Anti-ŽIV 1 2 kas. ELISA diagnostika: kokia esmė, antikūnų nustatymas, kaip jis atliekamas ir kokioms ligoms gydyti? Polimerazės grandininė reakcija

ŽIV infekcija priskiriama nekontroliuojamai ligai dėl specifinių jos prevencijos metodų trūkumo ir nepakankamo gydymo efektyvumo. Todėl epidemiologinei ŽIV infekcijos situacijai kontroliuoti šiuo metu daugiausiai naudojami atrankinės diagnostikos tyrimai. Tarp ŽIV infekcijos diagnozavimo metodų pirmaujančią vietą užima su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas (ELISA), leidžiantis tirtiems asmenims nustatyti serologinius šios ligos sukėlėjo žymenis.

Šioje ataskaitoje pateikiami antikūnų prieš ŽIV nustatymo 40 823 žmonių kraujo serume rezultatai, tarp kurių buvo nėščiųjų klinikų, poliklinikų, miesto ligoninių, taip pat medicinos centrų, kurių specializacija yra rizikos grupės pacientų (narkomanų) ištyrimas ir gydymas. , pacientams, sergantiems virusiniais hepatitais B, C ir venerinėmis ligomis). Tyrimai buvo atlikti 2005 m. V. I. Akušerijos ir ginekologijos mokslo instituto imunologijos laboratorijoje. PRIEŠ. Ott Rusijos medicinos mokslų akademija, turintis daugiau nei 15 metų patirtį naudojant ELISA metodus įvairių infekcinių ligų diagnostikai.

Pirminiam kraujo serumo mėginių tyrimui naudojome CombiBest anti-HIV-1 + 2 testavimo sistemą (ZAO Vector-Best, Novosibirskas), kuri aptinka bendrus specifinius antikūnus prieš ŽIV-1 ir ŽIV- tirtuose žmogaus serumo mėginiuose. arba plazma.2 (A, G ir M klasių imunoglobulinai). Šiame diagnostikos rinkinyje rekombinantiniai ŽIV baltymai naudojami tiek imobilizacijai lėkštelių duobutėse, tiek konjugato su krienų peroksidaze pavidalu. Serumo analizės rezultatų vertinimas atliktas pagal tyrimo sistemos instrukcijos rekomendacijas: tiriamieji mėginiai buvo laikomi neigiamais (neturi antikūnų prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2), optinis tankis (OD) iš kurių ELISA neviršijo ODcrit reikšmės.

Atliekant atranką laboratorijoje, 40222 (98,5 %) iš 40 823 serumo mėginių ELISA rezultatas buvo neigiamas, o 601 (1,5 %) tirto mėginio buvo laikomas pirminiu teigiamu. Kitą dieną atlikus pakartotinę kiekvieno iš 601 serumo analizę dviem egzemplioriais (dviejų plokštelės šulinių), 440 (73,2 %) mėginių buvo nustatyti kaip teigiami, o 161 (26,8 %) – neigiami. Vadovaujantis Sveikatos ir socialinės plėtros ministerijos rekomendacijomis, 440 teigiamų atrankos serumų buvo užšaldyti ir perduoti papildomiems patvirtinamiesiems tyrimams į 30-osios ligoninės referencinės laboratorijos konsultacinį ir diagnostinį kabinetą. S.P. Bot-kin. Šie tyrimai buvo atlikti naudojant su fermentais susietas imunosorbento tyrimo sistemas EKOlab-Vironostika HIV 1,2 Ag / Ab (EKOlab, Elektrogorsk), Genscreen Plus. ŽIV Ag-Ab “(BioRad, JAV), taip pat rinkiniai imunoblotui. 440 serumų analizės rezultatai patvirtinamųjų tyrimų metu leido daryti išvadą, kad 323 (73,4 proc.) mėginiai yra teigiami, o 102 (23,2 proc.) – neigiami. 15 tirtų mėginių (3,4%) gautas neapibrėžtas analizės rezultatas.

Reikėtų pažymėti, kad OD vertės, gautos mūsų laboratorijoje pirminio tyrimo metu naudojant CombiBest anti-ŽIV-1 + 2 testavimo sistemą 314 (97,2 %) iš šių 323 teigiamų serumų svyravo nuo 0,900 iki 1,780 ir 9 (2,8%) mėginiai - 0,500–0,900. OD vertės, gautos patikrinus 102 neigiamus serumus iš 52 mėginių (51%), svyravo nuo 0,195 iki 0,400; 40 (39,2%) mėginių - 0,401-0,800; 10 (9,8 proc.) mėginių – daugiau nei 0,800.

Taigi atlikto darbo rezultatais įrodyta, kad pirminis kraujo serumo tyrimas dėl ŽIV infekcijos serologinių žymenų, naudojant CombiBest anti-HIV-1 + 2 testų sistemą, yra labai efektyvus. Atliekant papildomus tyrimus etaloninėje laboratorijoje, teigiami atrankos rezultatai buvo patvirtinti 73 % atvejų, o klaidingai teigiami rezultatai užfiksuoti tik 0,25 % iš 40 823 tirtų serumų.

apibūdinimas

Paruošimas

Indikacijos

Rezultatų interpretacija

apibūdinimas

Nustatymo metodas Su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas (ELISA).

Studijų medžiaga Kraujo serumas

Galimas vizitas į namus

Kombinuotas antikūnų prieš 1 ir 2 tipų ŽIV ir ŽIV p24 antigeno nustatymas, kokybinis tyrimas.

