Šiuolaikiniai ŽIV infekcijos diagnostikos metodai. IFA diagnostika: Koks yra esmė, antikūnų apibrėžimas, kaip jie atliekami ir kokiomis ligomis yra veiksmingos? Polimerazės grandinės reakcija

Laiku diagnozė ŽIV infekcijos tampa labai svarbi priemonė, nes anksčiau gydymo pradžia gali iš esmės lemia tolesnį vystymąsi ligos ir pratęsti paciento gyvenimą. Pastaraisiais metais buvo pastebėta didelė pažanga nustatant šią siaubingą ligą srityje: labiau pažengę, tyrimo metodai ateiti pakeisti senas bandymų sistemas, ir jų tikslumas didėja gerokai.

Šiame straipsnyje mes pasakysime apie šiuolaikinius ŽIV infekcijos diagnozavimo metodus, kurie yra naudingi laiku gydyti šią problemą ir išlaikyti normalią ligos gyvenimo kokybę.

ŽIV diagnostikos metodai

Rusijoje, standartinė procedūra yra atliekama už ŽIV infekcijos diagnozę, kuri apima du lygius:

• ELISA bandymų sistema (atrankos analizė);
• imuninė dėmė (IB).

Kiti metodai taip pat gali būti taikomi diagnostikai:

• express testai.

IFA bandymų sistema

Pirmajame diagnostikos etape, atrankos testas (ELISA) naudojamas aptikti ŽIV infekcijos, kuri yra pagrįsta ŽIV baltymų, sukurtų laboratorijose, užfiksuoti konkrečius antikūnus, susidarančius organizme reaguojant į infekciją. Po jų sąveikos su reagentais (fermentais) bandymo sistema keičia rodiklio spalvą. Be to, šie spalvų pokyčiai apdorojami specialioje aparatūroje, kuri nustato atliktos analizės rezultatus.

Tokie IFA bandymai gali parodyti rezultatą po kelių savaičių po ŽIV infekcijos įvedimo. Ši analizė nenustato viruso buvimą, bet atskleidžia antikūnų gamybą į jį. Kartais žmogaus organizme antikūnų gamyba į ŽIV prasideda po 2 savaičių infekcijos laukas, tačiau dauguma žmonių gaminami vėlesniais terminais po 3-6 savaičių.

Yra keturios IFA bandymų su skirtingu jautrumu. Pastaraisiais metais dažnai naudojamos bandymo sistemos III ir IV kartos, kurios grindžiamos sintetiniais peptidais arba rekombinantiniais baltymais ir turi didesnį specifiškumą ir tikslumą. Jie gali būti naudojami diagnozuoti ŽIV infekcijos, stebint ŽIV paplitimą ir saugumą tikrinant donorų kraują. IFA bandymo sistemų tikslumas III ir IV kartos yra 93-99% (daugiau jautrių bandymų, kurie gaminami Vakarų šalyse - 99%).

Už IFA testo vykdymą, imamasi 5 ml kraujo iš paciento venų. Tarp paskutinio valgio ir analizės turėtų užtrukti mažiausiai 8 valandas (kaip taisyklė, jis atliekamas ryte tuščiu skrandžiu). Toks bandymas rekomenduojamas ne anksčiau kaip prieš 3 savaites po tariamos infekcijos (pavyzdžiui, po nesaugių lytinių santykių su nauju seksualiniu partneriu).

IFA bandymų rezultatai gaunami per 2-10 dienų:

• neigiamas rezultatas: nurodo ŽIV infekcijos trūkumą ir nereikalauja prieigos prie specialisto;
• netinkamas neigiamas rezultatas: gali būti pastebimas ankstyvaisiais infekcijos sąlygomis (iki 3 savaičių), vėlesniais AIDS etapais su ryškiu imuniteto slopinimu ir netinkamai atliktu kraujo paruošimu;
• klaidingas teigiamas rezultatas: gali būti laikomasi tam tikrų ligų ir netinkamai atlikto kraujo preparato;
• teigiamas rezultatas: nurodo ŽIV infekcijos infekciją, reikia IB ir cirkuliacija paciento į AIDS centro specialistui.

Kodėl IFA testas suteikia klaidingus teigiamus rezultatus?

Neteisingų ŽIV bandymų su klaidingais teigiamais rezultatais gali būti stebimi netinkamu kraujo perdirbimu arba pacientams, kuriems yra tokių sąlygų ir ligų:

• daugybė mielomos;
• infekcinės ligos, kurias sukėlė Epstein-Barr viruso;
• sąlyga po;
• autoimuninės ligos;
• prieš nėštumo foną;
• būklė po vakcinacijos.

Su pirmiau aprašytomis kraujo priežastimis, nespecifinis skersinis antikūnų gali būti, kurio gamyba nebuvo išprovokuota ŽIV infekcija.

Pastaraisiais metais klaidingų teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo dėl generavimo bandymų sistemų naudojimo III ir IV, kurioje yra jautrių peptido ir rekombinantinių baltymų (jie sintetinami in vitro genetine inžinerija). Po to, kai naudojate tokius IFA bandymus, klaidingų teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo ir yra apie 0,02-0,5%.

Neteisingo teigiamo rezultato nustatymas nereiškia, kad asmuo yra užkrėstas ŽIV. Tokiais atvejais, kurie rekomenduoja dar vieną IFA testą (reikalingas IV kartos).

Paciento kraujas siunčiamas į nuorodą ar arbitražo laboratoriją su pastaba "pakartokite" ir tiriama IFA bandymo sistemos IV kartos. Jei naujos analizės rezultatas yra neigiamas, tada pirmasis rezultatas yra pripažįstamas kaip klaidingas (klaidingas teigiamas) ir IB nėra atliekamas. Su teigiamu ar abejotinu rezultatu, antrajame bandyme, pacientas nebūtinai priskiriamas IB atlikti po 4-6 savaites, kad patvirtintumėte arba paneigtumėte ŽIV infekciją.

Imuninis blotavimas

Galutinė ŽIV infekcijos diagnostika gali būti įdiegta tik gavus teigiamą imuninio blotavimo (IB) rezultatą. Jis naudoja nitroceliuliozinę juostelę, ant kurios taikomos virusiniai baltymai.

IB kraujo tvora atliekama iš venų. Be to, jis yra atliekamas specialaus perdirbimo ir baltymų, esančių jos serume yra atskirti specialioje gelio pagal jų įkrovos ir molekulinės masės (manipuliavimas atliekamas specialią įrangą pagal elektros lauko įtaką). Nitroceliuliozės juosta skiriama ant kraujo serumo gelio ir blokuoja ("žala") specialioje kameroje. Strietė apdorojama ir jei naudojamos medžiagos yra antikūnai, jie yra susiję su antigeninių juostelių IB ir pasireiškia kaip linijos.

IB laikoma teigiama, jei:

• pagal Amerikos CDC kriterijus - yra dvi arba trys GP41, P24, GP120 / GP160;
• pagal Amerikos FDA kriterijus - ant juostelės yra dvi linijos P24, P31 ir linija G41 arba GR120 / GR160.

99,9% atvejų teigiamas IB rezultatas rodo ŽIV infekciją.

Nesant linijų - IB yra neigiamas.

Nustatant linijas su G160, G120 ir G41- IB abejotina. Šį rezultatą galima aptikti:

• onkologinės ligos;
• nėštumas;
• dažnas kraujo transfekavimas.

Tokiais atvejais rekomenduojama atlikti pakartotinį tyrimą naudojant kitos įmonės rinkinį. Jei po papildomo IB, rezultatas yra abejotinas, tai būtina stebėti šešis mėnesius (IB vyksta kas 3 mėnesius).

Polimerazės grandinės reakcija

PCR bandymas gali nustatyti viruso RNR. Jo jautrumas yra pakankamai aukštas ir leidžia jums nustatyti ŽIV infekciją po 10 dienų po infekcijos. Kai kuriais atvejais PCR gali duoti klaidingų teigiamų rezultatų, nes jo didelis jautrumas gali reaguoti į antikūnus į kitas infekcijas.

Ši diagnostikos technika yra brangi, reikia specialios įrangos ir aukštos specialistų kvalifikacijos. Šios priežastys neleidžia jai vykdyti su masiniu gyventojų testavimu.

PCR taiko tokiais atvejais:

• identifikuoti ŽIV naujagimių, kurie gimė iš ŽIV užkrėstų motinų;
• identifikuoti ŽIV "lango laikotarpiu" arba su abejotinu IB;
• kontroliuoti ŽIV koncentraciją kraujyje;
• dėl donorų kraujo tyrimų.

