Anti HIV 1 2 ce. Diagnosticul ELISA: care este esența, determinarea anticorpilor, cum se efectuează și pentru ce boli este eficient? Reacția polimerazei în lanț

Infecția cu HIV este clasificată ca o boală necontrolată din cauza lipsei de metode de prevenire a acesteia și a eficacității insuficiente a terapiei. Prin urmare, pentru monitorizarea situației epidemiologice a infecției cu HIV, în prezent sunt utilizate cu precădere studii de screening de diagnostic. Locul de frunte între metodele de diagnosticare a infecției cu HIV este ocupat de testul imunosorbent legat de enzime (ELISA), care face posibilă identificarea markerilor serologici ai agentului cauzal al acestei boli la persoanele examinate.

Acest raport prezintă rezultatele determinării anticorpilor HIV în serul sanguin a 40.823 de persoane, care au inclus și pacienți din clinici prenatale, clinici, spitale din oraș, precum și centre medicale specializate în examinarea și tratamentul pacienților cu risc (dependenți de droguri, pacienți). cu hepatită virală B, C și boli cu transmitere sexuală). Studiile au fost efectuate în anul 2005 în laboratorul de imunologie al Institutului de Cercetare de Obstetrică și Ginecologie, care poartă numele. INAINTE DE. Ott RAMS, care are o experiență de peste 15 ani în utilizarea metodelor ELISA pentru diagnosticarea diferitelor boli infecțioase.

Pentru examinarea inițială a probelor de ser de sânge, am folosit sistemul de testare „CombiBest anti-HIV-1+2” (ZAO „Vector-Best”, Novosibirsk), care detectează anticorpii specifici totali la HIV-1 și HIV-1 în probe examinate de ser sau plasmă umană 2 (imunoglobuline clasele A, G și M). În acest kit de diagnostic, proteinele recombinate HIV sunt utilizate atât pentru imobilizarea în godeurile plăcilor, cât și sub formă de conjugat cu peroxidază de hrean. Rezultatele analizei serului au fost evaluate în conformitate cu recomandările instrucțiunilor pentru sistemul de testare: probele testate au fost considerate negative (fără anticorpi pentru HIV-1 și HIV-2), a căror densitate optică (OD) în ELISA nu a depășit valoarea OPcrit.

La screening-ul în laborator, a fost obținut un rezultat ELISA negativ pentru 40.222 (98,5%) din 40.823 probe de ser și 601 (1,5%) dintre probele testate au fost considerate inițial pozitive. Ca rezultat al analizei repetate a fiecăruia dintre cele 601 seruri în duplicat (două godeuri ale plăcii) în ziua următoare, 440 (73,2%) probe au fost determinate a fi pozitive și 161 (26,8%) au fost determinate a fi negative. În conformitate cu recomandările Ministerului Sănătății și Dezvoltării Sociale, 440 de seruri screening-pozitive au fost congelate și transferate pentru studii de confirmare suplimentare la biroul de consultanță și diagnostic al laboratorului de referință al spitalului nr. 30 denumit după. S.P. Botkina. Aceste studii au fost efectuate folosind sisteme de testare imunoenzimatică „EKOlab-Vironostika HIV 1.2 Ag/Ab” („EKOlab”, Elektrogorsk), „Genscreen Plus” HIV Ag-Ab” („BioRad”, SUA), precum și truse pentru imunoblot. Rezultatele analizei a 440 de seruri în teste de confirmare au condus la concluzia că 323 (73,4%) probe au fost pozitive, iar 102 (23,2%) au fost negative. Pentru 15 probe testate (3,4%) s-a obținut un rezultat analitic nedeterminat.

Trebuie menționat că valorile DO obținute în laboratorul nostru în timpul testării lor inițiale folosind sistemul de testare CombiBest anti-HIV-1+2 pentru 314 (97,2%) dintre aceste 323 de seruri pozitive au variat între 0,900 și 1,780 și pentru 9. (2,8%) probe – 0,500–0,900. Valorile DO obținute din screeningul a 102 seruri negative pentru 52 de probe (51%) au variat între 0,195 și 0,400; pentru 40 (39,2%) probe – 0,401–0,800; 10 (9,8%) mostre – mai mult de 0.800.

Astfel, în urma lucrărilor efectuate, s-a demonstrat că examinarea inițială a serului sanguin pentru prezența markerilor serologici ai infecției cu HIV folosind sistemul de testare CombiBest anti-HIV-1+2 este foarte eficientă. Rezultatele pozitive ale screeningului au fost confirmate prin teste suplimentare în laboratorul de referință în 73% din cazuri, iar rezultate fals pozitive au fost înregistrate doar pentru 0,25% din 40.823 seruri analizate.

Descriere

Pregătirea

Indicatii

Interpretarea rezultatelor

Descriere

Metoda de determinare Testul imunosorbent legat de enzime (ELISA).

Material în studiu Ser de sânge

Vizita la domiciliu disponibila

Detectarea combinată a anticorpilor la HIV tipurile 1 și 2 și a antigenului HIV p24, test calitativ.

