Diagnosticum Salmonella erytrocyt vi antigénna kvapalina. Diagnosticum salmonela erytrocytov o. Ultrazvukový treponémový antigén

Súprava Diagnosticum Salmonella VI-antigén je určená na detekciu špecifických protilátok proti Salmonella tyfus VI-antigénu v ľudskom krvnom sére pri pasívnej hemaglutinačnej reakcii (RPHA).

1. SET CHARAKTERISTIKY

2.1. Princíp metódy.

Aktívnou zložkou Antigénu Diagnosticum Salmonella VI je Vi-antigén fixovaný na povrchu červených krviniek. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti Vi-antigénu sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.

2.2. SET OBSAH

Činidlá	Množstvo
Diagnosticum erytrocytová salmonela Vi-antigénna kvapalina- je 1% suspenzia formalinizovaných a senzibilizovaných erytrocytov oviec Salmonella Tyfus s B-antigénom vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH 7,2 + 0,2; koncentrácia 0,06 mol/l). Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant	1 fľaša - 6 ml
Diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný B receptor suchý - homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom po béžovú	1 fľaša – 0,1 ml
1 % suspenzia formalinizovaných, nesenzibilizovaných ovčích erytrocytov— homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; pri usadzovaní sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadný žltkastý supernatant	1 fľaša -
Roztok na riedenie séra a staging RPGA - 0,9% roztok chloridu sodného - priehľadná bezfarebná kvapalina, pH od 6,5 do 7,5	2 fľaštičky – každá po 8 ml
Jednorazová platnička s okrúhlym dnom na imunologické reakcie - pozostáva z 8 radov, z ktorých každý obsahuje 12 otvorov s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom	1 PC

1. ANALYTICKÉ A DIAGNOSTICKÉ CHARAKTERISTIKY.

3.1. Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom v zriedení najmenej 1:160.

Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20.

3.2. Čas analýzy: 2 hodiny.

3.3. Sada obsahuje 8 definícií.

1. PREVENTÍVNE OPATRENIA

Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať „Pravidlá dizajnu, bezpečnostných opatrení, priemyselnej sanitácie, protiepidemického režimu a osobnej hygieny pri práci v laboratóriách (oddelenia, oddelenia) sanitárnych a epidemiologických inštitúcií Ministerstva zdravotníctva ZSSR ( M., 1981).

Analyzované séra, ako aj činidlá, ktoré sú s nimi v kontakte, by sa mali považovať za potenciálne infikované, schopné dlhodobého uchovávania alebo prenosu HIV, vírusu hepatitídy alebo akéhokoľvek iného pôvodcu vírusovej infekcie – treba s nimi zaobchádzať opatrne:

• pracovať s gumenými rukavicami;
• pri pipetovaní je potrebné použiť automatické dávkovače;
• po ukončení práce ošetrite analyzované séra a reagencie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, dezinfekčným roztokom
• Pred a po použití utrite vybavenie 70% etylalkoholom.

Analyzované séra sa musia inaktivovať pri teplote 56 °C počas 30 minút.

Diagnostické sérum Salmonella adsorbované receptorom B, ktoré je súčasťou súpravy, je suché a inaktivované.

Objektívne výsledky analýzy sú zaručené, ak sú splnené nasledujúce podmienky:

• Všetky reagencie súpravy by sa mali skladovať pri teplotách od 2 do 8 0 C;
• nepoužívajte reagencie po expirácii;
• nepoužívajte reagencie súpravy, ak na ich obale nie je vhodné označenie;
• Na vykonanie RPHA používajte reagencie, ktoré sú súčasťou tejto súpravy.

Vi-Diagnosticum

Diagnosticum Vi

Vi-Antigénne

Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 4.4.2016

Účel

Súprava reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudských krvných sérach reakciou pasívnej hemaglutinácie (RPHA ).

Charakteristika súpravy

Princíp fungovania

V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek v tvare U doštičky. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi týfusu tvoria usadené červené krvinky „bodku“.