Dėmesio. Esant teigiamoms ir abejotinoms reakcijoms, rezultato išdavimo terminas gali būti pratęstas iki 10 darbo dienų. ŽIV (žmogaus imunodeficito virusas), sukeliantis AIDS (įgytą imunodeficito sindromą), priklauso retrovirusų šeimai. Užsikrečiama nuo žmogaus žmogui naudojant užterštas adatas ir švirkštus intraveniniam vaistų skyrimui ar gydomosioms procedūroms, lytinių santykių metu, tiek heteroseksualių, tiek homoseksualių. Virusas gali užsikrėsti perpilant užkrėstą kraują ir jo produktus, dovanojant organus ar spermą, o sveikatos priežiūros darbuotojams – susižalojus užkrėstomis adatomis ar instrumentais. Užsikrėsti ŽIV galima per jį perduodant iš užsikrėtusios motinos vaikui (vertikalus kelias), nors šiuolaikiniai profilaktikos metodai taikant antiretrovirusinį gydymą, jei laikomasi visų rekomendacijų, gali sumažinti šią riziką iki minimumo.

Viruso sąveikos su ląste procesas susideda iš kelių etapų: viruso prisijungimas prie ląstelės, išlaisvinimas iš apvalkalo, įsiskverbimas į citoplazmą, DNR sintezė iš viruso RNR ir viruso DNR įterpimas į genomą. šeimininko ląstelės. Po to prasideda latentinė infekcijos stadija. Šioje būsenoje provirusinė DNR gali egzistuoti tam tikrą laiką, nerodydama aktyvumo ir nepaveikdama ląstelės-šeimininkės gyvybinės veiklos. Kol nėra viruso baltymų ekspresijos, nėra imuninio atsako į virusą. Antikūnai prieš ŽIV, apibūdinantys organizmo imuninį atsaką, atsiranda po to, kai viruso DNR suaktyvėja ir virusas pradeda aktyviai daugintis. Latentinio laikotarpio trukmė priklauso nuo daugelio veiksnių, įskaitant individualias genetines organizmo savybes.

Antikūnai prieš ŽIV gali atsirasti jau antrą savaitę po užsikrėtimo; jų kiekis padidėja per 2-4 savaites ir išlieka daugelį metų. 90-95% užsikrėtusių žmonių jie atsiranda per pirmuosius tris mėnesius po užsikrėtimo, 5-9% - nuo trijų iki šešių mėnesių, 0,5-1% - vėliau.

Pirmosiomis infekcijos savaitėmis, net prieš atsirandant antikūnams prieš virusą (t. y. prieš serokonversiją), serumo ar plazmos mėginiuose galima aptikti ŽIV antigenų, įskaitant jo p24 kapsido baltymą. Vėliau, po serokonversijos, dažniausiai tampa nebeaptinkama.

Kombinuotos 4 kartos testų sistemos, apimančios ŽIV Ag / Ab Combo testą (Architect, Abbott), aptinka ir 1 ir 2 tipų ŽIV antikūnus, ir ŽIV p24 antigeną, o tai leidžia anksti nustatyti infekciją. Laboratorijoje INVITRO ŽIV infekcijai nustatyti naudojamo atrankinio testo ypatybės – didelis tyrimo specifiškumas (> 99,5 proc.); 100% tyrimo jautrumas antikūnams, būdingiems serokonversijos periodui, o tyrimo jautrumas p24 antigenui yra apie 18 pg/ml.

Laboratorinių ŽIV tyrimų atlikimo procedūra yra griežtai reglamentuota Rusijos Federacijos sveikatos apsaugos ministerijos įsakymais ir apima ŽIV antikūnų buvimo atrankos (atrankos) tyrimo etapą, naudojant su fermentais susieto imunosorbento tyrimo (ELISA) metodus. patvirtintas naudoti, o patikrinimo (patvirtinančio) išsamesnio tyrimo stadija miesto AIDS centro laboratorijoje. Pažymėtina, kad net geriausios patikros ELISA sistemos negarantuoja 100% specifiškumo, tai yra, yra tam tikra tikimybė gauti nespecifinius, klaidingai teigiamus rezultatus, susijusius su paciento kraujo serumo savybėmis. Todėl teigiamas ELISA atrankos testo rezultatas gali būti nepatvirtintas atliekant patvirtinamuosius tyrimus, po kurių pacientui bus suteiktas neigiamas arba neapibrėžtas rezultatas. Jei patvirtinamojo tyrimo rezultatas neaiškus, testą reikia pakartoti kas 2–3 savaites.

Laboratorinė ŽIV infekcijos diagnostika vaikams, gimusiems ŽIV užsikrėtusių motinų, turi savo ypatybių. Motinos antikūnai prieš ŽIV (IgG klasė) gali cirkuliuoti jų kraujyje iki 18 mėnesių nuo gimimo. Antikūnų prieš ŽIV nebuvimas naujagimiams nereiškia, kad virusas neprasiskverbė pro placentos barjerą. ŽIV infekuotų motinų vaikai laboratoriniai diagnostiniai tyrimai atliekami per 36 mėnesius po gimimo.

Paruošimas

Specialaus mokymo nereikia. Paimti kraują rekomenduojama ne anksčiau kaip praėjus 4 valandoms po paskutinio valgio. Galima rasti bendrąsias pasirengimo tyrimams gaires. Antigeno ir antikūnų prieš ŽIV aptikimo tyrimą patartina atlikti ne anksčiau kaip praėjus dviem savaitėms po galimo užsikrėtimo, o neigiamam rezultatui pakartoti po trijų ir šešių savaičių. Prašymų tyrimams registracija UAB „INVITRO“ vykdoma pagal pasą arba jį pakeičiantį dokumentą (migracijos kortelę, laikina registracija gyvenamojoje vietoje, kario pažymėjimą, pažymą iš pasų biuro pametus pasą, registracijos kortelę nuo viešbutis). Pateiktame dokumente turi būti informacija apie laikiną ar nuolatinę registraciją Rusijos Federacijos teritorijoje ir nuotrauka. Nesant paso (jį pakeičiančio dokumento), pacientas turi teisę pateikti anoniminį prašymą dėl biomedžiagos pristatymo. Atliekant anoniminį tyrimą, prašymui ir iš kliento gautam biomedžiagos mėginiui priskiriamas numeris, kurį žino tik pacientas ir užsakymą padaręs medicinos personalas. ! Anonimiškai atliktų studijų rezultatai negali būti pateikiami hospitalizavimui, profesiniams egzaminams ir nėra registruojami ORUIB.