Tik PCR testas, ŽIV nėra atliekamas, tačiau atliekamas kaip papildomas diagnostinis metodas, siekiant išspręsti prieštaringų situacijų.

Express metodai

Express testai, kurių rezultatai gali būti vertinami po 10-15 minučių, tapo viena iš ŽIV diagnozavimo naujovių. Efektyviausi ir tikslūs rezultatai gaunami naudojant imunochromatografinius tyrimus, pagrįstus kapiliarų srauto principu. Jie yra specialios juostos, ant kurios taikomos kraujas arba kiti mokomi skysčiai (seilių, šlapimo). Jei yra antikūnų iki ŽIV, po 10-15 minučių, bandyme yra spalvų ir valdymo juosta - teigiamas rezultatas. Su neigiamu rezultatu pasirodo tik valdymo juosta.

Kaip po IFA testų, aiškių bandymų rezultatai turi būti patvirtinti IB analize. Tik po to gali būti diagnozuota ŽIV infekcija.

Bandymui yra skubūs rinkiniai. Bandymo Orasure Technologies1 (JAV) Patvirtinta FDA, parduodama be recepto ir gali būti naudojama ŽIV identifikavimui. Po bandymų, atsižvelgiant į teigiamą rezultatą atveju, pacientui rekomenduojama atlikti specializuoto centro apklausą, kad patvirtintumėte diagnozę.

Likę vidaus bandymai dar nebuvo patvirtinti FDA ir jų rezultatas gali būti labai abejotinas.

Nepaisant to, kad išreikšti bandymai yra prastesni už IV kartų bandymus, jie yra plačiai naudojami papildomiems gyventojų bandymams.

Galite atlikti bandymus, kad nustatytumėte ŽIV infekciją bet kurioje poliklinikoje, CH arba specializuotos AIDS centruose. Rusijoje jie atliekami visiškai konfidenciali arba anonimiškai. Kiekvienas pacientas gali tikėtis medicininės ar psichologinės konsultacijos prieš arba po analizės. Turėsite mokėti už ŽIV testus tik komercinėse medicinos įstaigose, ir jos yra įvykdytos viešose klinikose ir ligoninėse.

Apie kokius būdus galite užsikrėsti ŽIV infekcija ir kokie mitai egzistuoja apie galimybes užsikrėsti, skaityti

apibūdinimas

Paruošimas

Indikacijos

REZULTATŲ VERTINIMAS. \\ T

apibūdinimas

Apibrėžimas Immuno fermentų analizė (ELISA).

Medžiaga pagal tyrimą Kraujo serume. \\ T

Galima išvykti į namus

Kombinuotas antikūnų aptikimas 1 ir 2 tipams ir antigenui R24 ŽIV, aukštos kokybės bandymas.

DĖMESIO. Su teigiamomis ir abejotinomis reakcijomis rezultatų išdavimo terminas gali būti padidintas iki 10 darbo dienų. ŽIV (žmogaus imunodeficito virusas), sukelia AIDS (įgytas imunodeficito sindromas) - priklauso retrovirusų šeimai. Perduodami asmeniui, kai naudojate užterštus adatas ir švirkštus į veną narkotikų vartojimo ar terapinių procedūrų, su seksualiniais kontaktais, pvz., Hetero ir homoseksualu. Viruso perdavimas gali atsirasti, kai perpildytas užkrėstas kraujas ir jo produktai, organų ar sėklų skysčio donorystė, medicinos darbuotojai - švirkščiant užkrėstų adatų ar įrankių. ŽIV infekcija yra įmanoma perkelti iš vaiko užkrėstos motinos (vertikalaus kelio), nors šiuolaikiniai prevencijos metodai naudojant antiretrovirusinį gydymą, vykdydami visas rekomendacijas, sumažinti tokią riziką iki minimumo.

Sąveikos tarp viruso su ląstelėmis procesas apima daugybę etapų: viruso sujungimas su ląstelėmis, atleiskite jį nuo apvalkalo, įsiskverbimo į citoplazmą, DNR sintezę už virusinę RNR, įterpiant virusinę DNR į šeimininką genetas. Po to prasideda latentinis infekcijos etapas. Tokioje valstybėje, įrodanti DNR gali egzistuoti tam tikrą laiką be rodymo veiklą ir nedarant įtakos gyvybiškai svarbi šeimininkų ląstelės veikla. Nėra virusinių baltymų, nėra imuninio atsako į virusą. ŽIV antikūnai, apibūdinantys kūno imuninį atsaką, pasirodo po virusinės DNR aktyvavimo ir viruso aktyvaus veisimo pradžios. Latentinio laikotarpio trukmė priklauso nuo daugelio veiksnių, įskaitant individualius kūno genetinius bruožus.

ŽIV antikūnai gali pasirodyti nuo antrosios savaitės po infekcijos; Jų turinys padidėja 2-4 savaites ir yra išlaikytas per metus. 90-95% užkrėstų, jie pasirodo per pirmuosius tris mėnesius po infekcijos, 5-9% - laikotarpiu nuo trijų iki šešių mėnesių, 0,5-1% - vėliau.

Per pirmąsias infekcijos savaites, net prieš antikūnų atsiradimą į virusą (i.e., prieš servo konversiją), serume arba plazmoje, gali būti identifikuojami ŽIV antigenų buvimas, įskaitant jo kapsidų baltymą P24. Vėliau po serokonversijos ji paprastai tampa ne nustatyta.

Kombinuotos 4-osios kartos bandymo sistemos, įskaitant ŽIV AG / AB "Combo" testą (architektą, Abbott), aptinka tiek antikūnus į ŽIV 1 ir 2 tipus ir ŽIV antigeną R24, kuris leidžia anksti aptikti infekciją. ŽIV infekcijos aptikimo laboratorijoje naudojamo INVITRO atrankos bandymo ypatumai turėtų būti priskirti dideliam mokslinių tyrimų specifiškumui (\u003e 99,5%); 100% jautrumas antikūnams charakteristiškai serokonversijos laikotarpiui ir bandymo jautrumą iki maždaug 18 p / ml P24 antigeno.

ŽIV laboratorinio tyrimo atlikimo tvarka griežtai reglamentuoja Rusijos Federacijos Sveikatos apsaugos ministerijos įsakymais ir apima antikūnų tyrimo su ŽIV imuniferų (IFA) metodais, ir jų naudojimo metodus Patikrinimo etapas (patvirtinantis) išsamesnį tyrimą dėl AIDS miesto centro laboratorijos. Pažymėtina, kad net geriausi patikrinimo IFA sistemos negarantuoja 100% specifiškumo, tai yra tikimybė gauti nespecifinius, klaidingus teigiamus rezultatus, susijusius su paciento kraujo serumo ypatumais. Todėl teigiamas atrankos IFA tyrimas negali būti patvirtintas patvirtinimo bandymuose, po kurio pacientas suteiks neigiamą ar neribotą rezultatą. Su neapibrėžtu patvirtinančio tyrimo rezultatais, bandymai turėtų būti pakartoti dinamikoje per 2-3 savaites.

ŽIV infekuotų motinų gimusių vaikų laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika turi savo charakteristikas. Jų kraujyje iki 18 mėnesių nuo gimimo momento gali cirkuliuoti motinos antikūnus į ŽIV (IgG klasės). Antikūnų nebuvimas ŽIV naujagimiuose nereiškia, kad virusas nėra įsiskverbęs per placentos barjerą. ŽIV užsikrėtusių motinų vaikai taikomi laboratorijos ir diagnostikos tyrimai 36 mėnesiai nuo gimimo.

Paruošimas

Specialus pasirengimas nereikalingas. Kraujas užtrunka ne anksčiau kaip prieš 4 valandas po paskutinio valgio. Galima rasti bendrų tyrimų rengimo rekomendacijas. Patartina atlikti tyrimą dėl antigeno ir antikūnų aptikimo ŽIV ne anksčiau kaip prieš dvi savaites po galimo infekcijos, pakartojant jį per tris ir šešias savaites neigiamo rezultato atveju. Paraiškų dėl mokslinių tyrimų LLC "Invitro" yra atliekamas paso ar dokumento, pakeičiant jį (migracijos kortelę, laikiną registraciją gyvenamojoje vietoje, sertifikato sertifikatas, sertifikatas iš paso stalo su paso praradimu, registracijos kortele Apskaitos iš viešbučio). Pateiktoje dokumente turi būti pateikta informacija apie laikiną ar nuolatinę registraciją Rusijos Federacijos teritorijoje ir nuotraukoje. Nesant paso (dokumento pakeičiant), pacientas turi teisę išduoti anoniminį prašymą dėl biomedžiagų pristatymo. Su anoniminiu tyrimu, prašymas ir klientas, gautas iš kliento, biomedžiagų skaičius priskiriamas pacientui žinomas skaičius ir medicinos personalas, kuris pateikė užsakymą. ! Anonimiškai atliktų tyrimų rezultatai negali būti pateikti hospitalizavimui, profesionaliems patikrinimams ir nėra registruojami ginklu.

