosfatiniame buferiniame tirpale (pH 7,2). + 0,2; koncentracija 0,06 mol/l). Rudos spalvos homogeniška suspensija be dribsnių; nusėdus susidaro 2 sluoksniai: tankios rudos eritrocitų nuosėdos ir skaidrus gelsvas supernatantas	1 buteliukas - 6 ml
Salmonella diagnostinis serumas, adsorbuotas B receptorius, sausas - vienalytė masė nuo baltos su rusvu atspalviu iki smėlio spalvos	1 buteliukas – 0,1 ml
1% formalinizuotų, nejautrintų avių eritrocitų suspensija— vienalytė rudos spalvos suspensija be dribsnių; nusėdus susidaro 2 sluoksniai: tankios rudos eritrocitų nuosėdos ir skaidrus gelsvas supernatantas	1 butelis -
Tirpalas serumui skiesti ir RPGA nustatymui - 0,9% natrio chlorido tirpalas – skaidrus bespalvis skystis, pH nuo 6,5 iki 7,5	2 buteliukai – po 8 ml
Vienkartinė apvaliadugnė plokštelė imunologinėms reakcijoms – susideda iš 8 eilučių, kurių kiekvienoje yra 12 skylių skaidriu, bespalviu, apvaliu dugnu	1 PC

1. ANALITINĖS IR DIAGNOSTINĖS CHARAKTERISTIKOS.

3.1. Diagnostinis preparatas turi būti agliutinuotas RPHA su diagnostiniu Salmonella serumu, adsorbuotu sauso B receptoriaus, praskiedus ne mažiau kaip 1:160.

Sąlyginis sveikų žmonių kraujo serumo diagnostinių charakteristikų lygis turėtų būti laikomas serumo praskiedimu ne didesniu kaip 1:20.

3.2. Analizės laikas: 2 valandos.

3.3. Rinkinyje yra 8 apibrėžimai.

1. ATSARGUMO PRIEMONĖS

Dirbdami su rinkiniu, dirbdami SSRS sveikatos apsaugos ministerijos sanitarinių ir epidemiologinių įstaigų laboratorijose (departamentuose, skyriuose) turite laikytis projektavimo taisyklių, saugos priemonių, pramoninės sanitarijos, antiepideminio režimo ir asmeninės higienos. M., 1981).

Analizuojami serumai, taip pat su jais besiliečiantys reagentai turi būti laikomi potencialiai užkrėstais, galinčiais ilgai išsaugoti arba perduoti ŽIV, hepatito virusą ar bet kurį kitą virusinės infekcijos sukėlėją – su jais reikia elgtis atsargiai:

• dirbti su guminėmis pirštinėmis;
• pipetuojant būtina naudoti automatinius dozatorius;
• baigus darbą, analizuojamus serumus ir su jais besiliečiančius reagentus bei instrumentus apdorokite dezinfekuojančiu tirpalu
• Nuvalykite įrangą 70% etilo alkoholiu prieš ir po naudojimo.

Tiriami serumai turi būti inaktyvuojami 56 0 C temperatūroje 30 minučių.

Rinkinyje esantis diagnostinis Salmonella serumas, adsorbuotas B receptorių, yra sausas ir inaktyvuotas.

Objektyvūs analizės rezultatai garantuojami, jei tenkinamos šios sąlygos:

• Visi rinkinio reagentai turi būti laikomi nuo 2 iki 8 0 C temperatūroje;
• nenaudokite pasibaigusio galiojimo reagentų;
• nenaudokite rinkinio reagentų, jei ant jų pakuotės nėra atitinkamo žymėjimo;
• Norėdami atlikti RPHA, naudokite tik šiame rinkinyje esančius reagentus.

Vi-Diagnosticum

Diagnosticum Vi

Vi-antigeninis

2016-04-04 registracijos liudijimas Nr.RZN 2016/3905

Tikslas

Reagentų rinkinys „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (SED-Vi) skirtas antikūnams prieš vidurių šiltinės sukėlėjo Vi-antigeną aptikti žmogaus kraujo serume, vykstant pasyviosios hemagliutinacijos (RPHA) reakcijai. ).

Rinkinio charakteristikos

Veikimo principas

Esant antikūnams prieš vidurių šiltinės sukėlėją, stebima Vi antigenu įjautrintų viščiukų eritrocitų hemagliutinacija, dėl kurios lėkštės U formos šulinių apačioje susidaro nusistovėjusių eritrocitų „skėtis“. . Nesant antikūnų prieš vidurių šiltinės sukėlėją, nusistovėję raudonieji kraujo kūneliai sudaro „tašką“.