Nastavte obsah

Názov činidla	Popis	Množstvo v súprave
Diagnosticum erytrocytový salmonella Vi-antigén, suchý 6% (EDS)	Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom Vi S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení má suspenzia červenohnedú farbu.	1 fl., od 0,6 ml
Diagnostické sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+))	Králičie sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to priehľadná žltkastá alebo bezfarebná kvapalina.	1 fl., od 0,3 ml
Riedidlo testovacej vzorky (RSD)	Transparentná kvapalina modrofialovej farby.	1 fl., 10 ml
Fosfátový tlmivý roztok (PBS)	Priehľadná bezfarebná kvapalina.	1 fl., 10 ml
Polymérová tableta na jedno použitie na imunologické reakcie	Jednorazová polymérová tableta na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu.	1 PC.

Diagnostické charakteristiky

Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s adsorbovaným diagnostickým sérom salmonely, Vi receptor, suché (riedenie 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na testovanie 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.

Preventívne opatrenia

Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.

Dodatočné vybavenie a materiály

Vybavenie, materiály, riešenia:

• 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
• 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl a 40 - 200 µl;
• destilovaná voda (GOST 6709-72).

Analyzované vzorky

Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Srvátka sa môže skladovať zmrazená pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred uskutočnením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.

Vykonávanie analýzy

Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)

Pripravte pracovný roztok diagnostického séra Salmonella adsorbovaného, ​​Vi receptor, suchý (riedenie 1:20) z 0,3 ml (K+). K tomu pridajte 0,3 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS) k obsahu fľaštičky s K+. Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.

Príprava Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)

Na prípravu pracovného riedenia suspenzie Salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu fľaše so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.

Stanovenie RPGA počas skríningu krvných sér

Krvné séra na skríningové štúdie sa zriedia v jamkách tablety nasledovne:

• V prvých jamkách platne sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl testovacieho séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú);
• skríningové riedenia 1:40 sa pripravia v druhých jamkách tak, že sa do nich najprv pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.

Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120. Do ďalších 4 jamiek sa pridá 50 ul roztoku PBS, aby sa monitorovala neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie EDS.

25 μl SED sa pridá do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami testovacích sér (okrem prvých obsahujúcich RIP) a kontrol. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.

Stanovenie RPGA počas titrácie testovaného krvného séra

Titrácia testovacieho séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky riadok sa používa na sledovanie absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.

Do prvých jamiek krátkych radov sa pridá 180 μl RIP roztoku na titráciu testovacieho séra. Pridajte 50 μl roztoku PBS do všetkých ostatných jamiek.

Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (dosiahne sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá vlastnou špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, čím sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberú roztoky v objeme 50 μl.

Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120.

Na kontrolu diagnostiky na absenciu spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.

Do všetkých jamiek sa pridá 25 μl SED (okrem prvých jamiek každého radu pre testovacie séra obsahujúce RIP). Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.

Účtovanie a interpretácia výsledkov

Účtovanie výsledkov pri skríningu krvného séra

Výsledky sa berú do úvahy na konvenčnej stupnici štyroch krížikov. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.

• ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje padajú;
• +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú hladké;
• ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne jamky sediment vo forme malého „krúžku“ neaglutinovaných erytrocytov;
• + (1+) - väčšina červených krviniek nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
• (-) - neaglutinované červené krvinky tvoria „bodku“ na dne jamky.

Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).

Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých sa pridával len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.

Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 alebo nižším.

Séra, ktoré poskytujú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znova otestovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.

Účtovanie výsledkov pri titrácii krvného séra

Za titer séra sa považuje jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu aspoň 3 (+++) kríženia.

Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú jamky radu na riadenie EDS. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.

2.diagnostika

4.od zničených mikróbov (izolácia špecifického Ag)