Indikacijos paskyrimui

• Patinę limfmazgiai daugiau nei dviejose srityse.
• Leukopenija su limfopenija.
• Naktinis prakaitavimas.
• Dramatiškas svorio kritimas dėl neaiškios priežasties.
• Viduriavimas ilgiau nei tris savaites dėl neaiškios priežasties.
• Neaiškios priežasties karščiavimas.
• Nėštumo planavimas.
• Pasiruošimas prieš operaciją, hospitalizavimas.
• Šių infekcijų ar jų derinių nustatymas: tuberkuliozė, manifestinė toksoplazmozė, dažnai pasikartojanti herpesvirusinė infekcija, vidaus organų kandidozė, pasikartojanti juostinė neuralgija, sukelta mikoplazmų, pneumocistizės ar legionelių pneumonijos.
• Kapoši sarkoma jauname amžiuje.
• Atsitiktinis seksas.

Rezultatų interpretacija

Tyrimo rezultatų aiškinimas suteikia informaciją gydančiam gydytojui ir nėra diagnozė. Šiame skyriuje pateikta informacija negali būti naudojama savidiagnozei ir savigydai. Tikslią diagnozę nustato gydytojas, naudodamas tiek šio tyrimo rezultatus, tiek reikiamą informaciją iš kitų šaltinių: anamnezę, kitų tyrimų rezultatus ir kt.

Matavimo vienetai nepriklausomoje laboratorijoje INVITRO: aukštos kokybės testas. Rezultatų pateikimo forma: jei nėra antikūnų prieš ŽIV 1 ir 2 bei antigeną p24, atsakymas yra „neigiamas“. Atrankos fermento imunologinio tyrimo metu nustačius antikūnus prieš ŽIV ar antigeną, serumo mėginys siunčiamas tyrimams patvirtinamuoju imunobloto metodu į miesto AIDS centrą, kuris patikrina teigiamus ir neaiškius rezultatus.

Teigiamas rezultatas:

1. ŽIV infekcija;
2. klaidingai teigiamas rezultatas, reikalaujantis pakartotinių ar papildomų tyrimų *);
3. tyrimas nėra informatyvus vaikams iki 18 mėnesių, gimusiems ŽIV infekuotoms motinoms.

* ŽIV 1 ir 2 antikūnų ir ŽIV 1 ir 2 antigenų (ŽIV Ag / Ab Combo, Abbott) atrankos testų sistemos specifiškumas, remiantis reagento gamintojo pateiktais skaičiavimais, yra apie 99,6 % tiek bendroje populiacijoje, tiek ir Lietuvoje. grupė pacientų, kuriems yra potencialių trukdžių (infekcijos HBV, HCV, raudonukės, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl.trach. ir kt.), autoimuninės patologijos (įskaitant reumatoidinį artritą, antinuklearinių antikūnų buvimą). ), nėštumas, padidėjęs IgG, IgM kiekis, monokloninės gamopatijos, hemodializė, daugybiniai kraujo perpylimai).

Bendra informacija apie tyrimą

ŽIV (Human Immunodeficiency Virus) – retrovirusų šeimos virusas, užkrečiantis žmogaus imuninės sistemos ląsteles (CD4, T-helpers). Sukelia AIDS.

ŽIV-1 yra labiausiai paplitęs viruso tipas, dažniausiai aptinkamas Rusijoje, JAV, Europoje, Japonijoje ir Australijoje (dažniausiai B potipis).

ŽIV-2 yra retas tipas, paplitęs Vakarų Afrikoje.

Žmogaus imunodeficito virusui diagnozuoti naudojama ketvirtos kartos kombinuota tyrimų sistema, galinti nustatyti ŽIV infekciją jau po 2 savaičių nuo viruso patekimo į kraują, o pirmosios kartos testų sistemos tai atlieka tik po 6-12 savaičių nuo infekcijos momentas.

Šio kombinuoto ŽIV tyrimo pranašumas yra tai, kad naudojant antikūnus prieš ŽIV-1 p24 kaip reagentus galima aptikti specifinį antigeną p24 (viruso kapsidės baltymą), kurį šiuo tyrimu galima aptikti per 1–4 savaites nuo užsikrėtimo momentu, ty dar prieš serokonversiją, o tai žymiai sutrumpina lango laikotarpį.

Be to, atliekant tokį ŽIV testą kraujyje aptinkami antikūnai prieš ŽIV-1 ir ŽIV-2 (naudojant antigeno-antikūno reakciją), kurių pasigamina pakankamas kiekis, kad testų sistema būtų nustatyta po 2-8 savaičių nuo momento. infekcijos.

Po serokonversijos antikūnai pradeda jungtis prie p24 antigeno, todėl ŽIV antikūnų testas teigiamas ir p24 testas neigiamas. Tačiau po kurio laiko kraujyje vienu metu bus nustatyti ir antikūnai, ir antigenas. Galutinėje stadijoje AIDS testas dėl ŽIV antikūnų gali duoti neigiamą rezultatą, nes sutrinka antikūnų gamybos mechanizmas.