Nustatykite turinį

Reagento pavadinimas	apibūdinimas	Kiekis komplekte
Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen, sausas 6% (EDS)	Formalizuoti vištienos eritrocitai, įjautrinti S. typhi Vi antigenu. Sausa higroskopinė rudos spalvos masė. Ištirpus suspensija yra raudonai rudos spalvos.	1 fl., nuo 0,6 ml
Salmonella diagnostinis serumas adsorbuotas, Vi receptorius, sausas (praskiestas 1:20, (K+))	Triušio serumas Salmonella adsorbuotas, Vi receptorius, praskiestas santykiu 1:20. Sausa higroskopinė baltos spalvos porėta masė. Ištirpinus, tai skaidrus gelsvas arba bespalvis skystis.	1 fl., nuo 0,3 ml
Bandomojo mėginio skiediklis (RSD)	Skaidrus mėlynai violetinės spalvos skystis.	1 fl., 10 ml
Fosfatinis buferinis tirpalas (PBS)	Skaidrus bespalvis skystis.	1 fl., 10 ml
Vienkartinė polimerinė tabletė imunologinėms reakcijoms	Vienkartinė polimerinė tabletė imunologinėms reakcijoms, pagaminta iš skaidraus bespalvio polistireno.	1 PC.

Diagnostinės charakteristikos

Diagnostinis preparatas turi būti agliutinuotas RPHA su diagnostiniu salmonelių serumu, adsorbuotu Vi receptoriumi, sausas (1:20 praskiedimas), iki serumo etiketėje nurodyto titro. Sąlyginis sveikų žmonių kraujo serumo diagnostinių charakteristikų lygis turėtų būti laikomas serumo praskiedimu ne didesniu kaip 1:20. Analizės laikas yra 3040 minučių. Rinkinys skirtas tirti 42 kraujo serumus atrankos parinktyje arba 10 kraujo serumų titravimo parinktyje.

Atsargumo priemonės

Rinkinys skirtas tik in vitro diagnostikai. Į rinkinį įtrauktos medžiagos yra inaktyvuotos ir saugios. Dirbdami su rinkiniu turėtumėte laikytis SP 1.3.2322-08 ir SanPiN 2.1.7.2790-10.

Papildoma įranga ir medžiagos

Įranga, medžiagos, sprendimai:

• 1 kanalo pipetės dozatoriai su kintamu dozavimo tūriu 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl ir 1000 - 5000 µl;
• 8 arba 12 kanalų pipetės dozatoriai su kintamu 5 - 40 µl ir 40 - 200 µl dozavimo tūriu;
• distiliuotas vanduo (GOST 6709-72).

Išanalizuoti pavyzdžiai

Tiriami kraujo serumo mėginiai laikomi 2–8 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 3 dienas nuo kraujo paėmimo momento. Užšaldytas išrūgas galima laikyti ne aukštesnėje kaip minus 18 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 1 metus. Prieš naudojimą mėginiai atšildomi 16–25 °C temperatūroje ir sumaišomi purtant. Pakartotinis užšaldymas neleidžiamas. Mėginių su bakterijų augimu ir hemolize naudoti negalima. Prieš atliekant reakciją, tiriamieji serumai 30 minučių kaitinami 56 °C temperatūroje.

Analizės atlikimas

Kontrolinio diagnostinio serumo (K+) paruošimas

Paruoškite diagnostinio Salmonella serumo, adsorbuoto, Vi receptorių, darbinį tirpalą, išdžiovinkite (1:20 praskiedimas) iš 0,3 ml (K+). Norėdami tai padaryti, į buteliuko su K+ turinį įpilkite 0,3 ml fosfato buferinio tirpalo (PBS). Likusį serumo kiekį galima padalyti į alikvotines dalis ir laikyti užšaldytą ne aukštesnėje kaip minus 18 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 6 mėnesius.

Salmonella eritrocitų diagnostikos (SED) paruošimas

Norint paruošti Salmonella erythrocyte diagnosticum suspensijos darbinį skiedimą, į buteliuko turinį su sausu 6% SED įpilama 0,6 ml distiliuoto vandens ir paliekama 2 valandas hidratuotis 16–25 °C temperatūroje. Tada į tirpalą įpilama 2,4 ml fosfato buferinio tirpalo (PBS). Darbinis tirpalas laikomas 2–8 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 1 mėnesį. Šaldymas neleidžiamas.

RPGA pareiškimas atliekant kraujo serumų patikrą

Kraujo serumai, skirti atrankos tyrimams, skiedžiami tabletės duobutėse taip:

• pirmieji lėkštelės šulinėliai paruošiami 1:20 praskiedimai, pirmiausia į juos įpilant 190 μl RIP tirpalo, po to 10 μl tiriamojo serumo. Kiekvienas serumas pridedamas atskiru antgaliu ir atsargiai pipete supilamas (tirpalo spalva duobutėse po serumų įpylimo turi pasikeisti iš mėlynai violetinės į žalią);
• atrankos skiedimai 1:40 ruošiami antruose šuliniuose, pirmiausia į juos įpilant 25 μl PBS tirpalo, o po to 25 μl iš anksto praskiesto serumo ir atsargiai pipetuojant.

Kiekvieną kartą, kai atliekama RPGA, būtina atlikti kontrolinį K+ titro nustatymą. Norėdami tai padaryti, į 8 šulinukus iš eilės įpilkite 50 μl PBS tirpalo. Tada į pirmą šulinėlį įpilkite 50 μl K+ darbinio tirpalo (1:20), atsargiai pipete supilkite 50 μl į kitas duobutes, gaudami 2 kartus praskiedimus nuo 1:40 iki 1:5120. 50 μl PBS tirpalo įpilama į kitas 4 duobutes, kad būtų galima stebėti EDS, ar nėra savaiminės hemagliutinacijos.