Diagnostika HBs erytrocytov

2.diagnostika

4. suspenzia vzduchu-ovce ošetrená tanínom a vyzrážaná a\g HBs

5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére

Diagnostika gp120

2.diagnostika

4.oddeliť a\g napr. HIV

5. na detekciu a\t HIV

Diagnostika tetanových erytrocytov

2.diagnostika

4. suspenzia er.ram, ošetrená tanínom a a\g tetanu

5. na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére (proti tetanu

Kardiolipínový antigén na mikroprecipitáciu

2.diagnostika

4. extrahované lipidové frakcie zo srdca zdravého býka

5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére

Ultrazvukový treponémový antigén

2.diagnostika

4. zo zabitých výk. syfilis

5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére

Diagnostika korpuskulárnej tularémie

2.diagnostika

4.z jednotlivých častíc patogénu

5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére

Diagnostika úplavice

2.diagnostika

4. suspenzia zo zabitých zvierat

5. na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére pacienta

Diagnostika erytrocytov od Shigella Sonne

2.diagnostika

4.suspenzia er.ram, ošetrená tonínom

5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére

Diagnosticum zo Salmonella typhimurium

2.diagnostika

4. zo zabitých výk. salmonela

5.na zistenie špecifických protilátok v krvnom sére

Séra

Konské sérum proti gangréne 5000 IU

2.sérum

4.z krvného séra hyperimických koní s anatoxínom excitačnej plynovej gangrény

6. parenterálne, po teste globulínom 1:100

Normálny ľudský imunoglobulín

2.sérum

4.z darcovského krvného séra

5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm

6.parenterálne

Precipitujúce antraxové sérum

2.sérum

4. z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g exc.sib. vredy

6.zrážacia reakcia (RP)

Typ botulínového séra – A 400 IU

2.sérum

5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli

6.neutralizačná reakcia (RN)

Anti-antraxový globulín

2.sérum

4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a/alebo mimo antraxu

5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm

6.parenterálne

Hemolytické sérum

2.sérum

4.zo séra hyperimunizovaných zvierat s erytrocytmi zvierat iného typu

5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli

Ogawa cholera aglutinačné sérum

2.sérum

4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat

5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli

Luminiscenčné sérum na tularémiu

2.sérum

4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat a\g ex.tulár.

5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli

Imunoglobulín proti ľudskej kliešťovej encefalitíde

2.sérum

4.z darcovského krvného séra

5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm

6.parenterálne

ESNO diagnostické sérum

2.sérum

4.z krvného séra zvierat hyperimunizovaných ESNO vírusmi

5.na zistenie špecifického antigénu v testovanom materiáli

Ľudský imunoglobulín proti hepatitíde B

2.sérum

4.z krvného séra darcu očkovaného proti hepatitíde B

5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm

6.parenterálne

Antiglobulínové sérum označené peroxidázou

2.sérum

4.z krvného séra hyperimunizovaných zvierat

5. na zistenie špecifického antigénu v testovacom materiáli (HIV)

Imunoglobulín proti besnote

2.sérum

4.z darcovského krvného séra

5. forma-e prihrávka. špecifické zakúpené umenia imm

Aktívnou zložkou diagnostika je Vi-antigén, fixovaný na povrchu červených krviniek. Pri interakcii so sérami obsahujúcimi protilátky proti Vi-antigénu sa pozoruje fenomén aglutinácie erytrocytov.

Formulár na uvoľnenie

Dostupné v sade 1 fľaštička s diagnostickom - 3 ml, diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný receptor Vi Dry vo forme lyofilizátu 0,1 ml 1 fľaša; 0,9% roztok chloridu sodného - 2 fľaše po 8 ml; jednorazová tableta na imunologické reakcie - 1 ks.

Zlúčenina

Množstvo činidiel:

Diagnosticum erytrocytový Salmonella Vi-antigén, čo je 0,75% suspenzia formalinizovaných a senzibilizovaných ľudských erytrocytov krvnej skupiny O (I) s Vi-antigénom vo fosfátovom tlmivom roztoku (pH - 7,2 ± 0,2; koncentrácia - 0,06 mol/l). Konzervačná látka - formaldehyd. Homogénna suspenzia hnedej farby bez vločiek; po usadení sa vytvoria 2 vrstvy: hustý hnedý sediment erytrocytov a priehľadná žltkastá kvapalina nad usadeninou 1 fľaša-3 ml.

Diagnostické sérum Salmonella adsorbované na B receptor suchá - homogénna hmota od bielej s hnedastým odtieňom až po béžovú. 1 fľaša - od 0,1 ml.

Udržiavací roztok - 0,9% roztok chloridu sodného - číra, bezfarebná kvapalina, pH od 6,5 do 7,5. 2 fľaštičky - každá po 8 ml.

Doštička s okrúhlym dnom na jednorazové imunologické reakcie – pozostáva z 8 radov, z ktorých každá obsahuje 12 jamiek s priehľadným, bezfarebným, okrúhlym dnom. 1 PC.