Nurodymas paskyrimui

• Daugiau nei dviejų sričių limfmazgių padidėjimas.
• Leukopenija su limfopenija.
• Naktinis prakaitavimas.
• Staigus neaiškios priežasties svorio netekimas.
• Viduriavimas daugiau nei tris savaites nuo neaiškios priežasties.
• Karščiavimas.
• Nėštumo planavimas.
• Preoperacinis preparatas, hospitalizavimas.
• Aptikta šiomis infekcijomis arba jų deriniais: tuberkuliozė, akivaizdžios toksoplazmozė, dažnai pasikartojantiems herpesvirus infekcijos, vidaus organų kandidozė, re-neuralgia herpes-zoster, kurį sukelia mikoplazma, pneumatiniai arba legioneliai pneumonija.
• SARCOMA Caposhi jaunystėje.
• Atsitiktiniai sekso kontaktai.

REZULTATŲ VERTINIMAS. \\ T

Tyrimo rezultatų aiškinimui pateikiama informacija apie gydytoją ir nėra diagnozė. Informacija iš šio skyriaus negali būti naudojama savarankiškai diagnozuoti ir savarankiškai gydyti. Tiksli diagnozę gydytojas naudoja tiek šio tyrimo rezultatus ir reikalingą informaciją iš kitų šaltinių: anamnezė, kitų tyrimų rezultatai ir kt.

Matavimo vienetai nepriklausomame Invitro laboratorijoje: kokybės testas. Formos atstovavimo forma: Jei nėra antikūnų iki ŽIV 1 ir 2 ir antigeno P24, atsakymas yra "neigiamas". Jei nustatant antikūnus į ŽIV ar antigeną atrankos fermentuose, serumo mėginys siunčiamas į ImunoBlot metodo patvirtinimą AIDS miesto centre, kuris patikrina teigiamus ir neaiškius rezultatus.

Teigiamas rezultatas:

1. ŽIV infekcija;
2. klaidingas teigiamas rezultatas, reikalaujantis pakartotinio ar papildomo tyrimo *);
3. tyrimas yra ne informatyvus vaikams iki 18 metų, gimusių iš ŽIV užsikrėtusių motinų.

* Antikūno tikrinimo bandymo sistemos specifiškumas ŽIV 1 ir 2 ir ŽIV AG / Combo, Abbott (ŽIV AB "Combo", "Abbott"), pasak reagentų gamintojo, yra apie 99,6% tiek visuotiniuose gyventojams, tiek Grupės pacientams, sergantiems potencialiais trukdžiais (HBV, HCV, RUBELLA, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. Coli, CHL.trach ir kt., Autoimuniniai patologijos (įskaitant reumatoidinį artritą, antinuclearinių antikūnų buvimą), \\ t Nėštumas, nėštumas, nėštumas, padidėjęs IgG, IgM, monokloninis gammapatija, hemodializė, kelis hemotransphus).

ŽIV infekcija reiškia nekontroliuojamų ligų kategoriją dėl būdų dėl konkretaus prevencijos ir nepakankamo gydymo efektyvumo. Todėl, siekiant kontroliuoti epidemiologinę padėtį ŽIV infekcijos šiuo metu, atrankos diagnostikos tyrimai yra daugiausia naudojami. Vieta tarp ŽIV infekcijos diagnozavimo metodų užima imunologinės analizės (ELISA), kuri leidžia nustatyti serologinius žymenis priežastinio atstovo šios ligos apklaustųjų asmenų.

Šioje ataskaitoje pateikiami 40 823 žmonių antikūnų nustatymo rezultatai, tarp kurių jie buvo moterų konsultacijų, klinikos, ligoninių, taip pat medicinos centrai, kurie specializuojasi apklausų ir gydymo pacientų, sergančių rizikos grupėmis (narkomanai, pacientai, sergantys virusiniu hepatitu, ir venerinių ligų). Studijos vyko 2005 m. Akušerijos ir ginekologijos imunologijos laboratorijoje. Anksčiau. OT, Ramna, kuri turi daugiau nei 15 metų, naudojant ELISA metodus dėl įvairių infekcinių ligų diagnostikos.

Pirminiam tyrimui serumo mėginiams, dygliuojanti anti-ŽIV-1 + 2 bandymo sistema (CJSC "Vector-Best", Novosibirskas), kuris yra aptikta apklaustų serumo ar kraujo plazmos mėginių, visų specifinių antikūnų iki ŽIV-1 ir ŽIV 2 (A, G ir M klasių imunoglobulinai). Šiame diagnostikos rinkinyje rekombinantiniai ŽIV baltymai naudojami tiek imobilizavimui tablečių šulinėliuose ir Krenos peroksidazės konjuguoti. Bandymo analizės rezultatų vertinimas buvo atliktas pagal bandymo sistemos nurodymų rekomendacijas: neigiamas (neturintis antikūnų iki ŽIV-1 ir ŽIV-2) buvo laikomi bandomais mėginiais, optiniu tankiu (OP) kuris Elisa neviršijo išvaizdos vertės.

Peržiūrėdami laboratorijoje 40222 (98,5%) nuo 40823 serumo mėginių laboratorijoje, buvo gautas neigiamas IFA rezultatas, ir 601 (1,5%) tyrimas buvo laikomas pirminiu teigiamu. Dėl pakartotinio analizės, atlikto kitą dieną, kiekvienas iš 601 serumų ąžuolų (dviejų šulinių tabletės) 440 (73,2%) mėginių buvo apibrėžti kaip teigiami ir 161 (26,8%) - kaip Neigiamas. Pagal Sveikatos apsaugos ministerijos ir socialinės plėtros ministerijos rekomendacijas 440 teigiamų patikrinimų serumuose buvo užšaldyti ir perduoti į pažangių nuorodų tyrimus konsultavimo ir diagnostikos spintelės etaloninės laboratorijos ligoninės Nr 30. S.P. Bot-kina. Šie tyrimai buvo atlikti naudojant ŽIV 1.2 AG ("Eclab", "Eclab", "Eclab", "Genscreen Plus" ("Eclab", "Genscreen Plus" ekologinio ženklo bandymo sistemos ŽIV. AG-AB "(" Biorad ", JAV), taip pat rinkiniai imunoblot. 440 serumų analizės rezultatai patvirtinimo bandymuose buvo galima daryti išvadą, kad 323 (73,4%) mėginys yra teigiami, o 102 (23,2%) yra neigiami. 15 studijuotų mėginių (3,4%) buvo gautas neribotos analizės rezultatas.

Pažymėtina, kad OP, gautų mūsų laboratorijoje, vertybės su jų pirminiu bandymu naudojant anti-ŽIV-1 + 2 degimo bandymų sistemą, už 314 (97,2%) nuo šių 323 teigiamų serumų svyravo nuo 0,900 iki 1,780, \\ t Ir 9 (2,8%) mėginių - 0,500-0,900. OP, gautos naudojant 102 neigiamų serumų, vertybės 52 mėginiams (51%) buvo nuo 0,195 iki 0,400; 40 (39,2%) mėginių - 0,401-0,800; 10 (9,8%) mėginiai - daugiau nei 0,800.

Taigi, kaip atlikto darbo rezultatas, buvo įrodyta, kad pagrindinis kraujo serumo bandymas dėl ŽIV serologinių žymenų buvimo naudojant anti-ŽIV-1 + 2 bandymo sistemą yra labai efektyvus. Teigiami atrankos rezultatai buvo patvirtinta per papildomus tyrimus etaloninėje laboratorijoje 73% atvejų ir klaidingų teigiamų - buvo užfiksuoti tik 0,25% 40 823 analizuojamų serumų.