25 μl SED įpilama į visas lėkštelės šulinėliais su tiriamųjų serumų (išskyrus pirmuosius, kuriuose yra RIP) ir kontrolinių mėginių atrankos skiedimus. Prieš naudojimą išmaišykite SED suspensiją butelyje arba vonioje! Tabletė gerai suplakama ir paliekama 16–25 °C temperatūroje 30–40 minučių, kol kontrolinėje grupėje visiškai nusistovi eritrocitai.

RPGA teiginys titruojant tiriamojo kraujo serumą

Tiriamasis serumas ir K+ darbinis tirpalas titruojami trumpomis plokštelės eilėmis. Kita trumpa eilutė naudojama stebėti, ar nėra spontaniškos EDS hemagliutinacijos.

180 μl RIP tirpalo įpilama į pirmąsias trumpų eilučių duobutes tiriamajam serumui titruoti. Į visus kitus šulinėlius įpilkite 50 μl PBS tirpalo.

Į duobutes su RIP tirpalu įpilama 20 μl tiriamojo serumo (gaunamas praskiedimas 1:10). Kiekvienas serumas pridedamas su savo antgaliu ir atsargiai pipete (tirpalo spalva duobutėse turi pasikeisti iš mėlynai violetinės į žalią). Tada 50 μl perkeliama iš pirmųjų šulinėlių į kitas eilėse esančias duobutes ir gaunamas dvigubas praskiedimas nuo 1:20 iki 1:1280. Titravimo pabaigoje iš paskutinių šulinėlių pašalinami 50 μl tūrio tirpalai.

Kiekvieną kartą, kai atliekama RPGA, būtina atlikti kontrolinį K+ titro nustatymą. Norėdami tai padaryti, į 8 šulinukus iš eilės įpilkite 50 μl PBS tirpalo. Tada į pirmą šulinėlį įpilkite 50 μl K+ darbinio tirpalo (1:20), atsargiai pipete supilkite 50 μl į kitas duobutes, gaudami 2 kartus praskiedimus nuo 1:40 iki 1:5120.

Norint kontroliuoti spontaninės hemagliutinacijos nebuvimą, į visus trumpos eilės šulinėlius įpilama 50 μl PBS tirpalo.

25 μl SED įpilama į visas duobutes (išskyrus pirmąsias kiekvienos eilės duobutes, skirtas tiriamiesiems serumams, kuriuose yra RIP). Prieš naudojimą išmaišykite SED suspensiją butelyje arba vonioje! Tabletė gerai suplakama ir paliekama 16–25 °C temperatūroje 30–40 minučių, kol kontrolinėje grupėje visiškai nusistovi eritrocitai.

Rezultatų apskaita ir interpretavimas

Rezultatų apskaita tiriant kraujo serumą

Į rezultatus atsižvelgiama įprastine keturių kryžių skale. Serumo titras laikomas jo praskiedimu, kuris suteikia hemagliutinaciją bent 3 (+++) kryžminimo būdu.

• ++++ (4+) - agliutinuoti eritrocitai sudaro apverstą „skėtį“ skylės apačioje, jo kraštai nukrenta;
• +++ (3+) - agliutinuoti eritrocitai skylės apačioje sudaro apverstą „skėtį“, jo kraštai lygūs;
• ++ (2+) - kartu su agliutinuotais eritrocitais šulinio apačioje yra mažo neagliutinuotų eritrocitų „žiedo“ pavidalo nuosėdos;
• + (1+) - dauguma raudonųjų kraujo kūnelių nėra agliutinuoti ir nusėda mažo „žiedo“ pavidalu;
• (-) - neagliutinuoti raudonieji kraujo kūneliai sudaro „tašką“ šulinėlio apačioje.

Teigiamas rezultatas laikomas Vi-antigenu pakrautų eritrocitų hemagliutinacija bent 3 kryžmelėmis (+++).

Diagnostikos kokybės kontrolę užtikrina 4 kontrolinės eilės šuliniai, į kuriuos buvo įpilta tik PBS ir SED tirpalo. Šiuose šuliniuose neturėtų būti spontaniškos hemagliutinacijos – reakcija neigiama (-). Priešingu atveju tyrimas turėtų būti kartojamas. Jei po pakartotinio stadijos atsiranda hemagliutinacija, vaistas nenaudojamas.

Turėtų būti laikoma, kad serumuose, kurių rezultatas yra neigiamas, nėra antikūnų prieš Vi antigeną, kurio diagnostinis titras yra 1:40 ar mažesnis.

Serumai, kurie duoda teigiamą rezultatą praskiedus 1:40, turi būti pakartotinai tiriami titruojant serumą, kad būtų nustatytas jo titras.

Atsižvelgiama į rezultatus titruojant kraujo serumą

Serumo titras laikomas jo praskiedimu, kuris suteikia hemagliutinaciją bent 3 (+++) kryžmelių.

Diagnostikos kokybės kontrolę užtikrina EDS valdymo eilės šuliniai. Šiuose šuliniuose neturėtų būti spontaniškos hemagliutinacijos – reakcija neigiama (-). Priešingu atveju tyrimas turėtų būti kartojamas. Jei po pakartotinio stadijos atsiranda hemagliutinacija, vaistas nenaudojamas.