ŽIV infekcijos stadijos

1. Inkubacinis periodas arba „seronegatyvaus lango periodas“ – tai laikas nuo užsikrėtimo momento iki apsauginių antikūnų prieš virusą susidarymo kraujyje, kai ŽIV antikūnų testai yra neigiami, tačiau žmogus jau gali perduoti virusą kitiems žmonėms. . Šio laikotarpio trukmė yra nuo 2 savaičių iki 6 mėnesių.
2. Ūminės ŽIV infekcijos laikotarpis prasideda vidutiniškai 2-4 savaites po užsikrėtimo ir trunka maždaug 2-3 savaites. Šiame etape kai kuriems žmonėms dėl aktyvios viruso replikacijos gali atsirasti nespecifinių į gripą panašių simptomų.
3. Latentinė stadija yra besimptomė, tačiau jos metu pamažu mažėja imunitetas ir didėja viruso kiekis kraujyje.
4. AIDS (įgytas imunodeficito sindromas) yra paskutinė ŽIV infekcijos vystymosi stadija, kuriai būdingas stiprus imuninės sistemos slopinimas, taip pat gretutinės ligos, encefalopatija ar vėžys.

Nepaisant to, kad ŽIV infekcija yra nepagydoma, šiandien yra labai aktyvus antiretrovirusinis gydymas (ART), kuris gali žymiai pailginti ŽIV užsikrėtusio žmogaus gyvenimą ir pagerinti jo kokybę.

Šis testas turi ypač didelę diagnostinę vertę, jei ŽIV infekcija įvyko prieš pat tyrimą (2-4 savaites).

Kam naudojami tyrimai?

Analizė naudojama ankstyvai ŽIV diagnostikai, kuri padeda išvengti tolesnio viruso perdavimo kitiems žmonėms, taip pat laiku pradėti antiretrovirusinį gydymą ir gydyti ligas, kurios prisideda prie ŽIV infekcijos progresavimo.

Kada numatytas tyrimas?

• Su nuolatiniais neaiškios etiologijos simptomais (2-3 savaites): nedidelis karščiavimas, viduriavimas, naktinis prakaitavimas, staigus svorio kritimas, limfmazgių padidėjimas.
• Su pasikartojančia herpeso infekcija, virusiniu hepatitu, pneumonija, tuberkulioze, toksoplazmoze.
• Jei pacientas serga lytiniu keliu plintančiomis ligomis (sifiliu, chlamidijomis, gonorėja, lytinių organų pūsleline, bakterine vaginoze).
• Jei pacientas turėjo neapsaugotą vaginalinį, analinį ar oralinį seksą su keliais seksualiniais partneriais, nauju partneriu arba partneriu, kurio ŽIV statusas pacientas nėra tikras.
• Kai pacientui buvo atlikta donoro kraujo perpylimo procedūra (nors tokiu būdu užsikrėtimo atvejai praktiškai neįtraukiami, nes kraujas yra kruopščiai ištirtas, ar nėra viruso dalelių, ir specialiai termiškai apdorojamas).
• Jeigu pacientas vaistus suleido nesteriliais instrumentais.
• Nėštumo metu / planuojant nėštumą (azidotimidino vartojimas nėštumo metu, cezario pjūvis, siekiant išvengti viruso perdavimo vaikui gimdymo kanalu ir atsisakymas maitinti krūtimi, sumažina ŽIV perdavimo iš motinos vaikui riziką nuo 30% iki 1 %).
• Netyčia sušvirkšta švirkštu ar kitu daiktu (pavyzdžiui, medicinos instrumentu), kuriame yra užkrėsto kraujo (tokiais atvejais užsikrėtimo tikimybė itin maža).

ELISA (enzyme linked immunosorbent assay, ELISA – angl.) į praktinės medicinos gyvenimą įžengė kažkur praėjusio amžiaus 60-aisiais. Pradinė jo užduotis buvo histologiniai tyrimai moksliniais tikslais, kurie apsiribojo gyvo organizmo ląstelių antigeninės struktūros paieška ir identifikavimu.

ELISA metodas pagrįstas specifinių (AT) ir susijusių antigenų (AG) sąveika su „antigeno – antikūno“ komplekso susidarymu, kuris nustatomas naudojant fermentą. Šis faktas paskatino mokslininkus manyti, kad šis metodas gali būti naudojamas diagnostikos tikslais, siekiant nustatyti specifinius įvairių klasių imunoglobulinus, susijusius su imuniniu atsaku į tam tikrą infekciją. Ir tai buvo proveržis klinikinėje laboratorinėje diagnostikoje!

Metodas buvo pradėtas aktyviai naudoti tik 80-ųjų pradžioje, o vėliau, daugiausia specializuotose įstaigose. Pirmieji fermentų imunologiniai analizatoriai buvo aprūpinti kraujo perpylimo centrais ir stotimis, infekcinėmis ir venerologinėmis ligoninėmis, nes Afrikos žemyne ​​gimęs žmogus, horizonte pasirodęs didžiulis AIDS, iškart prisijungęs prie „senųjų“ infekcijų, pareikalavo neatidėliotinų diagnostinių priemonių ir jį veikiančių vaistų paieška.

ELISA metodo taikymo sritis

Fermentinio imunologinio tyrimo galimybės yra tikrai plačios. Dabar sunku įsivaizduoti, kaip apsieiti be tokių studijų, kurios naudojamos pažodžiui visose medicinos srityse. Atrodo, ką ELISA gali padaryti onkologijoje? Pasirodo, gali. Ir daug. Analizės gebėjimas rasti žymenis, būdingus kai kurioms piktybinių navikų rūšims, yra pagrindas anksti nustatyti naviką, kai dėl mažo dydžio jis dar nėra nustatytas kitu metodu.