Patentų savininkai RU 2283497:

Išradimas yra susijęs su biotechnologijų ir medicinos sritimi. Immunoafator bandymo sistema, skirta antikūnų spektro identifikavimui į pirmojo ir antrojo tipo tipų žmogaus imunodeficito virusą (ŽIV), pirmojo tipo "O" antigeno arba aptikimo į pirmojo tipo P24 žmogaus imunodeficito virusą, apima imunosorbentą Žmogaus imunodeficito viruso antigenai, atstovaujantys GP41 (ENV ŽIV-1 ir ŽIV-2 grupės O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV ŽIV-2), ŽIV antigenui antikūnai 1 P24 ir aptikti reagentus, o pirmiau minėtos ŽIV antigenai ir ŽIV antikūnai, sordinuoti skirtinguose fermentų imunologinių tablečių šuliniuose, o sorbcijai naudojamos 96 šulinių polistireno arba neintelinės plokštės. Išradimas didina jautrumą, supaprastinimą, rezultatų vertinimo subjektyvumo panaikinimą. 1 Z.P. F-Lies, 10 skirtukų., 1 il.

Išradimas yra susijęs su biotechnologijų ir medicinos sritimi. Naudojimas: diferencijuotas visų specifinių antikūnų klasių aptikimas žmogaus imunodeficito viruso baltymui 1 ir 2, ŽIV 1 O grupė ir antigen R24 ŽIV 1.

Esmė: Imunoformal bandymo sistemos gavimas visų klasių antikūnų spektro identifikavimui atskiroms baltyminams ir ŽIV 1 ir 2 ŽIV 1 O ir antigeno R24 ŽIV 1 serume (plazmoje) kraujo, imunoglobulinų ir žmogaus kraujo preparatų. Nustatykite antikūnų spektrą į ŽIV 1 ir 2, ŽIV 1 O grupė, antigeno P24 ŽIV 1 ir teigiamų ar abejotinų antikūnų atrankos rezultatų patvirtinimas ŽIV 1 ir 2, ŽIV 1 O ir antigeno P24 ŽIV 1.

Išradimo aprašymas

ŽIV infekcijos laboratorinė diagnostika yra pagrįsta trimis kryptimis: a) ŽIV ir jo komponentų nurodymas; b) antikūnų aptikimas ŽIV; c) imuninės sistemos pokyčių nustatymas. Tarp esamų laboratorinių diagnostikos metodų yra labiausiai paplitęs antikūnų identifikavimas į virusų antigenus.

Imunimeninė analizė (IFA) ir imunoblotavimas (IB) daugiausia naudojamas ŽIV infekcijos antikūnams identifikuoti. Elysa širdyje slypi virusinių antigenų ant tablečių, su kuria susiduria su paciento antikūnais, ir antigeno antigeno kompleksas aptinkamas naudojant pelės antikūną konjuguotu su peroksidaze imunoglobulinų g ir žmogaus. Šis metodas yra gana specifinis ir jautrus ir leidžia nustatyti virusespecifinius antikūnus 95% pacientų. Likę 5% atvejų patenka į ankstyvą infekcijos etapą, kai serumo antikūnai vis dar yra nedideli arba liga galiniai fazės, kai organizmas nebegali sintezuoti antikūnų dėl staigaus imuninės sistemos išeikvojimo. Taip pat įmanoma, kad ELISA rezultatai dažniausiai yra galimi, daugiausia pacientams, sergantiems autoimuninėmis ir onkologinėmis ligomis, taip pat infekcijai, kurią sukelia Ashspectina Barro virusas. Tuo pačiu metu, yra kryžminis reakcija antikūnų reumatoidinio faktoriaus, Epstein-Barr viruso ar antigeninių veiksnių, panašių į pagrindinio histociompatsibility 1 ir 2 klasės (HLA-4 ir DQW3) baltymų ir su Gebėjimas bendrauti su ŽIV antigenais. False teigiami rezultatai dažnai pastebimi nėščioms moterims ir pagyvenusiems žmonėms. Hemolizė, lipemija, bakterinė serumo tarša taip pat gali sukelti nepatikimų rezultatų.

Šiuo atžvilgiu siūlomos kelios metodai ir naudojami siekiant patikrinti antikūnų aptikimo rezultatus. Iš šių metodų "imuninė blotografija" reakcija dažniausiai naudojama "Vakarų dėmėse" modifikacijoje. Metodo esmė yra tokia: pirmame etape yra gaminamas ŽIV baltymų atskyrimas molekuliniam svoriui, naudojant elektroforezę poliakrilamido gel. Tada atliekamas elektroforetinis perdavimas iš poliakrilamido gelio iki nitroceliuliozės membranos paviršiaus. Tokiu būdu perduoti antigenai aptinkami ant membranos, naudojant netiesioginę analizę: membrana inkubuojama su studijuojamomis medžiagomis; Antikūnai yra susiję su ŽIV antigenais, perduodamiems į nitroceliuliozės membraną, tada membranos juostelės inkubuojamos su konjugu; Kai susidaro antigeno antikūno kompleksas, konjugatas prisijungia po konjugato ir inkubacijos su substratu, yra dažymo tų nitroceliuliozės srityse, kur atsirado antigeno komplekso formavimas - antikūnų konjugatas. Brėžinys pateikia teigiamų, silpnai lovos ir neigiamų imunoblotos rezultatų pavyzdžius.

ŽIV-1 ir ŽIV-2 asmenų serume, aptikti antikūnus į šiuos baltymus (P) ir glicoproteins (GP): A lentelė.

Lentelėje pateikiami imuninės blotavimo rezultatų vertinimo kriterijai, kuriuos rekomendavo AIDS prevencijos ir kontrolės centras.

Remiantis PSO kriterijais, serumai laikomi teigiamais, kokiais antikūnais į bet kurį du ŽIV-1 baltymų baltymus aptikti. Jei yra reakcija su tik vienu iš apvalkalo baltymų (GP160, GP120, GP41), kartu su reakcija su kitais baltymais arba be jo, rezultatas yra abejotinas. Pasak Federalinio mokslo ir metodikos centras Sveikatos Rusijos Federacijos už prevenciją ir kontrolę AIDS, galima interpretuoti serums kaip teigiamą ir antikūnų akivaizdoje tik vienam apvalkalui baltymų.

Antikūnų aptikimas antigenui P24 gali nurodyti serokonversijos pradžios laikotarpiu, nes antikūnai yra tiksliai pirmieji į šį baltymą. Teigiamos reakcijos su GAG ir POL baltymų be reakcijos su vviečiais baltymais gali atspindėti ankstyvą serokonversijos etapą, taip pat nurodyti ŽIV-2 infekcijos ar nespecifinio atsako buvimą.

ŽIV diagnozė kaip imunoblotavimo reakcijos ekspertų metodas turi daug reikšmingų trūkumų:

1. Nesugebėjimas patvirtinti antigeno P24 ŽIV 1 aptikimo, naudojant bandymus, kurie lemia antigeną ir ŽIV antigeną ir antikūnus, todėl jis neįmanoma (beprasmiška) naudoti kaip atrankos testai tuo pačiu metu aptikti antigeną ir antikūnus į ŽIV ( Įsakymas Sveikatos apsaugos ministerijos Rusijos Federacijos Nr 292 30.07. 2001: "Išnagrinėti donorai kraujo perpylimo stotyse, būtina naudoti bandymų sistemas, atskleidžiančias antigeną ir antikūnus į ŽIV vienu metu).

2. Aptikimas antikūnų tik IGG klasės. Neįmanoma visiškai patvirtinti teigiamų rezultatų, gautų naudojant 3 ir 4 kartų bandymus (aptikti IgG ir IgM antikūnų).

3. Bandymo vertinimo aiškinimo subjektyvumas, ypač tais atvejais, kai "abejotini" ir "neaiškūs" rezultatai ir pradiniuose serokonversijos etapuose (aptiktos juostelės dėl nitroceliuliozės membranų šiais atvejais yra miglotas, vos matomas plika akimi ir nesutarimai dažnai pastebimi vertinant įvairius asmenis).

4. Neatitinkamo kiekybinio analizės rezultatų neįmanoma įvertinti.

5. Mažesnis jautrumas, palyginti su IFA.

6. Saugojimo pasiskirstymas (saugant nitroceliuliozės membraną išnyks ir negali būti objektyvus patvirtinimas nustatyti ar aptikti ŽIV prieštaringais atvejais).

7. Reakcijos ir saugojimo sunkumai (nitroceliuliozės membranos juostelės yra labai trapios ir dažnai pažeistos).

8. Didelės IB rinkinių kainos.

Reagentas yra žinomas dėl vienalaikio antigenų ir antikūnų apibrėžimo į tą patį patogeną, įskaitant ŽIV (DE 4236189 F1, 04/28/1994). Tačiau bandymų sistema nėra atskleista, o tai leidžia diagnozuoti ŽIV infekciją įvairiais etapais.