Atenţie. În cazul reacțiilor pozitive și discutabile, perioada de eliberare a rezultatelor poate fi prelungită la 10 zile lucrătoare. HIV (virusul imunodeficienței umane), care provoacă SIDA (sindromul imunodeficienței dobândite), aparține familiei retrovirusurilor. Se transmite de la persoană la persoană prin utilizarea de ace și seringi contaminate pentru administrarea intravenoasă de medicamente sau proceduri terapeutice, în timpul contactului sexual, atât heterosexual, cât și homosexual. Transmiterea virusului se poate produce prin transfuzia de sânge infectat și a produselor acestuia, donarea de organe sau lichid seminal și în rândul lucrătorilor medicali - prin rănirea cauzată de ace sau instrumente contaminate. Infecția cu HIV este posibilă prin transmiterea de la o mamă infectată la copil (cale verticală), deși metodele moderne de prevenire care utilizează terapia antiretrovială, dacă sunt respectate toate recomandările, pot reduce acest risc la minimum.

Procesul de interacțiune a unui virus cu o celulă include o serie de etape: legarea virusului de celulă, eliberarea acestuia din plic, pătrunderea în citoplasmă, sinteza ADN-ului folosind ARN viral, integrarea ADN-ului viral în genomul celula gazdă. După aceasta, începe stadiul latent al infecției. În această stare, ADN-ul proviral poate exista o perioadă de timp fără a prezenta activitate și fără a afecta viața celulei gazdă. Deși nu există o expresie a proteinelor virale, nu există niciun răspuns imun la virus. Anticorpii împotriva HIV, care caracterizează răspunsul imun al organismului, apar după activarea ADN-ului viral și începutul reproducerii active a virusului. Durata perioadei latente depinde de o serie de factori, inclusiv de caracteristicile genetice individuale ale organismului.

Anticorpii împotriva HIV pot apărea începând cu a doua săptămână după infectare; continutul lor creste in 2-4 saptamani si ramane multi ani. La 90-95% dintre persoanele infectate apar în primele trei luni după infectare, la 5-9% - în perioada de la trei până la șase luni, în 0,5-1% - la o dată ulterioară.

În primele săptămâni de infecție, chiar înainte de apariția anticorpilor împotriva virusului (adică înainte de seroconversie), prezența antigenelor HIV, inclusiv a proteinei capsidei p24, poate fi detectată în probele de ser sau plasmă. Mai târziu, după seroconversie, devine de obicei nedetectabil.

Sistemele de testare combinate de generația a 4-a, care includ testul HIV Ag/Ab Combo (Arhitect, Abbott), detectează atât anticorpii la HIV tipurile 1 și 2, cât și antigenul HIV p24, ceea ce permite detectarea precoce a infecției. Caracteristicile speciale ale testului de screening utilizat în laboratorul INVITRO pentru depistarea infecției cu HIV includ specificitatea ridicată a studiului (> 99,5%); Testul este 100% sensibil la anticorpii caracteristici perioadei de seroconversie, iar sensibilitatea testului la antigenul p24 este de aproximativ 18 pg/ml.

Procedura de efectuare a unei examinări de laborator pentru HIV este strict reglementată de ordinele Ministerului Sănătății al Federației Ruse și include etapa unui studiu de screening (selecție) a prezenței anticorpilor la HIV utilizând testul imunosorbent legat de enzime (ELISA). metode aprobate pentru utilizare, și stadiul unui studiu de verificare (confirmare) mai detaliat în laboratorul centrului SIDA al orașului. Trebuie remarcat faptul că nici cele mai bune sisteme ELISA de screening nu garantează o specificitate de 100%, adică există o anumită probabilitate de a obține rezultate nespecifice, fals pozitive, asociate cu caracteristicile serului sanguin al pacientului. Prin urmare, un rezultat pozitiv al unei examinări ELISA de screening poate să nu fie confirmat în testele de confirmare, după care pacientului i se va da un rezultat negativ sau nedeterminat. Dacă rezultatul studiului de confirmare este incert, testarea trebuie repetată în timp după 2-3 săptămâni.

Diagnosticul de laborator al infecției cu HIV la copiii născuți din mame infectate cu HIV are propriile sale caracteristici. Anticorpii materni împotriva HIV (clasa IgG) pot circula în sângele lor timp de până la 18 luni din momentul nașterii. Absența anticorpilor împotriva HIV la nou-născuți nu înseamnă că virusul nu a pătruns în bariera placentară. Copiii mamelor infectate cu HIV sunt supuși examinării diagnostice de laborator în termen de 36 de luni de la naștere.

Pregătirea

Nu necesită pregătire specială. Se recomandă ca sângele să fie luat nu mai devreme de 4 ore după ultima masă. Recomandări generale pentru pregătirea pentru cercetare pot fi găsite. Este recomandabil să se efectueze un test pentru a detecta antigenul și anticorpii HIV nu mai devreme de două săptămâni de la o posibilă infecție, cu un test repetat după trei și șase săptămâni în cazul unui rezultat negativ. Cererile de cercetare la INVITRO SRL se completează cu un pașaport sau un document care îl înlocuiește (carte de migrare, înregistrare temporară la locul de reședință, legitimație de personal militar, certificat de la oficiul de pașapoarte în caz de pierdere a pașaportului, carte de înregistrare de la un hotel). Documentul prezentat trebuie să conțină în mod necesar informații despre înregistrarea temporară sau permanentă în Federația Rusă și o fotografie. În lipsa unui pașaport (un document care îl înlocuiește), pacientul are dreptul de a completa o cerere anonimă pentru donarea de biomaterial. În cadrul unei examinări anonime, a unei cereri și a unei mostre de biomaterial primite de la client, i se atribuie un număr care este cunoscut doar de pacient și de personalul medical care a plasat comanda. ! Rezultatele studiilor efectuate anonim nu pot fi depuse pentru internare, examene profesionale si nu fac obiectul inregistrarii in ORUIB.