2.diagnosticum

4.iš sunaikintų mikrobų (konkretaus Ag išskyrimas)

Eritrocitų HBs diagnostika

2.diagnosticum

4. oro avių suspensija, apdorota taninu ir nusodintais a\g HBs

5.nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume

Diagnosticum gp120

2.diagnosticum

4.atskirkite a\g ex. ŽIV

5. ŽIV aptikimui

Stabligės eritrocitų diagnostika

2.diagnosticum

4. er.ram suspensija, apdorota taninu ir a\g stabligės

5. nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume (prieš stabligę

Kardiolipino antigenas mikroprecipitacijai

2.diagnosticum

4.iš sveiko jaučio širdies išskirtos lipidų frakcijos

5.nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume

Ultragarsinis treponeminis antigenas

2.diagnosticum

4. žuvusiųjų, išskyrus. sifilis

5.nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume

Diagnostinė korpuskulinė tuliaremija

2.diagnosticum

4.iš atskirų patogeno dalelių

5.nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume

Dizenterijos diagnostika

2.diagnosticum

4. sustabdymas nuo nužudytų gyvūnų

5.nustatyti specifinius antikūnus paciento kraujo serume

Eritrocitų diagnostika iš Shigella Sonne

2.diagnosticum

4.er.ram suspensija, apdorota toninu

5.nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume

Diagnostika iš Salmonella typhimurium

2.diagnosticum

4. žuvusiųjų, išskyrus. salmonelių

5.nustatyti specifinius antikūnus kraujo serume

Serumai

Antigangreninis arklių serumas 5000 TV

2.serumas

4.iš hiperimijų arklių kraujo serumo su žadinamųjų dujų gangrenos anatoksinu

6. parenteraliai, po tyrimo su globulinu 1:100

Normalus žmogaus imunoglobulinas

2.serumas

4.iš donoro kraujo serumo

5. forma-e leidimas. specifinis pirktas menai imm

6.parenteralinis

Nusodinantis juodligės serumas

2.serumas

4. iš hiperimunizuotų gyvūnų kraujo serumo a\g exc.sib. opos

6. nusodinimo reakcija (RP)

Botulino serumo tipas – A 400 TV

2.serumas

5.norint aptikti specifinį antigeną tiriamojoje medžiagoje

6. Neutralizacijos reakcija (RN)

Anti-judligės globulinas

2.serumas

4.iš hiperimunizuotų gyvūnų ir (arba) išskyrus juodligės kraujo serumo

5. forma-e leidimas. specifinis pirktas menai imm

6.parenteralinis

Hemolizinis serumas

2.serumas

4.iš hiperimunizuotų gyvūnų serumo su kitos rūšies gyvūnų eritrocitais

5.norint aptikti specifinį antigeną tiriamojoje medžiagoje

Ogawa cholerą agliutinuojantis serumas

2.serumas

4.iš hiperimunizuotų gyvūnų kraujo serumo

5.norint aptikti specifinį antigeną tiriamojoje medžiagoje

Liuminescencinis tularemijos serumas

2.serumas

4.iš hiperimunizuotų gyvūnų kraujo serumo a\g be.tulinės.

5.norint aptikti specifinį antigeną tiriamojoje medžiagoje

Imunoglobulinas nuo žmogaus erkinio encefalito

2.serumas

4.iš donoro kraujo serumo

5. forma-e leidimas. specifinis pirktas menai imm

6.parenteralinis

ESNO diagnostinis serumas

2.serumas

4.iš ESNO virusais hiperimunizuotų gyvūnų kraujo serumo

5.norint aptikti specifinį antigeną tiriamojoje medžiagoje

Žmogaus imunoglobulinas nuo hepatito B

2.serumas

4.iš nuo hepatito B paskiepyto donoro kraujo serumo

5. forma-e leidimas. specifinis pirktas menai imm

6.parenteralinis

Peroksidaze pažymėtas antiglobulino serumas

2.serumas

4.iš hiperimunizuotų gyvūnų kraujo serumo

5) aptikti specifinį antigeną tiriamojoje medžiagoje (ŽIV)

Imunoglobulinas nuo pasiutligės

2.serumas

4.iš donoro kraujo serumo

5. forma-e leidimas. specifinis pirktas menai imm

Aktyvus diagnostikos principas yra Vi-antigenas, fiksuotas raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje. Sąveikaujant su serumais, kuriuose yra antikūnų prieš Vi-antigeną, stebimas eritrocitų agliutinacijos reiškinys.

Išleidimo forma

Rinkinyje yra 1 buteliukas su diagnostine medžiaga - 3 ml, diagnostinis serumas Salmonella adsorbed receptor Vi Dry liofilizato pavidalu 0,1 ml 1 buteliukas; 0,9% natrio chlorido tirpalas - 2 buteliai po 8 ml; vienkartinė tabletė imunologinėms reakcijoms - 1 vnt.