Šio išradimo tikslas yra gauti bandymų sistemą, su kuria pagalba gali būti suteikta galimybė patvirtinti teigiamus ar abejotinus antikūnų atrankos tyrimų rezultatus į ŽIV 1 ir 2, ŽIV 1 ir ŽIV antigeną, naudojant bandymus Pasiekiamas sinchroninis antigenų ir antikūnų aptikimas.

Siūlomas techninis sprendimas yra pasiektas ImunoOlmen bandymo sistema, siekiant nustatyti antikūnų spektrą pirmojo ir antrojo tipo žmogaus imunodeficito virusui (ŽIV), pirmojo tipo O grupės ir aptikti antigeną P24 į pirmojo imunodeficito virusą Tipas P24, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad jis apima antigenų pagrindu imunosorbento žmogaus imunodeficito virusą, atstovaujančią gp41 (ENV ŽIV-1 ir ŽIV-2 grupės O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV ŽIV- 2), antikūnai ŽIV antigenui 1 p24 ir aptikti reagentus, o pirmiau minėtos ŽIV antigenai ir ŽIV antikūnai yra sorbuojami skirtinguose fermento imunosay "šuliniuose.

Be to, sorbcijai naudojamos 96 šulinių polistireno arba neintelinės plokštelės imununimal analizei.

Šis išradimas pasiektas techninis rezultatas yra galimybė patvirtinti teigiamus rezultatus nuo 1 ir 2 ŽIV 1 ŽIV 1 ŽIV 1 ir antigeno P24 ŽIV 1, didelio jautrumo, automatinio rezultatų aiškinimo galimybė, kuri pašalina vertinimo subjektyvumą, bandymo paprastumas mažesnis nei palyginti su esamais IB sąnaudų rinkiniais.

Šis techninis sprendimas skiriasi nuo žinomų:

1. Naudokite kaip kietojo fazinio nešiklio tabletę imunologinėms reakcijoms.

2. Sinchroninis naudojimas kaip antikūno sorbentas R4 ŽIV ir ŽIV antigenų rinkinys.

Išradimas iliustruoja tokiu pavyzdžiu.

Dabartinis sukurtos bandymo sistemos pradžia "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2 spektro + AG P24 ŽIV 1" yra:

Imunosorbentas - rekombinantiniai antigenai, panašūs į ŽIV-1 struktūrinius baltymus: GP41 (ENV ŽIV-1 ir ŽIV 1 grupė O), GP120 (ENV), P24 (POL), P31 (POL), ŽIV-2: GP36 (ENV ) ir pelės monokloniniai antikūnai į ŽIV 1 (P24), sorbed atskirai ant polistireno sulankstomos tabletės juostelės.

Norėdami paruošti imunosorbento naudojimą:

1. ŽIV-1 GP41 - baltymas, pagamintas pagal padermę E. coli Nr. YaiV 103.

2. ŽIV-1 GP120 - baltymas, pagamintas E. Coli Nr. YaiV 109.

3. ŽIV-1 P24 - baltymas, pagamintas E. Coli Nr. YaiV 105.

4. ŽIV-1 P31 - baltymas, pagamintas E. Coli Nr. YaiV 108.

5. ŽIV-2 P36 - baltymas, pagamintas E. Coli Nr. Yaiv 106.

Konjugatas 1, liofilizuotas arba skystas - monokloninės pelės antikūnai iki antigeno R24 ŽIV1 konjuguoto su biotinu.

1. Konjugatas 2, liofilizuotas arba skystas, yra rekombinantinių antigenų mišinys, panašus į ŽIV-1 konstrukcinius baltymus: GP41 (ENV ŽIV-1 ir ŽIV O grupės O), GP120 (ENV), P24 (Gag) mišinys, \\ t P31 (PO1); ŽIV-2: GP36 (ENV) konjuguotas su biotinu;

2. konjugatai 3, 4 - liofilizuotas arba skystas - streptvidinas, pažymėtas chren peroksidazės;

Preliminariais tyrimais buvo pasirinkta bandymo sistemos dizainas, jo komponentų paruošimo technologija buvo parengta, imunoferacijos reakcijos vedimas buvo optimizuotas.

Įdiegus ELISA į bandymų sistemą "DS - IFA - Anti-ŽIV 1,2-spektro + AG P24 ŽIV 1" tabletės su sorbuotų antikūnų šulinėliais į P24, 25 μl konjugatas-1 atneša į šulinius ir šuliniuose su sorbuotų antigenų - 25 μl konjugato-2. Toliau pateikiama reakcijos formavimo schema. Toliau į kiekvieną šulinį pridedama 25 μl. Tuo pačiu metu, šuliniuose su antigenais, spalva keičiasi nuo oranžinės spalvos rožinės spalvos, ir gerai su antikūnais - su žalia ant pilka. Mišinys inkubuojamas 45 minučių esant 37 ° C temperatūroje ant kratytuvo (arba 1 valanda 37 ° C temperatūroje termostatuose). Tada, be plovimo, 50 μl konjugato-3 yra atnešė į tabletės skyles, kad nustatytumėte antigeną P24, ir šuliniuose nustatyti 50 μl konjugato-4 antikūnų. Po inkubacijos 20 minučių 37 ° C temperatūroje ant kratytuvo (arba 30 minučių 37 ° C temperatūroje termostatuose), tabletė buvo plaunama ir parodė substrato mišinį. Bendras reakcijos laikas 1 h 25 min. (Arba 1 h 50 min.). Studijuojamame mėginyje esantis antigenas yra susijęs su monokloninių antikūnų iki P24, o specifiniai antikūnai sudaro kompleksą su rekombinantiniais antigenais ant tabletės. Gautas imuninis kompleksas anti-p24 su P24 yra aptikta anti-P24-biotino konjugatų, tada streptvidino peroksidazės, ir imuniniai kompleksai ŽIV su AT-ŽIV - Biotino konjugato, tada streptvidino peroksidazės.

Reakcijos formavimo schema.

Rezultatų apskaita atliekami spektrofotometriškai dviem bangos ilgiais: 450 / 620-680 nm su prietaiso nustatymu "oro". Tarkime rezultatų rezultatus vienu 450 nm bangos ilgiu.

Iš analizės rezultatus atsižvelgiama, jei vidutinės vertės optinio tankio (OP) šulinių su K- ne daugiau kaip 0,2, šulinių su K + - ne mažesnis nei 1,0. Eik. Apskaičiuoti pagal formulę:

Eik. gp41 \u003d plg. Ženklas Op k- (gp41) +0.15

Eik. Gp120 \u003d trečiadienis Ženklas Op k- (gp120) +0.15

Eik. P24 \u003d Trečiadienis Ženklas Op k- (p24) +0.15

Eik. P31 \u003d plg. Ženklas Op k- (p31) +0.15

Eik. gp36 \u003d plg. Ženklas Op k- (gp36) +0.15

Eik. Ag P24 \u003d Trečiadienis Ženklas OP K- (Ag P24) +0.04

kur 0,15 ir 0,04 yra koeficientai, nustatyti pagal statistinio apdorojimo metodą gamintojui. Bandymo sistemos kūrimo procese jis buvo naudojamas:

1. Mėginiai kraujo serume sveikų donorų (N \u003d 610).

2. Kraujo serumo pacientų, sergančių įvairiomis infekcinėmis ligomis, kurios nėra susijusios su ŽIV (Orz, pneumonija, krūtinės angina, herpetinės ir citomegalovirusinės infekcijos, sifilio, chlamidijos, virusinio hepatito A, B ir C (n \u003d 224)).

3. SPERA kraujo mėginiai pacientams, sergantiems skirtingais nesinaudojamais ligomis - sužalojimai, širdies ir kraujagyslių sistemos ligos, onkologija (n \u003d 35).

4. Nėščioms moterims serumo kraujo mėginiai (n \u003d 40).

5. Serumo kraujo seropozityvios ELISA ir patvirtino imunoblot (N \u003d 428).

6. Serumo mėginiai su teigiamu rezultatu, gautu imunofiniais bandymo sistemose, kad būtų galima vienu metu nustatyti ŽIV 1,2 antikūnų ir antigeno P24 ir neaiškaus imunobloto rezultatas (n \u003d 123).

7. Vidinė kolegija serume ir ne antikūnų iki ŽIV 1.2, išbandyta registruota Sveikatos apsaugos ministerijos Rusijos Federacijos imunoferacijos bandymų sistemų ir imunoBlot (N \u003d 21).