Indicatii de utilizare

Ganglioni limfatici măriți în mai mult de două zone.
Leucopenie cu limfopenie.
Transpirații nocturne.
Pierdere bruscă în greutate de cauză necunoscută.
Diaree de mai mult de trei săptămâni de cauză necunoscută.
Febră de cauză necunoscută.
Planificarea sarcinii.
Pregătirea preoperatorie, spitalizare.
Detectarea următoarelor infecții sau combinații ale acestora: tuberculoză, toxoplasmoză manifestă, infecție cu herpesvirus adesea recurentă, candidoză a organelor interne, nevralgie herpes zoster repetată, pneumonie cauzată de micoplasme, pneumocystis sau legionella.
Sarcomul lui Kaposi la o vârstă fragedă.
Contacte sexuale ocazionale.

Interpretarea rezultatelor

Interpretarea rezultatelor cercetării conține informații pentru medicul curant și nu reprezintă un diagnostic. Informațiile din această secțiune nu trebuie utilizate pentru auto-diagnosticare sau auto-tratament. Medicul pune un diagnostic precis folosind atât rezultatele acestei examinări, cât și informațiile necesare din alte surse: istoric medical, rezultate ale altor examinări etc.

Unitati de masura in Laboratorul Independent INVITRO: test calitativ. Forma de prezentare a rezultatelor: în absența anticorpilor împotriva antigenului HIV 1 și 2 și p24, răspunsul este „negativ”. Dacă sunt detectați anticorpi la HIV sau un antigen într-un test de screening imunosorbent legat de enzime, o probă de ser este trimisă pentru confirmare prin imunoblot la centrul orașului SIDA, care verifică rezultatele pozitive și nedeterminate.

Rezultat pozitiv:

infecție cu HIV;
rezultat fals pozitiv care necesită studii repetate sau suplimentare *);
studiul nu este informativ la copiii sub 18 luni născuți din mame infectate cu HIV.

*Specificitatea sistemului de teste de screening Anticorpi la HIV 1 și 2 și antigen HIV 1 și 2 (HIV Ag/Ab Combo, Abbott), conform estimărilor furnizate de producătorul de reactiv, este de aproximativ 99,6% atât în populația generală, cât și în grupați pacienți cu potențiale interferențe (infecții HBV, HCV, rubeolă, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl. trach. etc., patologii autoimune (inclusiv artrita reumatoidă, prezența anticorpilor antinucleari) , sarcina, niveluri crescute de IgG, IgM, gammapatii monoclonale, hemodializa, transfuzii multiple de sange).

Informații generale despre studiu

HIV (virusul imunodeficienței umane) este un virus din familia retrovirusurilor care infectează celulele sistemului imunitar uman (CD4, celule T helper). Provoacă SIDA.

HIV-1 este cel mai frecvent tip de virus, cel mai des întâlnit în Rusia, SUA, Europa, Japonia și Australia (de obicei subtipul B).

HIV-2 este un tip rar, comun în Africa de Vest.

Pentru a diagnostica virusul imunodeficienței umane, se folosește un sistem de testare combinat de a patra generație, care este capabil să detecteze infecția cu HIV în 2 săptămâni de la intrarea virusului în sânge, în timp ce sistemele de testare din prima generație fac acest lucru la doar 6-12 săptămâni după infecție.

Avantajul acestui test HIV combinat este detectarea, datorită utilizării anticorpilor la HIV-1 p24 ca reactivi, a antigenului specific p24 (proteina capside virală), care poate fi detectat prin acest test în 1-4 săptămâni de la momentul infecției, adică chiar înainte de seroconversie, care scurtează semnificativ „perioada fereastră”.

În plus, acest test HIV detectează anticorpii HIV-1 și HIV-2 în sânge (folosind reacția antigen-anticorp), care sunt produși în cantități suficiente pentru a fi detectați de sistemul de testare la 2-8 săptămâni după infectare.

După seroconversie, anticorpii încep să se lege de antigenul p24, rezultând un test de anticorpi HIV pozitiv și un test p24 negativ. Cu toate acestea, după ceva timp, atât anticorpii, cât și antigenul vor fi detectați în sânge în același timp. În stadiul terminal, un test SIDA pentru anticorpi la HIV poate da un rezultat negativ, deoarece mecanismul de producere a anticorpilor este perturbat.