Šiuolaikinė klinikinė laboratorinė diagnostika (CDL), be navikų žymenų, turi nemažą ELISA panelių arsenalą ir jomis diagnozuoja įvairias patologines būkles (infekcinius procesus, hormoninius sutrikimus) bei stebi farmacinius vaistinius preparatus, siekiant nustatyti jų poveikį paciento sveikatai. kūnas ir, beje, ne tik žmogus. Šiuo metu veterinarijos tarnyboje plačiai taikomas fermentinis imunologinis tyrimas, nes „mūsų mažesnieji broliai“ taip pat yra imlūs daugeliui ligų, nuo kurių kartais labai kenčia.

Taigi, ELISA dėl savo jautrumo ir specifiškumo, remiantis kraujo mėginiu, paimtu iš venos, gali nustatyti:

• Hormoninė būklė (skydliaukės ir antinksčių hormonai, lytiniai hormonai);
• Virusinės ir bakterinės infekcijos buvimas (ŽIV, B ir C, chlamidijos, sifilis ir daugelis kitų ligų, kurias sukelia patogeniniai mikroorganizmai);
• Mikroorganizmų gyvybinės veiklos pėdsakai, kurie inicijavo infekcinį procesą, kuris baigėsi laimingai ir perėjo į imuninio atsako į šį sukėlėją formavimosi stadiją. Tokie pėdsakai, tai yra antikūnai, daugeliu atvejų lieka cirkuliuoti kraujyje visą gyvenimą, o tai apsaugo žmogų nuo pakartotinio užsikrėtimo.

Kokia ELISA esmė?

Fermentinis imunologinis tyrimas leidžia nustatyti ne tik paties patogeno buvimą (kokybinė analizė), bet ir kiekybinį jo kiekį paciento kraujo serume.

Viruso ar bakterijų dozė reikšmingai įtakoja infekcinio proceso eigą ir jo baigtį, todėl kiekybinė analizė vaidina svarbų vaidmenį diagnozuojant ir gydant įvairių formų ir stadijų ligas.

Tačiau žinant fermentinį imunologinį tyrimą kaip ELISA metodą, net nesusimąstome, kaip juo pavyksta aprėpti tokį platų mūsų planetoje gyvenančių mikroorganizmų spektrą, kurių daugelis kelia tiesioginę grėsmę žmonių ir gyvūnų sveikatai bei gyvybei. Faktas yra tas, kad ELISA turi daugybę galimybių (nekonkurencinių ir konkurencinių – tiesioginių ir netiesioginių), kurių kiekviena išsprendžia savo problemą ir leidžia atlikti tikslinę paiešką.

Vienos ar kitos klasės imunoglobulinams identifikuoti naudojama tradicinė 96 šulinėlių polistireno plokštė (plokštė), kurios šuliniuose kietoje fazėje koncentruojami sorbuoti rekombinantiniai baltymai. Antikūnai ar antigenai, įstrigę šulinėlyje su kraujo serumu, suranda „pažįstamą“ objektą ir sudaro su juo kompleksą (AG - AT), kuris, fiksuotas fermento konjugatu, pasireikš duobutės spalvos pasikeitimu, kai skaitydami rezultatus.

Fermentinis imunologinis tyrimas atliekamas naudojant tam tikro specifiškumo testavimo sistemas, pagamintas specialiose laboratorijose ir aprūpintas visais reikalingais reaktyviais komponentais. Tyrimai gali būti atliekami naudojant poveržles ("poveržles") ir nuskaitymo spektrofotometrus, kurie dažniausiai apima rankų darbą. Žinoma, greičiau ir patogiau dirbti su pilnai automatinėmis mašinomis, kurios išlaisvina laborantą nuo monotoniško užkasimo, plovimo ir kitų įprastinių užduočių, tačiau ne visos laboratorijos gali sau leisti tokią prabangą ir toliau dirbti senamadiškai – ant pusiau automatinių. įrenginiai.

ELISA rezultatų interpretavimas priklauso laboratorinio diagnostiko kompetencijai, tuo tarpu būtinai atsižvelgiama į beveik visoms imunocheminėms reakcijoms būdingą savybę duoti klaidingai teigiamus arba klaidingai neigiamus atsakymus.

Vaizdo įrašas: šiuolaikinis fermentų imunologinis tyrimas

ELISA rezultatai sifilio pavyzdžiu

Fermentinis imunologinis tyrimas tinka visoms formoms nustatyti, be to, naudojamas atrankos tyrimuose. Analizei naudojamas paciento veninis kraujas, paimtas tuščiu skrandžiu. Darbe naudojamos tam tikro specifiškumo plokštelės (AT klasės A, M, G) arba bendri antikūnai.

Atsižvelgiant į tai, kad sifilio antikūnai gaminami tam tikra seka, ELISA gali lengvai atsakyti į klausimą, kada įvyko infekcija ir kokiame proceso etape, o gautų rezultatų interpretacija gali būti pateikta tokia forma:

• IgM nurodo infekcinio proceso trukmę (gali pasireikšti paūmėjus lėtinėms uždegiminėms ligoms);
• IgA teigia, kad infekcija įvyko daugiau nei prieš mėnesį;
• IgG rodo, kad infekcija įsibėgėjo arba apie neseniai pradėtą ​​gydymą, o tai lengvai atskleidžiama surinkus anamnezę.

Atliekant tyrimą dėl sifilio, duobutės, kurių atsakas buvo neigiamas (ir neigiama kontrolė), išliks bespalvės, o teigiamas rezultatas (kaip ir teigiama kontrolė) bus ryškiai geltonos spalvos dėl tyrimo metu pridėto chromogeno spalvos pakitimo. Tačiau spalvos intensyvumas ne visada sutampa su kontroliniu, tai yra, jis gali būti šiek tiek blyškesnis arba šiek tiek gelsvas. Tai yra abejotini rezultatai, kurie, kaip taisyklė, turi būti iš naujo išnagrinėti, privalomai atsižvelgiant į kiekybinius rodiklius, gautus spektrofotometru, tačiau apskritai spalva yra tiesiogiai proporcinga imuninių kompleksų (susijusių vienas su kitu) skaičiui. AG ir AT).