Junginys

Reagentų kiekis:

Diagnosticum erythrocyte Salmonella Vi-antigen, kuri yra formalinizuotų ir įjautrintų O (I) kraujo grupės žmogaus eritrocitų su Vi-antigenu 0,75 % suspensija fosfatiniame buferiniame tirpale (pH - 7,2 ± 0,2; koncentracija - 0,06 mol/l). Konservantas – formaldehidas. Rudos spalvos homogeniška suspensija be dribsnių; nusėdus susidaro 2 sluoksniai: tankios rudos eritrocitų nuosėdos ir skaidrus gelsvas supernatantas 1 buteliukas-3 ml.

Salmonella diagnostinis serumas adsorbuotas B receptorius sausas – vienalytė masė nuo baltos su rusvu atspalviu iki smėlio spalvos. 1 buteliukas - nuo 0,1 ml.

Palaikomasis tirpalas - 0,9% natrio chlorido tirpalas - skaidrus, bespalvis skystis, pH nuo 6,5 iki 7,5. 2 buteliai - po 8 ml.

Apvaliadugnė plokštelė vienkartinėms imunologinėms reakcijoms – susideda iš 8 eilučių, kurių kiekvienoje yra 12 šulinių su skaidriu, bespalviu, apvaliu dugnu. 1 PC.

Diagnostinė medžiaga turi būti agliutinuota RPHA diagnostiniu Salmonella serumu, adsorbuotu sausųjų B receptorių, praskiedus ne mažiau kaip 1/2 jų titro, bet ne mažiau kaip 1/160. Diagnosticum neturėtų agliutinuoti Salmonella diagnostikos adsorbuotų sausų serumų, skirtų RA: O receptorius 9 - praskiedus 1:40 ir daugiau, H receptorius d - praskiedus 1:10 ir daugiau.

Naudojimo indikacijos

Sukurta aptikti specifinius antikūnus prieš Salmonella typhus Vi-antigeną žmogaus kraujo serume pasyviosios hemagliutinacijos reakcijos (RPHA) metu.

Dozavimo režimas ir vartojimo būdas

Žmogaus kraujo serumo mėginiai naudojami kaip analizuojami mėginiai.
Ištirtas mėginys laikomas tokiomis sąlygomis, kurios neleidžia bakterijoms daugintis 2–8 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 72 valandas. Leidžiama užšaldyti; užšaldytus bandinius prieš tyrimą reikia atšildyti kambario temperatūroje.
Neleidžiama tirti mėginių su sunkia hemolize, daugintis bakterijomis, taip pat ilgai laikomus neužšaldžius ar pakartotinai užšaldytus.

ANALIZĖS ATLIKIMAS
RPHA tirpalų ruošimas.
Išdžiovinkite buteliukus su Salmonella diagnostiniu serumu, adsorbuotu B receptorių, ir įpilkite 1 ml tiekiamo 0,9% natrio chlorido tirpalo, taip gaudami praskiedimą santykiu 1:10, tai yra darbinis skiedimas.
Atidarytas buteliukas su Salmonella diagnostiniu serumu, adsorbuotu sausai, praskiedus 1:10, gali būti laikomas 2–8 °C temperatūroje vieną mėnesį.
Diagnosticum paruošta naudoti. Prieš atidarant buteliuką su diagnostine medžiaga reikia atsargiai sukratyti, kol susidarys vienalytė suspensija. Eksploatacijos metu rekomenduojama pakartotinai kratyti.
Atidarytą buteliuką su diagnostiku uždaroje formoje galima laikyti 2–8 ° C temperatūroje vieną mėnesį.
0,9% natrio chlorido tirpalas. Paruoštas naudoti.

RPGA vedimas.
Stebint bet kokį analizuojamų serumų skaičių, privaloma atlikti 1 agliutinacijos seriją su diagnostiniu Salmonella serumu, adsorbuotu B receptorių sausu.
Norint atlikti RPHA, naudojama vienkartinė tabletė imunologinėms reakcijoms. Paruoškite analizuojamų serumų dvigubus nuoseklius praskiedimus 0,05 ml tiekiamo 0,9% natrio chlorido tirpalo, pradedant nuo 1:10 iki 1:2560, ir 1 eilę dvigubo serijinio praskiedimo iš diagnostinio Salmonella serumo adsorbuoto B receptorių sauso, pradedant nuo praskiedimas 1:10, iki dvigubo titro, nurodyto šio serumo buteliukų etiketėje.
Į kiekvieną serumo skiedimo duobutę įpilkite 0,025 ml diagnostinio tirpalo.

Privalomos kontrolės priemonės yra:
1. Receptoriaus adsorbuoto diagnostinio salmonelių serumo kontrolė
Vi sausas ir ištirtas serumas, kuris skiedžiamas 1:10 0,05 ml tūrio
į du kontrolinius šulinius.
2. Patikrinimas, ar nėra spontaninės diagnostinės medžiagos agliutinacijos, kuriai 0,025 ml diagnostikos įpilama į du šulinėlius, kuriuose yra 0,05 ml 0,9% natrio chlorido tirpalo.
Tabletė suplakama ir dedama 1,5-2,0 valandoms į termostatą (37+1) °C temperatūroje.