Stadiile infecției cu HIV

Perioada de incubație, sau „perioada fereastră seronegativă”, este timpul de la momentul infecției până la dezvoltarea anticorpilor de protecție împotriva virusului în sânge, când testele pentru anticorpi la HIV sunt negative, dar persoana poate deja transmite virusul. altor persoane. Durata acestei perioade este de la 2 săptămâni la 6 luni.
Perioada de infecție acută cu HIV începe în medie la 2-4 săptămâni din momentul infectării și durează aproximativ 2-3 săptămâni. În această etapă, unii oameni pot dezvolta simptome nespecifice asemănătoare gripei din cauza replicării active a virusului.
Stadiul latent este asimptomatic, dar în timpul acestuia are loc o scădere treptată a imunității și o creștere a cantității de virus din sânge.
SIDA (sindromul imunodeficienței dobândite) este etapa finală de dezvoltare a infecției cu HIV, care se caracterizează prin supresia severă a sistemului imunitar, precum și boli concomitente, encefalopatie sau cancer.

În ciuda faptului că infecția cu HIV este incurabilă, astăzi există terapie antiretrovială (ART) foarte activă, care poate prelungi semnificativ viața unei persoane infectate cu HIV și poate îmbunătăți calitatea acesteia.

Acest test are o valoare diagnostică deosebit de mare dacă infecția cu HIV a apărut cu puțin timp înainte de momentul testării (2-4 săptămâni).

La ce se folosește cercetarea?

Analiza este utilizată pentru diagnosticarea precoce a HIV, ceea ce permite prevenirea transmiterii ulterioare a virusului către alte persoane, precum și inițierea în timp util a terapiei antiretrovirale și tratamentul bolilor care contribuie la progresia infecției cu HIV.

Când este programat studiul?

Cu simptome persistente (timp de 2-3 săptămâni) de etiologie necunoscută: febră scăzută, diaree, transpirații nocturne, scădere bruscă în greutate, ganglioni limfatici măriți.
Pentru infecții recurente cu herpes, hepatită virală, pneumonie, tuberculoză, toxoplasmoză.
Dacă pacientul suferă de boli cu transmitere sexuală (sifilis, chlamydia, gonoree, herpes genital, vaginoză bacteriană).
Dacă pacienta a avut sex vaginal, anal sau oral neprotejat cu mai mulți parteneri sexuali, un nou partener sau un partener de care pacientul nu este sigur de starea HIV.
Când pacientul a fost supus unei transfuzii de sânge de la donator (deși cazurile de infecție în acest fel sunt practic excluse, deoarece sângele este testat cu atenție pentru prezența particulelor virale și este supus unui tratament termic special).
Dacă pacientul a injectat droguri folosind instrumente sterile.
În timpul sarcinii/planificarea sarcinii (luarea de azidotimidină în timpul sarcinii, operația cezariană pentru a evita transmiterea virusului la copil în timpul trecerii prin canalul de naștere și evitarea alăptării reduce riscul de transmitere a HIV de la mamă la copil de la 30% la 1% ).
Injectarea accidentală cu o seringă sau alt obiect (de exemplu, un instrument medical) care conține sânge infectat (în astfel de cazuri probabilitatea de infecție este extrem de scăzută).

ELISA (enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA) a intrat în viața medicinei practice undeva în anii 60 ai secolului trecut. Sarcina sa inițială a fost cercetarea histologică în scopuri științifice, care sa rezumat la căutarea și identificarea structurii antigenice a celulelor unui organism viu.

Metoda ELISA se bazează pe interacțiunea antigenelor specifice (AT) și înrudite (AG) cu formarea unui complex „antigen-anticorp”, care este detectat folosind o enzimă. Acest fapt i-a determinat pe oamenii de stiinta sa creada ca metoda poate fi folosita in scopuri de diagnostic pentru a identifica imunoglobuline specifice din diferite clase implicate in raspunsul imun la o anumita infectie. Și a fost o descoperire în diagnosticul clinic de laborator!

Metoda a început să fie utilizată în mod activ abia la începutul anilor 80, iar apoi în principal în instituții specializate. Primele analizoare de imunoenzime au fost dotate cu centre și stații de transfuzie de sânge, spitale de boli infecțioase și de venerologie, de când formidabilul SIDA, născut pe continentul african, a apărut la orizontul nostru și s-a alăturat imediat infecțiilor „vechi”, a necesitat măsuri de diagnosticare imediată și căutare. pentru medicamentele terapeutice care îl afectează.

Domeniul de aplicare al metodei ELISA

Posibilitățile imunotestelor enzimatice sunt cu adevărat extinse. Acum este greu de imaginat cum se poate face fără o astfel de cercetare, care este folosită literalmente în toate ramurile medicinei. Se pare, ce poate face ELISA în oncologie? Se dovedește că se poate. Și multe. Capacitatea analizei de a găsi markeri caracteristici anumitor tipuri de neoplasme maligne stă la baza depistarii precoce a unei tumori, atunci când aceasta nu este încă determinată prin nicio altă metodă din cauza dimensiunilor reduse.

Diagnosticarea clinică modernă de laborator (CDL), pe lângă markerii tumorali, are un arsenal semnificativ de panouri ELISA și le utilizează pentru a diagnostica diferite afecțiuni patologice (procese infecțioase, tulburări hormonale) și pentru a monitoriza medicamentele farmaceutice pentru a identifica efectul acestora asupra organismului pacientului. și, de altfel, nu numai uman. În prezent, imunotestul enzimatic este utilizat pe scară largă în serviciile veterinare, deoarece „frații noștri mai mici” sunt, de asemenea, susceptibili la multe boli, de care suferă uneori foarte mult.