Diagnostikum musí byť aglutinované v RPHA diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom v zriedení nie menšom ako 1/2 ich titra, ale nie menšom ako 1/160. Diagnosticum by sa nemalo aglutinovať diagnostickým adsorbovaným suchým sérom Salmonella na RA: O receptor 9 - v riedení 1:40 a vyššom, H receptor d - v riedení 1:10 a vyššom.

Indikácie na použitie

Navrhnuté na detekciu špecifických protilátok proti Salmonella tyfus Vi-antigénu v ľudskom krvnom sére pri pasívnej hemaglutinačnej reakcii (RPHA).

Dávkovací režim a spôsob podávania

Vzorky ľudského krvného séra sa používajú ako analyzované vzorky.
Analyzovaná vzorka sa uchováva za podmienok, ktoré zabraňujú rastu baktérií pri teplote 2 až 8 °C najviac 72 hodín. Zmrazovanie je povolené; zmrazené testované vzorky by sa mali pred testovaním rozmraziť pri izbovej teplote.
Analýza vzoriek s ťažkou hemolýzou, bakteriálnym rastom, ako aj vzoriek skladovaných dlhší čas bez zmrazenia alebo opätovného zmrazenia nie je povolená.

VYKONÁVANIE ANALÝZY
Príprava roztokov pre RPHA.
Nasucho otvorte liekovky s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným receptorom B a pridajte 1 ml dodaného 0,9 % roztoku chloridu sodného, ​​čím získate riedenie 1:10, čo je pracovné riedenie.
Otvorená fľaša s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaná za sucha v riedení 1:10, uzavretá, možno skladovať pri teplote 2 až 8 °C po dobu jedného mesiaca.
Diagnosticum je pripravené na použitie. Pred otvorením sa injekčná liekovka s diagnostikom musí dôkladne pretrepať, kým sa nezíska homogénna suspenzia. Počas prevádzky sa odporúča pretrepávanie opakovať.
Otvorená fľaša s diagnostikom v uzavretej forme sa môže skladovať pri teplote 2 až 8 °C po dobu jedného mesiaca.
0,9% roztok chloridu sodného. Pripravený k použitiu.

Vedenie RPGA.
Pri monitorovaní akéhokoľvek počtu analyzovaných sér je povinné vykonať 1 sériu aglutinácie s diagnostickým sérom Salmonella adsorbovaným suchým B receptorom.
Na vykonanie RPHA sa používa tableta na jedno použitie na imunologické reakcie. Pripravte dvojnásobné sériové riedenia analyzovaného séra v 0,05 ml dodaného 0,9 % roztoku chloridu sodného počínajúc od 1:10 do 1:2560 a 1 rad dvojnásobného sériového riedenia diagnostického séra Salmonella adsorbovaného na suchý B receptor, počnúc od riedenie 1:10 až do dvojnásobku titra uvedeného na štítku fľaštičiek tohto séra.
Pridajte 0,025 ml diagnostica do každej jamky so sérovým riedením.

Povinné kontroly sú:
1. Kontrola diagnostického séra salmonely adsorbovaného receptorom
Vi suché a analyzované sérum, ktoré sa pridáva v riedení 1:10 v objeme 0,05 ml
do dvoch kontrolných jamiek.
2. Kontrola neprítomnosti spontánnej aglutinácie diagnostika, pre ktorú sa pridá 0,025 ml diagnostika do dvoch jamiek obsahujúcich 0,05 ml 0,9 % roztoku chloridu sodného.
Tableta sa pretrepe a umiestni na 1,5-2,0 hodiny do termostatu pri teplote (37+1) °C.