REZULTATŲ APSKAITA
Į reakciją atsižvelgiama naudojant keturių kryžių sistemą:
4+ – visi raudonieji kraujo kūneliai agliutinuojami ir tolygiai dengia duobutės dugną;
3+ – beveik visi raudonieji kraujo kūneliai yra agliutinuoti. Jų fone yra nepastebimas nusistovėjusių, neagliutinuotų eritrocitų žiedas;
3+ - kartu su vienodu agliutinatu šulinio apačioje yra neagliutinuotų eritrocitų nuosėdos mažo „žiedo“ arba „mygtuko“ pavidalu;
1+ - didžioji dalis raudonųjų kraujo kūnelių yra neagliutinuoti ir nusėda kaip mažas „žiedas“ su lygiais kraštais arba „mygtukas“ skylės dugno centre.
( - ) - agliutinacijos požymių nėra. Raudonieji kraujo kūneliai nusėdo kaip mažas „žiedas“ lygiais kraštais arba mygtukas šulinėlio centre arba mėgintuvėlio apačioje.
Ne mažiau kaip 3+ reakcija laikoma teigiama.
RPGA gautus rezultatus galima laikyti patikimais, jei diagnostinio salmonelių serumo adsorbuotas B receptorius sausas santykiu 1:10 gautas teigiamas rezultatas praskiedus ne mažiau kaip 14 jų titrų ir 2 duobutėse su analizuojamu serumu ir diagnostiniu Salmonella serume adsorbuotas B receptorius išdžiovintas praskiedus santykiu 1:10, neturi būti dribsnių ar nuosėdų; šuliniuose su 0,9% natrio chlorido tirpalu ir diagnostika - reakcija neigiama.
Išanalizuoto serumo antikūnų titras laikomas paskutiniu serumo skiedimu, kuris vis tiek duoda teigiamą raudonųjų kraujo kūnelių agliutinaciją.
Rezultatų interpretacija.
Asmenys, turintys antikūnų prieš B antigeną, praskiedus 1:40 ar daugiau, laikomi įtariamais lėtiniu vidurių šiltinės bakterijų pernešimu. Tačiau dėl to, kad diagnozė negali būti nustatyta tik remiantis serologiniu tyrimu, būtinas nuodugnus bakteriologinis tyrimas.

Atsargumo priemonės naudojant

Į rinkinį įeina diagnostinis serumas su Salmonella adsorbuotu B receptoriumi, sausai inaktyvuotu.
Tiriamasis serumas turi būti inaktyvuotas 56 °C temperatūroje 30 minučių.
Tyrimo serumai, taip pat su jais besiliečiantys reagentai, įranga ir instrumentai gali būti potencialiai užkrečiama medžiaga, todėl su jais reikia elgtis atsargiai:
- dirbti su guminėmis pirštinėmis;
- pipetuojant būtina naudoti automatinius prietaisus;
- baigus darbą, analizuojamus serumus ir su jais besiliečiančius reagentus bei instrumentus apdoroti dezinfekuojančiu tirpalu;
- Nuvalykite įrangą 96% etilo alkoholiu prieš ir po naudojimo.

Objektyvūs analizės rezultatai garantuojami, jei tenkinamos šios sąlygos:
- visi rinkinio reagentai turi būti laikomi 2–8 °C temperatūroje;
- nenaudokite pasibaigusio galiojimo reagentų;
- nenaudokite rinkinio reagentų, jei ant jų pakuotės nėra atitinkamo žymėjimo;
- Norėdami atlikti RPGA, naudokite tik šiame rinkinyje esančius reagentus.

2016-04-04 registracijos liudijimas Nr.RZN 2016/3905

Tikslas

Reagentų rinkinys „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (SED-Vi) skirtas antikūnams prieš vidurių šiltinės sukėlėjo Vi-antigeną aptikti žmogaus kraujo serume, vykstant pasyviosios hemagliutinacijos (RPHA) reakcijai. ).

Rinkinio charakteristikos

Veikimo principas

Esant antikūnams prieš vidurių šiltinės sukėlėją, stebima Vi antigenu įjautrintų viščiukų eritrocitų hemagliutinacija, dėl kurios lėkštės U formos šulinių apačioje susidaro nusistovėjusių eritrocitų „skėtis“. . Nesant antikūnų prieš vidurių šiltinės sukėlėją, nusistovėję raudonieji kraujo kūneliai sudaro „tašką“.

Nustatykite turinį

Reagento pavadinimas	apibūdinimas	Kiekis komplekte
Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen, sausas 6% (EDS)	Formalizuoti vištienos eritrocitai, įjautrinti S. typhi Vi antigenu. Sausa higroskopinė rudos spalvos masė. Ištirpus suspensija yra raudonai rudos spalvos.	1 fl., nuo 0,6 ml
Salmonella diagnostinis serumas adsorbuotas, Vi receptorius, sausas (praskiestas 1:20, (K+))	Triušio serumas Salmonella adsorbuotas, Vi receptorius, praskiestas santykiu 1:20. Sausa higroskopinė baltos spalvos porėta masė. Ištirpinus, tai skaidrus gelsvas arba bespalvis skystis.	1 fl., nuo 0,3 ml
Bandomojo mėginio skiediklis (RSD)	Skaidrus mėlynai violetinės spalvos skystis.	1 fl., 10 ml
Fosfatinis buferinis tirpalas (PBS)	Skaidrus bespalvis skystis.	1 fl., 10 ml
Vienkartinė polimerinė tabletė imunologinėms reakcijoms	Vienkartinė polimerinė tabletė imunologinėms reakcijoms, pagaminta iš skaidraus bespalvio polistireno.	1 PC.