8. Standartinis "ŽIV 1 antigeno standartas", "Bio Rad", Prancūzija, katė. Nr. 72217, kuris yra antigenas, gautas iš virusinio lizato.

9. Vidaus įmonės standartas. Mėginys, kuriame yra P 24 antigeno prie 200 pg / ml, gauto iš virusinio lizato ir rafinuotas pagal "ŽIV 1 antigeno standartą", "Bio Rad", Prancūzija, katė, koncentracija. №72217.

10. Standartinis serumo skydas, kuriame yra antikūnų iki pirmojo tipo žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV 1) - OSO 42-28-212-93-02P, "Medicinos ir biologinė sąjunga", Novosibirskas.

11. Standartinis serumo skydas, kuriame yra antikūnų iki antrojo tipo žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV 2) - OSO-42-28-216-02P, "Medicino-biologinė sąjunga", Novosibirskas.

12. Standartinis serumo skydelis, kuriame nėra antikūnų į žmogaus imunodeficito virusą pirmojo tipo ir antrojo (ŽIV 1, 2) - OSO-42-28-214-94-02P, "Medicinos ir biologinė sąjunga", Novosibirskas.

Bandymo sistemos jautrumo įvertinimas antigeno P24 aptikimo metu buvo atliktas naudojant ŽIV I antigeno standartinį standartą, Biorin, vidinį įmonės standartą. Naudojant vidinį standartą, 4 iš eilės iš eilės skiedimo nuo 40 pg / ml iki 5 pg / ml buvo paruošti su normalia donorų plazma, kurioje nėra antikūnų iki ŽIV 1, 2, kaip scenos. Mažiausias aptikto antigeno kiekis buvo imtasi dėl jautrumo kriterijaus. Gauti duomenys pateikiami 1 lentelėje.

Norint įvertinti bandymo sistemos jautrumą nustatant konkrečius antikūnus, buvo naudojami standartiniai mėginiai, kurių sudėtyje yra antikūnų su imunodeficito virusu (ŽIV 1, 2) (OSO 42-28-212-93-02P S.012, OSO 42-28 -216- 02P (ŽIV 2) nuo.003).

Gauti duomenys pateikiami 3, 4 lentelėse.

Palyginimas buvo pagamintas iš bandymo sistemos diagnostikos efektyvumo "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2-spektro + AGR24 ŽIV 1" su bandymų sistemomis "JENSKRIN-ŽIV-AG / AT" (bio-rad), "DIA" -Hiv 1/2 "(DiaProf-Medus)," Viro-Vio-forma II AG / AM "(biomerioux)," Rekombinantinė ŽIV1.2 DSM "(MBS)," Amercard anti ŽIV-1,2 K "(Amercard ), "ŽIV-1, ŽIV-2-IFA Avicenna" (Avicenna). Dėl to vidinio skydelio serumo mėginiai buvo išbandyti visuose nurodytuose bandymuose. 5 lentelėje pateikti rezultatai rodo didelį diagnostikos efektyvumą "DS-IFA-anti-ŽIV 1.2 spektro + AG24 ŽIV 1".

Bandymo sistemos jautrumo tyrimai "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2-spektro + AG24 ŽIV 1" taip pat buvo atliekami su pacientų serumais, patvirtintų ImunoBlot kaip ŽIV teigiamai. Išbandė 428 tokių serumų pavyzdžiai. Buvo gautos kelios antikūnų aptikimo į skirtingus ŽIV baltymus ir antigeną P24. Rezultatai pateikiami 6 lentelėje.

6 lentelė. Antikūnų aptikimo skirtingiems ŽIV 1 ir antigeno P24 baltymams, bandant ŽIV 1 teigiamą seru (N \u003d 428)
% aptikimo	Baltymų profilis
	anti-G41.	anti-gr120.	anti-P24.	anti-P31.	p24.
51,1%	+	+	+	+	-
35,3%	+	-	+	+	-
4%	+	-	+	-	-
3,3%	+	-	-	+	-
1,4%	+	-	-	+	+
1,2%	+	+	+	+	+
1,2%	+	+	-	+	+
0,9%	+	-	+	+	+
0,7%	+	-	+	-	+
0,5%	+	-	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	+
0,2%	+	+	-	-	-
% antikūnų aptikimas atskiriems baltymams arba AG P24	100%	53,9%	93,2%	94,4%	6,1%

Bandant ŽIV 1 teigiamus mėginius, 3% serumų parodė teigiamą reakciją su GP36 (ENV ŽIV 2). OP / Opkrito. Šiuose mėginiuose neviršijo 2.0. Mūsų duomenys apie išorinį ŽIV 1 (GP41) ir ŽIV 2 (GP36) kryžminį reaktyvumą sutampa su literatūros duomenimis.

REZULTATŲ VERTINIMAS. \\ T

ŽIV teigiamų serumų ir mėginių bandymų iš standartinių ir vidinių plokščių bandymų analizė "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2-spektro + AG24 ŽIV 1" leido parengti šio bandymo rezultatus kriterijus. Rekomenduojami kriterijai pateikiami 7 lentelėje.

Remiantis šiais kriterijais, visi ŽIV teigiamų seos (N \u003d 428) mėginiai apibrėžiami kaip teigiami ir "DS-IFA-anti-ŽIV 1.2-spektro + AG24 ŽIV1". Iš 16 standartinio skydo mėginių, kurių sudėtyje yra antikūnų iki ŽIV 1, 14 yra apibrėžiami kaip teigiami ir 2 kaip neaiškūs. Visi 8 mėginiai iš standartinio skydelio, kuriame yra antikūnų iki ŽIV 2, yra apibrėžiami kaip teigiami. Iš 10 vidinio skydelio, kurių sudėtyje yra antikūnų iki ŽIV 1, 7 yra apibrėžiami kaip teigiami ir 3 kaip neaiški.

Bandymų sistemos jautrumo bandymai "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2-spektro + Agra24 ŽIV 1" taip pat buvo atlikti su pacientų serumais, turinčiais teigiamą rezultatą imunino ir nemigmingų bandymų sistemose, tuo pačiu metu aptinkant antikūnus ir antigeną P224, \\ t ir neaiški imunoblot. Išbandyta 123 tokie pavyzdžiai. Duomenys pateikiami 8 lentelėje.

Bandant serumai su neapibrėžtu ImunoBlot rezultatais (N \u003d 123) "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2 spektro + AG24 ŽIV 1" 72 mėginys (58,5%) buvo įrodytas teigiamas rezultatas. Iš jų 26 serumuose (21,1%) yra teigiami tik P24, 20 (16,3%) - tik antikūnuose, 16 (13%) - pagal P24 su antikūnais į vieną iš baltymų, 10 (8,1%) - pagal P24 su antikūnais iki dviejų ar daugiau baltymų. Taigi tikrinimas tik ant antikūnų (be aptikimo P24) nustatytų kaip teigiami 30 mėginių (24,4%). Antigeno P24 bandymo aptikimas leido nustatyti kaip teigiamą papildomą 42 mėginį (34,1%).

Norint įvertinti bandymo sistemos specifiškumą, buvo panaudota standartinė sea plokštė, kurioje nėra antikūnų iki ŽIV 1, 2 (n \u003d 20); Sveikų donorų serumo mėginiai (n \u003d 610), kraujo serumo pacientų, sergančių skirtingų infekcinių ligų (N \u003d 224), pavyzdžiai, nesusiję su ŽIV; Mėginiai kraujo serumo pacientams, sergantiems įvairiomis neužkrečiančiomis ligomis - sužalojimai, širdies ir kraujagyslių sistemos ligos, onkologija (n \u003d 35); Nėščioms moterims kraujo serumo mėginiai (n \u003d 40). Išbandyta 929 mėginiai. Vienas mėginys iš kraujo serumo sveikų donorų parodė klaidingą teigiamą rezultatą - antikūnai į GP41 ir P24 buvo atskleista. 7 Mėginiai kraujo serumo sveikų donorų ir 2 mėginio kraujo serumo pacientams, sergantiems infekcinėmis ligomis, kurios nėra susijusios su ŽIV, parodė klaidingą teigiamą rezultatą P24.

Norint įvertinti bandymo sistemos specifiškumą, buvo naudojamas standartinis neigiamų mėginių panaudojimas (OSO 42-28-214-94-02P, nuo.009). Specifiškumas buvo 100%.

Taigi tyrimai parodė, kad bandymų sistemos "DS-IFA-anti-ŽIV 1,2-spektro + AGR24 ŽIV 1" specifika yra 99% normalių donorų ir įvairių infekcinių pacientų kraujo serumo tyrime ir somatinės ligos.