Įspūdingiausias su fermentais susietas imunosorbentas – ŽIV ELISA

Analizė, galbūt labiau nei kitiems, įdomi daugeliui gyventojų, nes kol kas neįmanoma tvirtai teigti, kad daugelis socialinių problemų išnyko (prostitucija, narkomanija ir kt.). Deja, ŽIV paliečia ne tik šiuos žmonių visuomenės sluoksnius, užsikrėsti galima įvairiomis aplinkybėmis, nesusijusiomis su seksualiniu palaidumu ar narkotikų vartojimu. Bet kadangi atsirado poreikis pasitikrinti ŽIV, tai nereikėtų bijoti, kad apie apsilankymą tokioje laboratorijoje sužinos visi aplinkiniai. Dabar ŽIV infekuotus žmones saugo įstatymas, o abejojantys gali kreiptis į anoniminius biurus, kur gali išspręsti problemą nebijodami viešumo ir pasmerkimo.

Su fermentais susijęs imunosorbentinis tyrimas, naudojamas ŽIV infekcijai diagnozuoti, priklauso pirminiams standartiniams tyrimams, tačiau tam reikalingos specialios sąlygos, nes tema yra labai subtili.

Tikslinga atlikti ŽIV ELISA tyrimą po lytinių santykių, kraujo perpylimo, kitų medicininių manipuliacijų, kurios rodo infekciją, ir pasibaigus inkubaciniam periodui („seronegatyvus langas“), tačiau reikia nepamiršti, kad šiuo laikotarpiu nėra pastovus. Jis gali baigtis po 14-30 dienų ir gali trukti iki šešių mėnesių, todėl vidutine reikšme laikomas intervalas nuo 45 iki 90 dienų. Sergant ŽIV kraujas dovanojamas taip pat, kaip ir nuo kitų infekcijų – iš venos tuščiu skrandžiu. Rezultatai bus paruošti priklausomai nuo medžiagos sukaupimo laboratorijoje ir jos darbo krūvio (nuo 2 iki 10 dienų), nors dažniausiai laboratorijos atsako tą pačią arba kitą dieną.

Ko galite tikėtis iš ŽIV rezultatų?

ELISA ŽIV infekcijai nustatyti aptinka dviejų tipų viruso antikūnus: ŽIV-1 (dažniau Rusijoje ir kitose Europos bei Azijos šalyse) ir ŽIV-2 (dažniau Vakarų Afrikoje).

ŽIV ELISA užduotis – ieškoti G klasės antikūnų, kurie aptinkami visose tyrimo sistemose, bet vėliau, ir A bei M klasės antikūnų, aptiktų naujos kartos rekombinantinių tyrimų rinkiniuose, kurie leidžia rasti antikūnus ankstyviausios stadijos (inkubacinis laikotarpis – „Seronegatyvus langas“). Iš IFA galima tikėtis šių atsakymų variantų:

1. Pirminis teigiamas rezultatas: kraują turi pakartotinai patikrinti tos pačios rūšies, bet, jei įmanoma, kitos partijos tyrimo sistema ir kitas asmuo (laborantas);
2. Pakartotinis (+) reiškia, kad iš paciento paimamas naujas kraujo mėginys, kurio tyrimas panašus į pirminę analizę;
3. Kitas teigiamas rezultatas atliekamas etaloninėje analizėje, kurioje naudojami labai specifiniai testų rinkiniai (2-3 vnt.);
4. Teigiamas rezultatas abiejose (arba trijose) sistemose siunčiamas imunoblotuoti (ta pati ELISA, bet atliekama atskirai su ypač didelio specifiškumo testų rinkiniais).

Išvada apie ŽIV infekciją daroma tik remiantis imunoblotingu. Pokalbis su užsikrėtusiu asmeniu vyksta visiškai konfidencialiai. Už medicininių paslapčių atskleidimą Rusijoje, kaip ir kitose šalyse, gresia baudžiamoji atsakomybė.

Ypatingo populiarumo sulaukė ir chlamidijų bei citomegaloviruso analizės naudojant fermentinį imuninį tyrimą, nes jais galima nustatyti užsikrėtimo laiką, ligos stadiją ir gydymo priemonių efektyvumą.

Įvedus taip pat galima pastebėti įvairių klasių antikūnų atsiradimą.įvairiose infekcinio agento sukeltos patologinės būklės fazėse:

• IgM galima nustatyti jau praėjus septynioms dienoms po užsikrėtimo;
• IgA rodo, kad infekcija organizme gyvena ilgiau nei mėnesį;
• IgG patvirtina chlamidijų diagnozę, padeda stebėti gydymą ir nustatyti jo efektyvumą. Pažymėtina, kad G klasės antikūnai organizme išlieka ir cirkuliuoja nepriklausomai nuo ligos amžiaus, todėl norint teisingai interpretuoti analizę, būtina atsižvelgti į pamatines vertes (normas), kurios beje, kiekvienam CDL yra skirtingi: atsižvelgiant į testavimo sistemos markę ir į rinkinį įtrauktų reagentų specifiškumą. Normos reikšmės įvedamos į formą šalia ELISA rezultato.

Kalbant apie tai, čia viskas yra šiek tiek kitaip: M klasės antikūnai atsiranda maždaug per pusantro mėnesio, ty teigiamas rezultatas (IgM+) tampa pirminės infekcijos fazėje arba vėl suaktyvėjus latentinei infekcijai ir išlieka nuo 4 mėnesių iki šešių mėnesių.