Diagnostinės charakteristikos

Diagnostinis preparatas turi būti agliutinuotas RPHA su diagnostiniu salmonelių serumu, adsorbuotu Vi receptoriumi, sausas (1:20 praskiedimas), iki serumo etiketėje nurodyto titro. Sąlyginis sveikų žmonių kraujo serumo diagnostinių charakteristikų lygis turėtų būti laikomas serumo praskiedimu ne didesniu kaip 1:20. Analizės laikas yra 3040 minučių. Rinkinys skirtas tirti 42 kraujo serumus atrankos parinktyje arba 10 kraujo serumų titravimo parinktyje.

Atsargumo priemonės

Rinkinys skirtas tik in vitro diagnostikai. Į rinkinį įtrauktos medžiagos yra inaktyvuotos ir saugios. Dirbdami su rinkiniu turėtumėte laikytis SP 1.3.2322-08 ir SanPiN 2.1.7.2790-10.

Papildoma įranga ir medžiagos

Įranga, medžiagos, sprendimai:

• 1 kanalo pipetės dozatoriai su kintamu dozavimo tūriu 5 - 40 µl; 40 - 200 µl; 200 - 1000 µl ir 1000 - 5000 µl;
• 8 arba 12 kanalų pipetės dozatoriai su kintamu 5 - 40 µl ir 40 - 200 µl dozavimo tūriu;
• distiliuotas vanduo (GOST 6709-72).

Išanalizuoti pavyzdžiai

Tiriami kraujo serumo mėginiai laikomi 2–8 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 3 dienas nuo kraujo paėmimo momento. Užšaldytas išrūgas galima laikyti ne aukštesnėje kaip minus 18 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 1 metus. Prieš naudojimą mėginiai atšildomi 16–25 °C temperatūroje ir sumaišomi purtant. Pakartotinis užšaldymas neleidžiamas. Mėginių su bakterijų augimu ir hemolize naudoti negalima. Prieš atliekant reakciją, tiriamieji serumai 30 minučių kaitinami 56 °C temperatūroje.

Analizės atlikimas

Kontrolinio diagnostinio serumo (K+) paruošimas

Paruoškite diagnostinio Salmonella serumo, adsorbuoto, Vi receptorių, darbinį tirpalą, išdžiovinkite (1:20 praskiedimas) iš 0,3 ml (K+). Norėdami tai padaryti, į buteliuko su K+ turinį įpilkite 0,3 ml fosfato buferinio tirpalo (PBS). Likusį serumo kiekį galima padalyti į alikvotines dalis ir laikyti užšaldytą ne aukštesnėje kaip minus 18 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 6 mėnesius.

Salmonella eritrocitų diagnostikos (SED) paruošimas

Norint paruošti Salmonella erythrocyte diagnosticum suspensijos darbinį skiedimą, į buteliuko turinį su sausu 6% SED įpilama 0,6 ml distiliuoto vandens ir paliekama 2 valandas hidratuotis 16–25 °C temperatūroje. Tada į tirpalą įpilama 2,4 ml fosfato buferinio tirpalo (PBS). Darbinis tirpalas laikomas 2–8 °C temperatūroje ne ilgiau kaip 1 mėnesį. Šaldymas neleidžiamas.

RPGA pareiškimas atliekant kraujo serumų patikrą

Kraujo serumai, skirti atrankos tyrimams, skiedžiami tabletės duobutėse taip:

• pirmieji lėkštelės šulinėliai paruošiami 1:20 praskiedimai, pirmiausia į juos įpilant 190 μl RIP tirpalo, po to 10 μl tiriamojo serumo. Kiekvienas serumas pridedamas atskiru antgaliu ir atsargiai pipete supilamas (tirpalo spalva duobutėse po serumų įpylimo turi pasikeisti iš mėlynai violetinės į žalią);
• atrankos skiedimai 1:40 ruošiami antruose šuliniuose, pirmiausia į juos įpilant 25 μl PBS tirpalo, o po to 25 μl iš anksto praskiesto serumo ir atsargiai pipetuojant.

Kiekvieną kartą, kai atliekama RPGA, būtina atlikti kontrolinį K+ titro nustatymą. Norėdami tai padaryti, į 8 šulinukus iš eilės įpilkite 50 μl PBS tirpalo. Tada į pirmą šulinėlį įpilkite 50 μl K+ darbinio tirpalo (1:20), atsargiai pipete supilkite 50 μl į kitas duobutes, gaudami 2 kartus praskiedimus nuo 1:40 iki 1:5120. 50 μl PBS tirpalo įpilama į kitas 4 duobutes, kad būtų galima stebėti EDS, ar nėra savaiminės hemagliutinacijos.