ÚČTOVNÍCTVO VÝSLEDKOV
Reakcia sa berie do úvahy pomocou štvorkrížového systému:
4+ - všetky červené krvinky sú aglutinované a rovnomerne pokrývajú dno jamky;
3+ - takmer všetky červené krvinky sú aglutinované. Na ich pozadí je nenápadný prstenec usadených, neaglutinovaných erytrocytov;
3+ - spolu s rovnomerným aglutinátom na dne jamky je sediment neaglutinovaných erytrocytov vo forme malého „krúžku“ alebo „gombíka“;
1+ - väčšina červených krviniek je neaglutinovaná a usadená vo forme malého „krúžku“ s hladkými okrajmi alebo „gombíka“ v strede spodnej časti otvoru.
(-) - nie sú žiadne známky aglutinácie. Červené krvinky sa usadili vo forme malého „krúžku“ s hladkými okrajmi alebo gombíkom v strede jamky alebo na dne skúmavky.
Reakcia aspoň 3+ sa považuje za pozitívnu.
Výsledky získané v RPGA možno považovať za spoľahlivé, ak diagnostické sérum salmonely adsorbované na B receptor suchý 1:10 získalo pozitívny výsledok v zriedení nie menej ako 14 ich titrov a v 2 jamkách s analyzovaným sérom a s diagnostickým Salmonella sérový adsorbovaný B receptor suchý v riedení 1:10 by nemali byť žiadne vločky ani sediment; v jamkách s 0,9% roztokom chloridu sodného a diagnosticum - reakcia je negatívna.
Protilátkový titer analyzovaného séra sa považuje za posledné riedenie séra, ktoré stále poskytuje pozitívnu aglutináciu červených krviniek.
Interpretácia výsledkov.
Osoby, ktoré majú protilátky proti antigénu B v zriedení 1:40 alebo vyššom, sa považujú za osoby podozrivé z chronického prenášania baktérií týfusu. Avšak vzhľadom na to, že diagnózu nemožno stanoviť len na základe sérologického vyšetrenia, je potrebné hĺbkové bakteriologické vyšetrenie.

Bezpečnostné opatrenia pri používaní

Súčasťou súpravy je diagnostické sérum Salmonella adsorbovaný suchým inaktivovaným B receptorom.
Testovacie séra sa musia inaktivovať pri 56 °C počas 30 minút.
Testovacie séra, ako aj činidlá, vybavenie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, môžu predstavovať potenciálne infekčný materiál a treba s nimi zaobchádzať opatrne:
- pracovať s gumenými rukavicami;
- pri pipetovaní je potrebné používať automatické zariadenia;
- po ukončení práce ošetrite analyzované séra a reagencie a nástroje, ktoré sú s nimi v kontakte, dezinfekčným roztokom;
- pred a po použití utrite vybavenie 96% etylalkoholom.

Objektívne výsledky analýzy sú zaručené, ak sú splnené nasledujúce podmienky:
- všetky reagencie súpravy by sa mali skladovať pri teplote 2 až 8 °C;
- nepoužívajte reagencie po expirácii;
- nepoužívajte reagencie súpravy, ak na ich obale nie je vhodné označenie;
- na vykonanie RPGA použite činidlá, ktoré sú súčasťou tejto súpravy.

Osvedčenie o evidencii č. RZN 2016/3905 zo dňa 4.4.2016

Účel

Súprava reagencií „Diagnosticum erythrocyte salmonella Vi-antigen for RPHA“ (SED-Vi) je určená na detekciu protilátok proti Vi-antigénu pôvodcu brušného týfusu v ľudských krvných sérach reakciou pasívnej hemaglutinácie (RPHA ).

Charakteristika súpravy

Princíp fungovania

V prítomnosti protilátok proti pôvodcovi brušného týfusu sa pozoruje hemaglutinácia kuracích erytrocytov senzibilizovaných Vi antigénom, čo vedie k vytvoreniu „dáždnika“ usadených erytrocytov na dne jamiek v tvare U doštičky. . Pri absencii protilátok proti pôvodcovi týfusu tvoria usadené červené krvinky „bodku“.

Nastavte obsah

Názov činidla	Popis	Množstvo v súprave
Diagnosticum erytrocytový salmonella Vi-antigén, suchý 6% (EDS)	Formalizované kuracie erytrocyty senzibilizované antigénom Vi S. typhi. Suchá hygroskopická hmota hnedej farby. Po rozpustení má suspenzia červenohnedú farbu.	1 fl., od 0,6 ml
Diagnostické sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, suché (riedené 1:20, (K+))	Králičie sérum Salmonella adsorbované, Vi receptor, zriedené 1:20. Suchá hygroskopická porézna hmota bielej farby. Po rozpustení je to priehľadná žltkastá alebo bezfarebná kvapalina.	1 fl., od 0,3 ml
Riedidlo testovacej vzorky (RSD)	Transparentná kvapalina modrofialovej farby.	1 fl., 10 ml
Fosfátový tlmivý roztok (PBS)	Priehľadná bezfarebná kvapalina.	1 fl., 10 ml
Polymérová tableta na jedno použitie na imunologické reakcie	Jednorazová polymérová tableta na imunologické reakcie vyrobená z priehľadného bezfarebného polystyrénu.	1 PC.