G klasės antikūnų buvimas būdingas pirminės ūminės infekcijos ar pakartotinės infekcijos atsiradimui. Analizė teigia, kad virusas egzistuoja, tačiau nepateikiama informacija apie infekcinio proceso stadiją. Tuo tarpu IgG titro normos nustatymas taip pat kelia keblumų, nes tai visiškai priklauso nuo konkretaus žmogaus imuninės būklės, tačiau tai nustatoma aptikus G klasės imunoglobulinus. Atsižvelgiant į tokį antikūnų elgesį, diagnozuojant CMVI tampa būtina įvertinti G klasės antikūnų gebėjimą sąveikauti su CMV, siekiant vėliau jį „neutralizuoti“ (AT avidity). Pradinėje ligos stadijoje IgG labai silpnai jungiasi su viruso antigenais (mažas avidiškumas) ir tik tada jie pradeda rodyti aktyvumą, todėl galime kalbėti apie antikūnų avidiškumo padidėjimą.

Galima daug kalbėti apie fermentinio imunologinio tyrimo privalumus, nes šiuo metodu pavyko išspręsti daugybę diagnostinių problemų naudojant tik veninį kraują. Renkant medžiagą tyrimams nereikia ilgai laukti, nerimauti ir nesklandumų. Be to, ELISA testų sistemos toliau tobulinamos ir jau ne už kalnų diena, kai testas duos 100% rezultato patikimumą.

Vaizdo įrašas: mokomasis Maskvos valstybinio medicinos universiteto filmas. Sechenovą apie ELISA pagrindus

Savalaikis ŽIV infekcijos diagnozavimas tampa itin svarbia priemone, nes anksčiau pradėtas gydymas gali iš esmės nulemti tolesnę ligos raidą ir pailginti paciento gyvenimą. Pastaraisiais metais pastebima didelė pažanga nustatant šią baisią ligą: senas tyrimų sistemas keičia pažangesnės, tyrimo metodai tampa prieinamesni, jų tikslumas ženkliai didėja.

Šiame straipsnyje kalbėsime apie šiuolaikinius ŽIV infekcijos diagnostikos metodus, kuriuos pravartu žinoti, norint laiku gydyti šią problemą ir palaikyti normalią sergančiojo gyvenimo kokybę.

ŽIV diagnostikos metodai

Rusijoje ŽIV infekcijai diagnozuoti atliekama standartinė procedūra, kurią sudaro du lygiai:

• ELISA testų sistema (atrankinė analizė);
• imuninis blotingas (IB).

Diagnostikai taip pat gali būti naudojami kiti metodai:

• greitieji testai.

ELISA testų sistemos

Pirmajame diagnostikos etape ŽIV infekcijai nustatyti naudojamas atrankinis testas (ELISA), kuris pagrįstas ŽIV baltymais, sukurtais laboratorijose, kurios fiksuoja specifinius antikūnus, gaminamus organizme reaguojant į infekciją. Po jų sąveikos su tiriamosios sistemos reagentais (fermentais), pasikeičia indikatoriaus spalva. Be to, šie spalvų pokyčiai apdorojami specialia įranga, kuri lemia atliktos analizės rezultatą.

Tokie ELISA testai gali parodyti rezultatus per kelias savaites nuo ŽIV užsikrėtimo. Ši analizė nenustato viruso buvimo, bet nustato antikūnų prieš jį gamybą. Kartais žmogaus organizme antikūnai prieš ŽIV prasideda praėjus 2 savaitėms po užsikrėtimo, tačiau daugumai žmonių jie atsiranda vėliau, po 3-6 savaičių.

Yra keturios ELISA testų kartos, kurių jautrumas skiriasi. Pastaraisiais metais vis dažniau naudojamos III ir IV kartos bandymų sistemos, sukurtos sintetinių peptidų arba rekombinantinių baltymų pagrindu ir pasižyminčios didesniu specifiškumu bei tikslumu. Jais galima diagnozuoti ŽIV infekciją, stebėti ŽIV paplitimą ir užtikrinti saugumą tikrinant paaukotą kraują. III ir IV kartos ELISA testų sistemų tikslumas siekia 93-99% (jautresni testai, kurie gaminami Vakarų Europoje, yra 99%).

ELISA tyrimui atlikti iš paciento venos paimama 5 ml kraujo. Nuo paskutinio valgio iki tyrimo (dažniausiai tai daroma ryte tuščiu skrandžiu) turi praeiti mažiausiai 8 valandos. Tokį tyrimą rekomenduojama atlikti ne anksčiau kaip po 3 savaičių po tariamos infekcijos (pavyzdžiui, po nesaugių santykių su nauju lytiniu partneriu).

ELISA tyrimo rezultatai gaunami per 2-10 dienų:

• neigiamas rezultatas: rodo, kad nėra ŽIV infekcijos ir nereikia kreiptis į specialistą;
• klaidingai neigiamas rezultatas: galima pastebėti ankstyvose infekcijos stadijose (iki 3 savaičių), vėlyvose AIDS stadijose, esant ryškiam imuniteto slopinimui ir netinkamai paruošus kraują;
• klaidingai teigiamas rezultatas: jį galima pastebėti sergant kai kuriomis ligomis ir netinkamai paruošus kraują;
• teigiamas rezultatas: rodo užsikrėtimą ŽIV infekcija, reikalingas IB ir paciento siuntimas pas specialistą AIDS centre.

Kodėl ELISA testas gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus?

Klaidingai teigiami ŽIV ELISA testo rezultatai gali būti stebimi netinkamai apdorojant kraują arba pacientams, kuriems yra šios būklės ir ligos:

• daugybinė mieloma;
• infekcinės ligos, kurias sukelia Epstein-Barr virusas;
• būklė po;
• autoimuninės ligos;
• nėštumo fone;
• būklė po vakcinacijos.