Gauti duomenys rodo aukštą išsivysčiusios bandymo sistemos diagnostinį efektyvumą "DS-IFA-anti-ŽIV 1.2 spektro + AG24 ŽIV 1". Bandymo sistema gali būti naudojama norint nustatyti antikūnus atskirti ŽIV 1 ir 2 tipų ir antigeno R24 ŽIV1 baltymus, kad patvirtintų teigiamą atrankos bandymų sistemų, kurios nustato antikūnų arba bandymų sistemas, kurios vienu metu aptinka antikūnus ir antigeną P24 ŽIV1. Bandymo sistema gali būti naudojama kaip alternatyva imunoblot testas, kad patvirtintų teigiamus rezultatus, taip pat antikūnų dinamiką į ŽIV ir antigeną P24 skirtinguose infekcijos etapuose.

Tešlos privalumai

1. Patvirtinant tabletės formato imunoferento bandymą

2. Patvirtinimas bandymas, derinant antikūnų spektro ŽIV 1, 2 ir antigeno P24 ŽIV 1

3. visų IG klasių antikūnų aptikimas

4. Jautrumas aptikimo metu P24 bent 5 pg / ml

5. leidžia sumažinti neaiškių rezultatų skaičių, palyginti su ImmunoBlot

6. Analizės laikas - 1 val. 25 min. (ImmunoBlot - nuo 3 iki 20 valandų)

7. Visų komponentų ir mėginių įvedimo vizualinis įvertinimas.

1. Imuninimalios bandymų sistema, skirta identifikuoti antikūnus į pirmojo ir antrojo tipo žmogaus imunodeficito viruso (ŽIV), pirmojo tipo "Otigen P24" tipo ir aptikimo pirmojo tipo P24 žmogaus imunodeficito virusui, \\ t kad jis apima imunosorbentą, pagrįstą imunodeficito viruso antigenu Asmuo, atstovaujantis GP41 (ENV ŽIV-1 ir ŽIV-2 grupės O), GP120 (ENV), P24 (GAG), P31 (POL), GP36 (ENV ŽIV-2), Antikūnai į ŽIV antigeną 1 p24 ir aptikti reagentus, o pirmiau minėtos ŽIV antigenai ir ŽIV antikūnai yra sorbuojami skirtinguose fermentų imunosay "šuliniuose.

2. Imunofermento bandymo sistema pagal 1 punktą, b e s i s k i r i a n t i s tuo, kad sorbcija naudoja 96 ir polistireną, sulankstomas fermento imunosay fermentų ar neintėles.

ELISA (Imuninimal analizė, Elisa - anglų kalba) atvyko į praktinės medicinos gyvenimą kažkur praėjusio amžiaus 60-aisiais. Pradinė užduotis buvo histologiniai tyrimai mokslo tikslais, kurie buvo sumažinti iki paieškos ir identifikavimo antigeninės struktūros gyvojo organizmo ląstelių.

IFA metodas grindžiamas konkrečių (AT) ir susijusių antigenų sąveika su antigeno antikūnų kompleksu, kuris aptinkamas naudojant fermentą. Šis faktas atėjo per mokslininkus už mintį, kad metodas gali būti naudojamas diagnozuoti konkrečių imunoglobulinų, susijusių su imuniniame atsake į vieną ar kitą infekciją imunoglobulinų. Ir tai buvo klinikinės laboratorinės diagnostikos proveržis!

Šis metodas pradėjo aktyviai naudoti tik 80-ųjų pradžioje ir daugiausia yra specializuotose agentūrose. Pirmieji imunoferacijos analizatoriai buvo įrengti kraujo perpylimo, infekcinių ir venerologinių ligoninių centrai ir stotys, nes gimė Afrikos žemyne, kuris pasirodė horizonte, ir nedelsiant prisijungė prie "senų" didžiųjų priemonių infekcijų, pareikalavo nedelsiant diagnostines priemones ir ieškoti terapinių vaistų, turinčių įtakos jo.

ELISA metodo taikymo sritis

Immunimalios analizės galimybės yra tikrai plačios. Dabar sunku įsivaizduoti, kaip galite padaryti be tokių tyrimų tiesiogine prasme visuose medicinos sektoriuose. Atrodo, kad IFA gali padaryti onkologijoje? Galbūt tai paaiškėja. Ir daug. Gebėjimas analizuoti žymenis, būdingų tam tikrų rūšių piktybinių navikų neoplazmui, yra ankstyvas aptikimas naviko, kai jis dar nėra nustatomas kitu būdu dėl savo mažo dydžio.

Šiuolaikinė klinikinė laboratorinė diagnostika (CDL), išskyrus "Bescarkers", turi reikšmingų arsenalinių plokščių ELISA ir naudoja juos dėl įvairių patologinių sąlygų (infekcinių procesų, hormoninių sutrikimų) ir stebėti farmacijos medicinos preparatų diagnozę, siekiant nustatyti jų įtaką pacientui kūną ir, beje, ne tik asmuo. Šiuo metu imunoassimensional analizė yra plačiai naudojama veterinarijos tarnyboje, nes "mūsų mažesni broliai" taip pat yra daug ligų, kurios kartais labai kenčia.

Šiuo būdu, ELISA, dėl savo jautrumo ir specifiškumo, atsižvelgiant į kraujo mėginį, paimtą iš venų, gali nustatyti:

• Hormoninis statusas (skydliaukės hormonai ir antinksčių liaukos, lytiniai hormonai);
• Virusinės ir bakterinės infekcijos buvimas (ŽIV, B ir C, chlamidijos, sifilio, ir, taip pat daug kitų ligų, kurias sukelia patogeniniai mikroorganizmai);
• Mikroorganizmų, kurie buvo saugiai baigti ir pereiti prie imuninio atsako į šį patogeną, buvo saugiai baigti ir pereiti prie imuninio atsako į šį patogeną etapą. Tokie pėdsakai, tai yra, antikūnai, daugeliu atvejų lieka išplatinta kraujyje gyvenime, nei apsaugoti asmenį nuo pakartotinio infekcijos.

Kas yra IFA esmė?

Imununimal metodas leidžia jums nustatyti ne tik patį patogeną (aukštos kokybės analizę), bet ir jo kiekybinį turinį paciento serume.

Virus arba bakterinė dozė žymiai paveikia infekcinio proceso eigą ir jo rezultatus, todėl kiekybinė analizė priskiriama ne paskutiniam vaidmeniui diagnozuojant ir gydant įvairias formas ir etapus.

Tačiau, žinodami imuninesminių tyrimų tyrimus, kaip IFA metodas, mes net nemanome apie tai, kaip jis sugeba padengti tokį platų mikroorganizmų, gyvenančių mūsų planetą, daug, iš kurių turi tiesioginę grėsmę sveikatai ir gyvenimui žmogaus ir gyvūnų . Ir faktas yra tai, kad ELISA turi daug galimybių (nekonkuruojančių ir konkurencingų - tiesioginių ir netiesioginių), kurių kiekvienas sprendžia savo užduotį ir tokiu būdu leidžia tikslingai ieškoti.

Norint nustatyti vienos ar kitos klasės imunoglobulinus, naudojamas tradicinis 96 šulinių polistireno skydelis (tabletė), kurios šulinėlyje yra sorbed rekombinantiniai baltymai yra sutelkti į kietą fazę. Antikūnas arba antigeno serumas arba antigenas, kuris pateko į šaukiantį antikūną, suranda "pažįstamą" objektą ir su juo suformuotu kompleksu (AG-AT), kuris, patikėtas fermento konjugavimui, skaitant rezultatus pasireiškia Geros spalvos pasikeitimas.

Imunoassimensional analizė atliekama bandymų sistemose tam tikros specifiškumo, pagamintos specialiosiose laboratorijose ir įrengti visi būtini reaguojantys komponentai. Tyrimai gali būti atliekami naudojant skalbimo mašinas ("Voshor") ir skaitymo spektrofotometrus, kur daugiausia dalyvauja rankinis darbas. Dėl pilnų automatinių mašinų, dėvėdami laboratorinį būdą nuo monotoninio krūvio, plovimo ir kitų įprastinių atvejų, žinoma, dirbti greičiau ir patogiau, bet ne visos laboratorijos gali sau leisti tokią prabangą ir toliau dirbti senajame būde - pusiau automatinis.

IFA rezultatų aiškinimas priklauso nuo laboratorijos diagnostikos gydytojo kompetencijos, ir ji būtinai atsižvelgiama į beveik visas imunochemines reakcijas, kad pateiktų klaidingus teigiamus ar klaidingus neigiamus atsakymus.