Prin urmare, ELISA, datorită sensibilității și specificității sale, poate determina dintr-o probă de sânge prelevată dintr-o venă:

Starea hormonală (hormoni tiroidieni și suprarenali, hormoni sexuali);
Prezența infecțiilor virale și bacteriene (HIV, B și C, chlamydia, sifilis și, precum și multe alte boli cauzate de microorganisme patogene);
Urme ale activității vitale a microorganismelor care au inițiat procesul infecțios, care s-a încheiat cu succes și a trecut în stadiul formării unui răspuns imun la acest agent patogen. Astfel de urme, adică anticorpii, în multe cazuri rămân în circulație în sânge pentru viață, protejând astfel o persoană de reinfectare.

Care este esența ELISA?

Metoda imunoenzimatică permite determinarea nu numai a prezenței agentului patogen în sine (analiza calitativă), ci și a conținutului său cantitativ în serul sanguin al pacientului.

Doza virală sau bacteriană influențează semnificativ cursul procesului infecțios și rezultatul acestuia, prin urmare analiza cantitativă joacă un rol important în diagnosticarea și tratamentul bolilor în diferite forme și etape.

Cu toate acestea, cunoscând studiile imunologice enzimatice ca metodă ELISA, nici nu ne gândim cum reușește să acopere o gamă atât de largă de microorganisme care locuiesc pe planeta noastră, dintre care multe reprezintă o amenințare directă pentru sănătatea și viața oamenilor și animalelor. Dar adevărul este că ELISA are multe opțiuni (necompetitive și competitive - directe și indirecte), fiecare dintre ele își rezolvă propria problemă și, astfel, permite o căutare țintită.

Pentru a identifica imunoglobulinele dintr-o clasă sau alta, se utilizează un panou (placă) tradițional de polistiren cu 96 de godeuri, în godeurile cărora proteinele recombinante sorbite sunt concentrate în fază solidă. Anticorpii sau antigenii care intră în godeul cu ser de sânge găsesc un obiect „familiar” și formează un complex cu acesta (AG - AT), care, fixat de un conjugat enzimatic, se va manifesta printr-o schimbare a culorii sondei atunci când citind rezultatele.

Imunotestul enzimatic se realizează folosind sisteme de testare cu o anumită specificitate, fabricate în laboratoare speciale și echipate cu toate componentele de reacție necesare. Cercetările se pot desfășura folosind mașini de spălat („săitori”) și spectrofotometre de citire, care implică în mare parte muncă manuală. Pe mașinile complet automate, care eliberează asistentul de laborator de instilarea monotonă, spălare și alte sarcini de rutină, desigur, este mai rapid și mai convenabil să lucrezi, dar nu toate laboratoarele își pot permite un astfel de lux și continuă să lucreze în mod veche - pe mașini semiautomate.

Interpretarea rezultatelor ELISA este de competența medicului diagnosticator de laborator și, de asemenea, trebuie luată în considerare proprietatea inerentă a aproape tuturor reacțiilor imunochimice de a da răspunsuri fals-pozitive sau fals-negative.

Video: imunotestul enzimatic modern

Rezultatele ELISA folosind exemplul sifilisului

Imunotestul enzimatic este potrivit pentru detectarea tuturor formelor, și, în plus, este utilizat în studiile de screening. Pentru efectuarea analizei se folosește sângele venos al pacientului prelevat pe stomacul gol. Lucrarea folosește tablete cu o anumită specificitate (clasele AB A, M, G) sau anticorpi totali.

Având în vedere că anticorpii din sifilis sunt produși într-o anumită secvență, ELISA poate răspunde cu ușurință la întrebarea când a apărut infecția și în ce stadiu se află procesul, iar interpretarea rezultatelor obținute poate fi prezentată în următoarea formă:

IgM indică durata procesului infecțios (poate apărea în timpul exacerbarii bolilor inflamatorii cronice);
IgA afirmă că infecția a apărut cu mai bine de o lună în urmă;
IgG indică faptul că infecția este în plină desfășurare sau că a fost efectuat recent un tratament, care este ușor de determinat prin anamneză.

La testarea pentru sifilis, godeurile negative (și controlul negativ) vor rămâne incolore, în timp ce godeurile pozitive (și controlul pozitiv) vor prezenta o culoare galben strălucitor din cauza schimbării de culoare a cromogenului adăugat în timpul testului. Cu toate acestea, intensitatea culorii nu coincide întotdeauna cu controlul, adică poate fi puțin mai palid sau ușor gălbui. Acestea sunt rezultate dubioase, care, de regulă, sunt supuse reexaminării cu luarea în considerare obligatorie a indicatorilor cantitativi obținuți pe spectrofotometru, dar, în general, culoarea este direct proporțională cu numărul de complexe imune (Ag și AT asociate) .

Cel mai interesant dintre imunotestele enzimatice este HIV ELISA

Analiza este poate mai interesantă decât altele pentru o gamă largă de populație, deoarece este încă imposibil de spus cu încredere că multe probleme sociale au dispărut (prostituția, dependența de droguri etc.). Din nefericire, HIV afectează nu numai aceste straturi ale societății umane; te poți infecta în diferite circumstanțe care nu au legătură cu imoralitatea sexuală sau consumul de droguri. Dar dacă este nevoie de un test HIV, nu trebuie să vă fie teamă că toată lumea din jurul vostru va ști despre vizita dumneavoastră la un astfel de laborator. Acum persoanele infectate cu HIV sunt protejate de lege, iar cei care au dubii pot apela la birouri anonime unde pot rezolva problema fara teama de publicitate si condamnare.