Diagnostické charakteristiky

Diagnostikum sa musí aglutinovať v RPHA s adsorbovaným diagnostickým sérom salmonely, Vi receptor, suché (riedenie 1:20), na titer uvedený na štítku séra. Podmienená úroveň diagnostických charakteristík krvného séra od zdravých ľudí by sa mala považovať za riedenie séra nie vyššie ako 1:20. Čas analýzy je 3040 minút. Súprava je určená na testovanie 42 krvných sér pri skríningovej možnosti alebo 10 krvných sér pri možnosti titrácie.

Preventívne opatrenia

Súprava je určená len na diagnostické použitie in vitro. Látky obsiahnuté v súprave sú inaktivované a bezpečné. Pri práci so súpravou by ste mali dodržiavať SP 1.3.2322-08 a SanPiN 2.1.7.2790-10.

Dodatočné vybavenie a materiály

Vybavenie, materiály, riešenia:

• 1-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl; 40 - 200 ul; 200 - 1000 ul a 1000 - 5000 ul;
• 8- alebo 12-kanálové pipetové dávkovače s variabilným dávkovacím objemom 5 - 40 µl a 40 - 200 µl;
• destilovaná voda (GOST 6709-72).

Analyzované vzorky

Študované vzorky krvného séra sa uchovávajú pri teplote 2 až 8 °C maximálne 3 dni od momentu odberu krvi. Srvátka sa môže skladovať zmrazená pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 1 rok. Pred použitím sa vzorky rozmrazia pri teplote 16 až 25 °C a premiešajú sa pretrepaním. Opätovné zmrazenie nie je povolené. Vzorky s rastom baktérií a hemolýzou by sa nemali používať. Pred uskutočnením reakcie sa testovacie séra zahrievajú na 56 °C počas 30 minút.

Vykonávanie analýzy

Príprava kontrolného diagnostického séra (K+)

Pripravte pracovný roztok diagnostického séra Salmonella adsorbovaného, ​​Vi receptor, suchý (riedenie 1:20) z 0,3 ml (K+). K tomu pridajte 0,3 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS) k obsahu fľaštičky s K+. Zostávajúce množstvo séra sa môže rozdeliť na alikvóty a uchovávať zmrazené pri teplote nepresahujúcej mínus 18 °C najviac 6 mesiacov.

Príprava Salmonella erythrocyte diagnosticum (SED)

Na prípravu pracovného riedenia suspenzie Salmonella erythrocyte diagnosticum sa k obsahu fľaše so suchým 6 % SED pridá 0,6 ml destilovanej vody a nechá sa hydratovať 2 hodiny pri teplote 16 až 25 °C. Potom sa k roztoku pridá 2,4 ml fosfátového tlmivého roztoku (PBS). Pracovný roztok sa uchováva pri teplote 2 až 8 °C najviac 1 mesiac. Zmrazovanie nie je povolené.

Stanovenie RPGA počas skríningu krvných sér

Krvné séra na skríningové štúdie sa zriedia v jamkách tablety nasledovne:

• V prvých jamkách platne sa pripravia predbežné riedenia 1:20, do ktorých sa najskôr pridá 190 μl RIP roztoku, potom 10 μl testovacieho séra. Každé sérum sa pridáva samostatnou špičkou a opatrne sa pipetuje (farba roztoku v jamkách po pridaní séra by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú);
• skríningové riedenia 1:40 sa pripravia v druhých jamkách tak, že sa do nich najprv pridá 25 μl roztoku PBS a potom 25 μl predriedeného séra a opatrne sa pipetuje.

Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120. Do ďalších 4 jamiek sa pridá 50 ul roztoku PBS, aby sa monitorovala neprítomnosť spontánnej hemaglutinácie EDS.