Vaizdo įrašas: šiuolaikinė imunimal analizė

IFA lemia sifilio pavyzdį

Immuno fermentų analizė tinka identifikuoti visas formas, Be to, jis naudojamas patikslinant tyrimus. Analizei, vartojamas paciento veninis kraujas, vartojant tuščią skrandį. Straipsnyje naudojami tabletės su konkrečiu specifiškumu (a, m, g) arba visais antikūnais.

Atsižvelgiant į tai, kad sifilio gaminama konkrečioje sekoje, ELFA gali lengvai atsakyti į klausimą, kai infekcija įvyko ir kurioje etape yra procesas, ir gautų rezultatų dekodavimas gali būti pateikiamas tokia forma:

• IGM nurodykite infekcinio proceso trukmę (gali pasirodyti, kai sunkinančios lėtinės uždegiminės ligos);
• IGA nurodoma, kad infekcija įvyko daugiau nei prieš mėnesį;
• IGG siūlo, kad infekcija būtų visiškai sūpynės arba neseniai gydymo, kuris yra lengvai išsiaiškinamas renkant anamnezę.

Analizuojant sifilią, šuliniai su neigiamu atsakymu (ir neigiamas valdymas) išliks bespalvis, o teigiamas rezultatas (taip pat teigiamas kontrolė) duos ryškiai geltoną dažymą dėl chromogeno spalvos pakeitimų. Tačiau spalvos intensyvumas ne visada sutampa su kontrole, tai yra tai, kad jis gali būti šiek tiek švelnesnis arba šiek tiek gelsvas. Tai yra abejotini rezultatai, kurie, kaip taisyklė, yra iš naujo išnagrinėti su privalomu atsižvelgiant į kiekybinius rodiklius, gautus spektrofotometru, tačiau apskritai spalva yra tiesiogiai proporcinga priklausomybė nuo imuninių kompleksų skaičiaus ( asocijuotas AG ir AT).

Įspūdingiausias imunologinės medžiagos analizės - IFA dėl ŽIV

Analizė, galbūt daugiau nei kiti yra įdomūs įvairiuose žmonių, nes tai dar nėra patikimai teigti, kad daug socialinių problemų išnyko (prostitucija, narkomanija ir pan.). Deja, ŽIV paveikia ne tik šiuos žmogaus visuomenės sluoksnius, galima užkrėsti įvairiomis aplinkybėmis, kurios nėra susijusios su seksualizmu ar narkotikų vartojimu. Bet jei atsirado ŽIV tyrimų poreikis, neturėtų bijoti, kad kiekvienas sužinojo apie tokią laboratoriją. Dabar ŽIV užsikrėtusi žmonės yra apsaugoti įstatymu, o abejojimai gali susisiekti su anoniminiais biurais, kur galite išspręsti problemą be baimės viešumo ir pasmerkimo.

Imunimimalinis metodas, naudojamas diagnozuoti ŽIV infekcijos susijęs su pirminių standartinių tyrimų, kad, tačiau reikalauja specialių sąlygų, nes tema yra labai subtilus.

IFA dėl ŽIV prasminga po seksualinio kontakto, kraujo perpylimo, kitų medicinos manipuliacijų, susijusių su infekcija, ir inkubacinio laikotarpio pabaigoje ("seronegatyvinis langas"), tačiau reikėtų nepamiršti, kad šis laikotarpis nėra pastovus. Jis gali baigtis 14-30 dienų ir gali tęstis iki šešių mėnesių, todėl intervalas nuo 45 iki 90 dienų yra imamasi vidutinės vertės. ŽIV, kraujas perduodamas taip pat, kaip ir kitos infekcijos - nuo vienos tuščios skrandžio. Rezultatai bus parengti priklausomai nuo medžiagos kaupimosi laboratorijoje ir jo darbo krūvyje (nuo 2 iki 10 dienų), nors dažniausiai laboratorija pateikia tą pačią dieną ar kitą.

Ką galima tikėtis iš ŽIV rezultatų?

IFA dėl ŽIV infekcijos apibrėžia dviem viruso veisles: ŽIV-1 (labiau paplitusi Rusijoje ir kitose Europos šalyse Europoje ir Azijoje) ir ŽIV-2 (dažniau vyksta Vakarų Afrikos teritorijoje).

IFA ŽIV užduotis yra "G klasės" paieška, kuri aptinkama visose bandymų sistemose, tačiau vėliau ir A ir M klasių, aptiktų naujos kartos rekombinantiniais bandymais, leidžiant jums rasti antikūnus Anksčiau etapai (inkubacinis laikotarpis - "seronegatyvinis langas"). Iš IFA galite tikėtis tokių atsakymų galimybių:

1. Pirminis teigiamas rezultatas: kraujas yra tinkamai patikrinti tos pačios rūšies bandymo sistemą, bet jei įmanoma, kita serija ir kitas asmuo (laboratorinis asistentas);
2. Pakartotinis (+) reiškia naują kraujo suvartojimą pacientui, kuriame yra pirminė analizė;
3. Kitas teigiamas rezultatas taikomos referencinės analizės, kuri naudoja labai konkrečius bandymų rinkinius (2-3 vnt.);
4. Teigiamas rezultatas tiek (arba trijose) sistemose yra siunčiami imunoblotting (ta pati ELISA, bet individualiai atliekant specialius specifiškumo rinkinius bandymus).

ŽIV infekcijos išvada atliekama tik remiantis imunoblottingu. Atliekamas pokalbis su užkrėstu visiškai konfidencialumu. Medicinos paslapties atskleidimas Rusijoje, taip pat kitose šalyse yra baudžiamosios bausmės.

Analizuojant Chlamydia ir citomegalovirusą Imununimal metodu taip pat įgijo ypatingą populiarumą dėl to, kad jis leidžia nustatyti infekcijos laiką, ligos etapą ir terapinių priemonių veiksmingumą.

Pristatant, taip pat galite stebėti įvairių klasių antikūnų išvaizdą. Skirtinguose infekcinio agento sukeltos patologinės būklės etapuose:

• IGM gali būti atrasta dienoms po septynių po infekcijos;
• IGA sako, kad infekcija organizme gyvena daugiau nei mėnesį;
• IGG patvirtina chlamidijos diagnozę, padeda sekti gydymą ir nustatyti jo veiksmingumą. Pažymėtina, kad GR klasės antikūnai išlieka ir išplatinami organizme, neatsižvelgiant į ligos receptą, todėl tinkamai iššifruoti analizę, pamatines vertes (normas), kurios, beje, kiekvienam KDL jų pačių yra: atsižvelgiant į bandymo sistemos prekės ženklą ir į rinkinį įtraukti reagentų specifiką. Normos vertės tinka į tuščią šalia ELISA rezultato.

Kaip ir, tai šiek tiek skiriasi: M klasės antikūnai pasirodo maždaug po mėnesio ir pusė, tai yra teigiamas rezultatas (IgM +) tampa pirminėje infekcijos fazėje arba reaguojant paslėptą infekciją ir išlieka nuo 4 mėnesių iki šešių mėnesių.

G klasės buvimas yra būdingas pirminės ūminės infekcijos ar atkūrimo pradžiai. Analizėje teigiama, kad virusas vyksta, tačiau informacija yra infekcinė procesas - nesuteikia. Tuo tarpu IgG titro apibrėžimas taip pat sukelia sunkumų, nes tai visiškai priklauso nuo konkretaus asmens imuninės būklės, tačiau nustatoma G. imunoglobulinų identifikavimas, atsižvelgiant į antikūnų elgesį, kai diagnozuojant CMWI , Būtina įvertinti G klasės antikūnų gebėjimus bendrauti su CMV, tada į "neutralizuoti" jį (neuites). Pradiniame etape IGG liga yra labai prastai susijusi su virusų antigenais (maža aviacija) ir tik tada pradeda rodyti veiklą, tai tampa įmanoma kalbėti apie antikūnų akivaizdumo didinimą.

Galite kalbėti apie imunoformalios analizės privalumus ilgą laiką ir daug, nes šis metodas sugebėjo išspręsti daug diagnostinių užduočių naudojant tik venų kraują. Jau nereikia ilgų lūkesčių, įspūdžių ir problemų su tyrimo medžiagos tvora. Be to, IFA bandymo sistema ir toliau bus patobulinta, o diena nėra toli nuo kampo, kai bandymas bus 100% rezultato tikslumas.

Vaizdo įrašas: MGMU mokymosi plėvelė. SECENOV apie IFA pagrindus