Metoda imunoenzimatică utilizată pentru diagnosticarea infecției cu HIV este unul dintre cele mai importante studii standard, care necesită însă condiții speciale, deoarece tema este foarte delicată.

Este logic să se efectueze ELISA HIV după contact sexual, transfuzie de sânge, alte proceduri medicale care sugerează infecție și la sfârșitul perioadei de incubație („fereastră seronegativă”), dar trebuie reținut că această perioadă de timp nu este constant. Se poate termina în 14-30 de zile, sau poate dura până la șase luni, astfel încât valoarea medie este considerată a fi un interval de la 45 la 90 de zile. Sângele este donat pentru HIV în același mod ca și pentru alte infecții - dintr-o venă pe stomacul gol. Rezultatele vor fi gata în funcție de acumularea de material în laborator și volumul de lucru al acestuia (de la 2 la 10 zile), deși cel mai adesea laboratoarele oferă un răspuns în aceeași zi sau în următoarea.

La ce te poți aștepta de la rezultatele tale HIV?

ELISA pentru infecția cu HIV detectează anticorpi la două tipuri de virus: HIV-1 (mai frecvent în Rusia și alte țări din Europa și Asia) și HIV-2 (mai frecvent în Africa de Vest).

Sarcina ELISA HIV este de a căuta anticorpi de clasa G, care sunt detectați pe toate sistemele de testare, dar într-o perioadă ulterioară, și anticorpi de clasa A și M, detectați pe truse de testare recombinate de nouă generație, care fac posibilă găsirea de anticorpi. în stadiile incipiente (perioada de incubație - „fereastră seronegativă”). Vă puteți aștepta la următoarele răspunsuri de la ELISA:

Rezultat primar pozitiv: sângele trebuie retestat folosind un sistem de testare de același tip, dar dacă este posibil de altă serie și de către o altă persoană (asistent de laborator);
Repetarea (+) implică o nouă prelevare de sânge de la pacient cu examinarea acestuia similară analizei primare;
Un alt rezultat pozitiv este supus analizei de referință, care utilizează truse de testare foarte specifice (2-3 buc.);
Un rezultat pozitiv în ambele (sau trei) sisteme este trimis pentru imunoblotting (același ELISA, dar efectuat individual folosind truse de testare cu specificitate deosebit de ridicată).

Concluzia despre infecția cu HIV se face numai pe baza imunoblotării. O conversație se poartă cu persoana infectată în deplină confidențialitate. Dezvăluirea secretelor medicale în Rusia, precum și în alte țări, este supusă pedepsei penale.

Testele pentru chlamydia și citomegalovirus folosind metoda imunoenzimatică au câștigat, de asemenea, o popularitate deosebită, datorită faptului că fac posibilă determinarea timpului infecției, stadiul bolii și eficacitatea măsurilor de tratament.

În timpul implementării, se poate observa și apariția anticorpilor de diferite clase.în diferite faze ale stării patologice cauzate de un agent infecțios:

IgM poate fi detectată încă de la șapte zile după infecție;
IgA indică faptul că infecția trăiește în organism de mai mult de o lună;
IgG confirmă diagnosticul de chlamydia și ajută la monitorizarea tratamentului și la determinarea eficacității acestuia. Trebuie remarcat faptul că anticorpii de clasa G rămân și circulă în organism, indiferent de durata bolii, prin urmare, pentru a interpreta corect analiza, trebuie să țineți cont de valorile de referință (norme), care, apropo. , sunt diferite pentru fiecare CDL: ținând cont de marca sistemului de testare și de specificul reactivilor incluși în set. Valorile normale sunt introduse în formularul de lângă rezultatul ELISA.

În ceea ce privește, aici este puțin diferit: anticorpii de clasa M apar după aproximativ o lună până la o lună și jumătate, adică rezultatul pozitiv (IgM+) devine în faza infecției primare sau în timpul reactivării unei infecții latente și rămâne astfel de la 4 luni la șase luni.

Prezența anticorpilor de clasa G este caracteristică apariției unei infecții sau reinfecții acute primare. Analiza afirmă că virusul este prezent, dar nu oferă informații despre stadiul în care se află procesul infecțios. Între timp, determinarea titrului normal de IgG provoacă, de asemenea, dificultăți, deoarece depinde în întregime de starea imunitară a unei anumite persoane, care, totuși, se stabilește prin identificarea imunoglobulinelor de clasa G. Având în vedere acest comportament al anticorpilor, la diagnosticarea CMV, este nevoie pentru a evalua capacitatea anticorpilor de clasa G de a interacționa cu CMV, pentru a-l „neutraliza” ulterior (aviditate AT). În stadiul inițial al bolii, IgG se leagă foarte slab de antigenele virale (aviditate scăzută) și abia apoi începe să prezinte activitate, prin urmare, putem vorbi despre o creștere a avidității anticorpilor.