25 μl SED įpilama į visas lėkštelės šulinėliais su tiriamųjų serumų (išskyrus pirmuosius, kuriuose yra RIP) ir kontrolinių mėginių atrankos skiedimus. Prieš naudojimą išmaišykite SED suspensiją butelyje arba vonioje! Tabletė gerai suplakama ir paliekama 16–25 °C temperatūroje 30–40 minučių, kol kontrolinėje grupėje visiškai nusistovi eritrocitai.

RPGA teiginys titruojant tiriamojo kraujo serumą

Tiriamasis serumas ir K+ darbinis tirpalas titruojami trumpomis plokštelės eilėmis. Kita trumpa eilutė naudojama stebėti, ar nėra spontaniškos EDS hemagliutinacijos.

180 μl RIP tirpalo įpilama į pirmąsias trumpų eilučių duobutes tiriamajam serumui titruoti. Į visus kitus šulinėlius įpilkite 50 μl PBS tirpalo.

Į duobutes su RIP tirpalu įpilama 20 μl tiriamojo serumo (gaunamas praskiedimas 1:10). Kiekvienas serumas pridedamas su savo antgaliu ir atsargiai pipete (tirpalo spalva duobutėse turi pasikeisti iš mėlynai violetinės į žalią). Tada 50 μl perkeliama iš pirmųjų šulinėlių į kitas eilėse esančias duobutes ir gaunamas dvigubas praskiedimas nuo 1:20 iki 1:1280. Titravimo pabaigoje iš paskutinių šulinėlių pašalinami 50 μl tūrio tirpalai.

Kiekvieną kartą, kai atliekama RPGA, būtina atlikti kontrolinį K+ titro nustatymą. Norėdami tai padaryti, į 8 šulinukus iš eilės įpilkite 50 μl PBS tirpalo. Tada į pirmą šulinėlį įpilkite 50 μl K+ darbinio tirpalo (1:20), atsargiai pipete supilkite 50 μl į kitas duobutes, gaudami 2 kartus praskiedimus nuo 1:40 iki 1:5120.

Norint kontroliuoti spontaninės hemagliutinacijos nebuvimą, į visus trumpos eilės šulinėlius įpilama 50 μl PBS tirpalo.

25 μl SED įpilama į visas duobutes (išskyrus pirmąsias kiekvienos eilės duobutes, skirtas tiriamiesiems serumams, kuriuose yra RIP). Prieš naudojimą išmaišykite SED suspensiją butelyje arba vonioje! Tabletė gerai suplakama ir paliekama 16–25 °C temperatūroje 30–40 minučių, kol kontrolinėje grupėje visiškai nusistovi eritrocitai.

Rezultatų apskaita ir interpretavimas

Rezultatų apskaita tiriant kraujo serumą

Į rezultatus atsižvelgiama įprastine keturių kryžių skale. Serumo titras laikomas jo praskiedimu, kuris suteikia hemagliutinaciją bent 3 (+++) kryžminimo būdu.

• ++++ (4+) - agliutinuoti eritrocitai sudaro apverstą „skėtį“ skylės apačioje, jo kraštai nukrenta;
• +++ (3+) - agliutinuoti eritrocitai skylės apačioje sudaro apverstą „skėtį“, jo kraštai lygūs;
• ++ (2+) - kartu su agliutinuotais eritrocitais šulinio apačioje yra mažo neagliutinuotų eritrocitų „žiedo“ pavidalo nuosėdos;
• + (1+) - dauguma raudonųjų kraujo kūnelių nėra agliutinuoti ir nusėda mažo „žiedo“ pavidalu;
• (-) - neagliutinuoti raudonieji kraujo kūneliai sudaro „tašką“ šulinėlio apačioje.

Teigiamas rezultatas laikomas Vi-antigenu pakrautų eritrocitų hemagliutinacija bent 3 kryžmelėmis (+++).

Diagnostikos kokybės kontrolę užtikrina 4 kontrolinės eilės šuliniai, į kuriuos buvo įpilta tik PBS ir SED tirpalo. Šiuose šuliniuose neturėtų būti spontaniškos hemagliutinacijos – reakcija neigiama (-). Priešingu atveju tyrimas turėtų būti kartojamas. Jei po pakartotinio stadijos atsiranda hemagliutinacija, vaistas nenaudojamas.

Turėtų būti laikoma, kad serumuose, kurių rezultatas yra neigiamas, nėra antikūnų prieš Vi antigeną, kurio diagnostinis titras yra 1:40 ar mažesnis.

Serumai, kurie duoda teigiamą rezultatą praskiedus 1:40, turi būti pakartotinai tiriami titruojant serumą, kad būtų nustatytas jo titras.

Atsižvelgiama į rezultatus titruojant kraujo serumą

Serumo titras laikomas jo praskiedimu, kuris suteikia hemagliutinaciją bent 3 (+++) kryžmelių.

Diagnostikos kokybės kontrolę užtikrina EDS valdymo eilės šuliniai. Šiuose šuliniuose neturėtų būti spontaniškos hemagliutinacijos – reakcija neigiama (-). Priešingu atveju tyrimas turėtų būti kartojamas. Jei po pakartotinio stadijos atsiranda hemagliutinacija, vaistas nenaudojamas.