25 μl SED sa pridá do všetkých jamiek doštičky so skríningovými riedeniami testovacích sér (okrem prvých obsahujúcich RIP) a kontrol. Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.

Stanovenie RPGA počas titrácie testovaného krvného séra

Titrácia testovacieho séra a pracovného roztoku K+ sa uskutočňuje v krátkych radoch platne. Ďalší krátky riadok sa používa na sledovanie absencie spontánnej hemaglutinácie EDS.

Do prvých jamiek krátkych radov sa pridá 180 μl RIP roztoku na titráciu testovacieho séra. Pridajte 50 μl roztoku PBS do všetkých ostatných jamiek.

Do jamiek s RIP roztokom sa pridá 20 μl testovacieho séra (dosiahne sa riedenie 1:10). Každé sérum sa pridá vlastnou špičkou a opatrne sa odpipetuje (farba roztoku v jamkách by sa mala zmeniť z modrofialovej na zelenú). Potom sa 50 μl prenesie z prvých jamiek do ďalších jamiek v radoch, čím sa získajú dvojnásobné riedenia od 1:20 do 1:1280. Na konci titrácie sa z posledných jamiek odoberú roztoky v objeme 50 μl.

Zakaždým, keď sa vykoná RPGA, je potrebné vykonať kontrolné stanovenie titra K+. Za týmto účelom pridajte 50 μl roztoku PBS do 8 jamiek v dlhom rade. Potom pridajte 50 μl pracovného roztoku K+ (1:20) do prvej jamky, opatrne ju odpipetujte a preneste 50 μl do ďalších jamiek, čím získate dvojnásobné riedenie od 1:40 do 1:5120.

Na kontrolu diagnostiky na absenciu spontánnej hemaglutinácie sa do všetkých jamiek krátkeho radu pridá 50 ul roztoku PBS.

Do všetkých jamiek sa pridá 25 μl SED (okrem prvých jamiek každého radu pre testovacie séra obsahujúce RIP). Suspenziu SED pred použitím premiešajte vo fľaši alebo kúpeli! Tableta sa dôkladne pretrepe a nechá sa pri teplote 16 až 25 °C 30 - 40 minút, kým sa erytrocyty v kontrole úplne neusadia.

Účtovanie a interpretácia výsledkov

Účtovanie výsledkov pri skríningu krvného séra

Výsledky sa berú do úvahy na konvenčnej stupnici štyroch krížikov. Za titer séra sa považuje jeho zriedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu najmenej 3 (+++) kríženiami.

• ++++ (4+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje padajú;
• +++ (3+) - aglutinované erytrocyty tvoria na dne otvoru obrátený „dáždnik“, jeho okraje sú hladké;
• ++ (2+) - spolu s aglutinovanými erytrocytmi je na dne jamky sediment vo forme malého „krúžku“ neaglutinovaných erytrocytov;
• + (1+) - väčšina červených krviniek nie je aglutinovaná a usadzuje sa vo forme malého „krúžku“;
• (-) - neaglutinované červené krvinky tvoria „bodku“ na dne jamky.

Za pozitívny výsledok sa považuje hemaglutinácia erytrocytov zaťažených Vi-antigénom aspoň 3 kríženiami (+++).

Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú 4 jamky kontrolného radu, do ktorých sa pridával len roztok PBS a SED. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.

Séra s negatívnym výsledkom by sa mali považovať za neobsahujúce protilátky proti antigénu Vi s diagnostickým titrom 1:40 alebo nižším.

Séra, ktoré poskytujú pozitívny výsledok pri riedení 1:40, by sa mali znova otestovať titráciou séra, aby sa stanovil jeho titer.

Účtovanie výsledkov pri titrácii krvného séra

Za titer séra sa považuje jeho riedenie, ktoré poskytuje hemaglutináciu aspoň 3 (+++) kríženia.

Kontrolu kvality diagnostika zabezpečujú jamky radu na riadenie EDS. V týchto jamkách by nemalo dôjsť k spontánnej hemaglutinácii - reakcia je negatívna (-). V opačnom prípade by sa štúdia mala zopakovať. Ak sa po opätovnom zaradení do štádia objaví hemaglutinácia, liek sa nepoužíva.