Putem vorbi mult despre avantajele imunotestului enzimatic, deoarece această metodă a reușit să rezolve multe probleme de diagnostic folosind doar sânge venos. Nu este nevoie de lungi așteptări, griji și probleme cu colectarea materialului pentru cercetare. În plus, sistemele de testare pentru ELISA continuă să fie îmbunătățite și nu este departe ziua în care testul va da un rezultat 100% fiabil.

Video: film educațional al Universității Medicale de Stat din Moscova numit după. Sechenov despre elementele de bază ale ELISA

Diagnosticul în timp util al infecției cu HIV devine o măsură extrem de importantă, deoarece inițierea timpurie a tratamentului poate determina în mare măsură dezvoltarea ulterioară a bolii și poate prelungi viața pacientului. În ultimii ani, s-au înregistrat progrese semnificative în identificarea acestei boli groaznice: sistemele de testare mai vechi sunt înlocuite cu altele mai avansate, metodele de examinare devin din ce în ce mai accesibile, iar acuratețea lor crește semnificativ.

În acest articol vom vorbi despre metode moderne de diagnosticare a infecției cu HIV, cunoașterea cărora este utilă pentru tratarea în timp util a acestei probleme și pentru menținerea unei calități normale a vieții pacientului.

Metode de diagnosticare HIV

În Rusia, se efectuează o procedură standard pentru a diagnostica infecția cu HIV, care include două niveluri:

Sistem de testare ELISA (analiza screening);
imunoblot (IB).

Pentru diagnosticare pot fi utilizate și alte metode:

teste rapide.

Sisteme de testare ELISA

În prima etapă a diagnosticului, un test de screening (ELISA) este utilizat pentru a detecta infecția cu HIV, care se bazează pe proteinele HIV create în laboratoare care captează anticorpi specifici produși în organism ca răspuns la infecție. După interacțiunea lor cu reactivii (enzimele) sistemului de testare, culoarea indicatorului se schimbă. În continuare, aceste modificări de culoare sunt procesate cu ajutorul unor echipamente speciale, care determină rezultatul analizei efectuate.

Astfel de teste ELISA pot arăta rezultate în câteva săptămâni de la introducerea infecției cu HIV. Acest test nu determină prezența virusului, ci detectează producția de anticorpi împotriva acestuia. Uneori, în corpul uman, producția de anticorpi împotriva HIV începe după 2 săptămâni de la infectare, dar la majoritatea oamenilor aceștia sunt produși la o dată ulterioară, după 3-6 săptămâni.

Există patru generații de teste ELISA cu sensibilități diferite. În ultimii ani, au fost din ce în ce mai utilizate sisteme de testare de generația a treia și a patra, care se bazează pe peptide sintetice sau proteine recombinate și au o specificitate și o precizie mai mare. Acestea pot fi utilizate pentru a diagnostica infecția cu HIV, pentru a monitoriza prevalența HIV și pentru a asigura siguranța la testarea sângelui donat. Precizia sistemelor de testare ELISA din generațiile III și IV este de 93-99% (testele produse în Europa de Vest sunt mai sensibile - 99%).

Pentru a efectua un test ELISA, se prelevează 5 ml de sânge din vena pacientului. Între ultima masă și analiză trebuie să treacă cel puțin 8 ore (de obicei se face dimineața pe stomacul gol). Se recomandă efectuarea unui astfel de test nu mai devreme de 3 săptămâni de la infecția suspectată (de exemplu, după un contact sexual neprotejat cu un nou partener sexual).

Rezultatele testului ELISA se obțin în 2-10 zile:

rezultat negativ: indică absența infecției cu HIV și nu necesită contactarea unui specialist;
rezultat fals negativ: poate fi observat în stadiile incipiente ale infecției (până la 3 săptămâni), în stadiile ulterioare ale SIDA cu suprimarea severă a sistemului imunitar și cu pregătirea necorespunzătoare a sângelui;
rezultat fals pozitiv: poate fi observat în unele boli și în caz de pregătire necorespunzătoare a sângelui;
rezultat pozitiv: indică infecția cu HIV, necesită efectuarea unui IB și contactarea pacientului cu un specialist la centrul SIDA.

De ce poate un test ELISA să dea rezultate fals pozitive?

Rezultatele fals pozitive ale testelor HIV ELISA pot apărea din cauza procesării necorespunzătoare a sângelui sau la pacienții cu următoarele afecțiuni și boli:

mielom multiplu;
boli infecțioase cauzate de virusul Epstein-Barr;
stare dupa ;
boală autoimună;
pe fundalul sarcinii;
starea după vaccinare.

Din motivele descrise mai sus, anticorpii nespecifici cu reacție încrucișată pot fi prezenți în sânge, a căror producție nu a fost provocată de infecția cu HIV.

În ultimii ani, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ datorită utilizării sistemelor de testare din generația III și IV, care conțin peptide mai sensibile și proteine recombinante (sunt sintetizate prin inginerie genetică in vitro). După introducerea unor astfel de teste ELISA, frecvența rezultatelor fals pozitive a scăzut semnificativ și este de aproximativ 0,02-0,5%.

Un rezultat fals pozitiv nu înseamnă că persoana este infectată cu HIV. În astfel de cazuri, OMS recomandă efectuarea unui alt test ELISA (neapărat generația IV).

Sângele pacientului este trimis la un laborator de referință sau de arbitraj cu marcajul „repetare” și testat folosind un sistem de testare ELISA de generația IV. Dacă rezultatul noii analize este negativ, atunci primul rezultat este considerat eronat (fals pozitiv) și IS nu este efectuat. Dacă rezultatul este pozitiv sau discutabil în timpul celui de-al doilea test, pacientul trebuie să fie supus IB după 4-6 săptămâni pentru a confirma sau infirma infecția cu HIV.

Blotting imun

Un diagnostic definitiv de infecție cu HIV poate fi pus doar după obținerea unui rezultat pozitiv al imunoblotării (IB). Pentru a-l realiza, se folosește o bandă de nitroceluloză, pe care se aplică proteine virale.

Prelevarea de sânge pentru IB se efectuează dintr-o venă. În continuare, suferă o prelucrare specială, iar proteinele conținute în serul său sunt separate într-un gel special în funcție de sarcina și greutatea moleculară a acestora (manipularea se realizează folosind echipamente speciale sub influența unui câmp electric). Pe gelul de ser sanguin se aplică o bandă de nitroceluloză și se efectuează blotting („blotting”) într-o cameră specială. Banda este procesată și dacă materialele folosite conțin anticorpi împotriva HIV, aceștia se leagă de benzile antigenice de pe IB și apar ca linii.

IB este considerat pozitiv dacă:

conform criteriilor americane CDC - există două sau trei linii gp41, p24, gp120/gp160 pe bandă;
conform criteriilor FDA americane, banda are două linii p24, p31 și o linie gp41 sau gp120/gp160.

În 99,9% din cazuri, un rezultat pozitiv IB indică infecția cu HIV.

Dacă nu există linii, IB este negativ.

La identificarea liniilor cu gr160, gr120 și gr41, IB este îndoielnic. Acest rezultat poate apărea atunci când:

boli oncologice;
sarcina;
transfuzii de sânge frecvente.

În astfel de cazuri, se recomandă repetarea studiului folosind un kit de la o altă companie. Dacă după IB suplimentar rezultatul rămâne îndoielnic, atunci observarea este necesară timp de șase luni (IB se efectuează la fiecare 3 luni).

Reacția polimerazei în lanț

Un test PCR poate detecta ARN-ul virusului. Sensibilitatea sa este destul de mare și permite detectarea infecției cu HIV în 10 zile de la infectare. În unele cazuri, PCR poate da rezultate fals pozitive, deoarece sensibilitatea sa ridicată poate răspunde și la anticorpii la alte infecții.

Această tehnică de diagnosticare este costisitoare și necesită echipamente speciale și specialiști cu înaltă calificare. Aceste motive nu fac posibilă efectuarea de teste în masă a populației.

PCR este utilizată în următoarele cazuri:

depistarea HIV la nou-născuții născuți din mame infectate cu HIV;
pentru a detecta HIV în „perioada fereastră” sau în caz de IB îndoielnic;
pentru a controla concentrația HIV în sânge;
pentru studiul sângelui donatorului.

Testul PCR singur nu pune un diagnostic de HIV, ci este efectuat ca o metodă suplimentară de diagnosticare pentru a rezolva situațiile controversate.

Metode expres

Una dintre inovațiile în diagnosticarea HIV sunt testele rapide, ale căror rezultate pot fi evaluate în 10-15 minute. Cele mai eficiente și precise rezultate se obțin cu ajutorul testelor imunocromatografice bazate pe principiul fluxului capilar. Sunt benzi speciale pe care se aplică sânge sau alte fluide de testare (salivă, urină). Dacă sunt prezenți anticorpi împotriva HIV, după 10-15 minute pe test apare o bandă colorată și de control - un rezultat pozitiv. Dacă rezultatul este negativ, apare doar banda de control.

Ca și în cazul testelor ELISA, rezultatele testelor rapide trebuie confirmate prin analiza IB. Numai după aceasta se poate face un diagnostic de infecție cu HIV.

Există kituri de testare rapidă la domiciliu disponibile. Testul OraSure Technologies1 (SUA) este aprobat de FDA, disponibil la ghișeu și poate fi folosit pentru a detecta HIV. După test, dacă rezultatul este pozitiv, pacientului i se recomandă să fie supus unei examinări la un centru specializat pentru confirmarea diagnosticului.

Alte teste pentru uz casnic nu au fost încă aprobate de FDA și rezultatele lor pot fi foarte discutabile.

În ciuda faptului că testele rapide sunt inferioare ca precizie față de testele ELISA de generația IV, acestea sunt utilizate pe scară largă pentru testarea suplimentară a populației.

Puteți face teste pentru depistarea infecției cu HIV la orice clinică, spital central raional sau centre specializate SIDA. Pe teritoriul Rusiei, acestea se desfășoară în mod absolut confidențial sau anonim. Fiecare pacient se poate aștepta să primească consult medical sau psihologic înainte sau după test. Nu va trebui să plătiți decât pentru testele HIV în instituțiile medicale comerciale, în timp ce în clinicile publice și spitalele acestea se efectuează gratuit.

Citiți despre modalitățile prin care vă puteți infecta cu HIV și ce mituri există despre posibilitățile de a vă infecta.