Dėl aukščiau aprašytų priežasčių kraujyje gali būti nespecifinių kryžmiškai reaguojančių antikūnų, kurių gamybos nesukėlė ŽIV infekcija.

Pastaraisiais metais klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo, nes naudojamos trečios ir ketvirtos kartos testų sistemos, kuriose yra jautresnių peptidinių ir rekombinantinių baltymų (jie sintetinami naudojant genų inžineriją in vitro). Pradėjus naudoti tokius ELISA testus, klaidingai teigiamų rezultatų dažnis gerokai sumažėjo ir yra apie 0,02-0,5%.

Klaidingai teigiamas rezultatas nereiškia, kad asmuo yra užsikrėtęs ŽIV. Tokiais atvejais PSO rekomenduoja atlikti kitą ELISA testą (privaloma IV karta).

Paciento kraujas siunčiamas į etaloninę ar arbitražo laboratoriją, pažymėtą „pakartojimas“ ir analizuojamas IV kartos ELISA tyrimo sistema. Jei naujos analizės rezultatas yra neigiamas, pirmasis rezultatas pripažįstamas klaidingu (klaidingai teigiamas) ir IB neatliekamas. Jei antrojo tyrimo metu gaunamas teigiamas arba abejotinas rezultatas, po 4-6 savaičių pacientui turi būti paskirta IB, kad būtų patvirtinta arba paneigta ŽIV infekcija.

Imuninis blotingas

Galutinė ŽIV infekcijos diagnozė gali būti nustatyta tik gavus teigiamą imuninio blotingo (IB) rezultatą. Jai įgyvendinti naudojama nitroceliuliozės juostelė, ant kurios dedami virusiniai baltymai.

IB kraujo mėginiai imami iš venos. Tada jis specialiai apdorojamas, o jo serume esantys baltymai atskiriami specialiame gelyje pagal jų krūvį ir molekulinę masę (manipuliacija atliekama specialia įranga veikiant elektriniam laukui). Ant kraujo serumo gelio uždedama nitroceliuliozės juostelė ir specialioje kameroje atliekamas blotavimas („blotingas“). Juostelė yra apdorojama ir, jei naudojamose medžiagose yra antikūnų prieš ŽIV, jie prisijungia prie antigeninių juostų IB ir pasirodo kaip linijos.

IB laikomas teigiamu, jei:

• pagal amerikietiškus CDC kriterijus - ant juostelės yra dvi ar trys gp41, p24, gp120 / gp160 eilutės;
• pagal Amerikos FDA kriterijus - ant juostelės yra dvi eilutės p24, p31 ir eilutė gp41 arba gp120 / gp160.

99,9% atvejų teigiamas IB rezultatas rodo ŽIV infekciją.

Jei nėra linijų - IB yra neigiamas.

Nustatyti linijas su gp160, gp120 ir gp41-IB abejotina. Tokį rezultatą galima aptikti, kai:

• onkologinės ligos;
• nėštumas;
• dažni kraujo perpylimai.

Tokiais atvejais rekomenduojama atlikti pakartotinę ekspertizę naudojant kitos įmonės rinkinį. Jei po papildomo IB rezultatas išlieka abejotinas, tada stebėjimas būtinas šešis mėnesius (IB atliekamas kas 3 mėnesius).

Polimerazės grandininė reakcija

PGR testas gali aptikti viruso RNR. Jo jautrumas yra gana didelis ir leidžia nustatyti ŽIV infekciją jau 10 dienų po užsikrėtimo. Kai kuriais atvejais PGR gali duoti klaidingai teigiamus rezultatus, nes jo didelis jautrumas taip pat gali reaguoti į antikūnus prieš kitas infekcijas.

Šis diagnostikos metodas yra brangus ir reikalauja specialios įrangos bei aukštos kvalifikacijos specialistų. Šios priežastys neleidžia to atlikti atliekant masinius gyventojų tyrimus.

PGR naudojama šiais atvejais:

• nustatyti ŽIV naujagimiams, kuriuos pagimdė ŽIV infekuotos motinos;
• nustatyti ŽIV „lango periodu“ arba esant abejotinam IB;
• kontroliuoti ŽIV koncentraciją kraujyje;
• donorų kraujo tyrimui.

Tik PGR testu ŽIV nediagnozuojamas, o atliekamas kaip papildomas diagnostikos metodas prieštaringoms situacijoms išspręsti.

Ekspreso metodai

Viena iš ŽIV diagnostikos naujovių tapo greitieji testai, kurių rezultatus galima įvertinti per 10-15 minučių. Veiksmingiausi ir tiksliausi rezultatai gaunami atliekant imunochromatografinius tyrimus, pagrįstus kapiliarinio srauto principu. Tai specialios juostelės, ant kurių užtepamas kraujas ar kiti tiriami skysčiai (seilės, šlapimas). Esant antikūnams prieš ŽIV, po 10-15 minučių ant testo atsiranda spalvota ir kontrolinė juostelė – teigiamas rezultatas. Jei rezultatas neigiamas, rodoma tik kontrolinė juostelė.

Kaip ir po ELISA testų, greitųjų testų rezultatai turi būti patvirtinti IB analize. Tik tada galima diagnozuoti ŽIV infekciją.

Yra greitųjų rinkinių, skirtų testavimui namuose. „OraSure Technologies1“ testas (JAV) yra patvirtintas FDA, parduodamas be recepto ir gali būti naudojamas ŽIV aptikti. Po tyrimo, gavus teigiamą rezultatą, pacientui rekomenduojama atlikti tyrimą specializuotame centre, kad būtų patvirtinta diagnozė.

Kiti bandymai, skirti naudoti namuose, dar nebuvo patvirtinti FDA ir gali būti labai abejotini.

Nepaisant to, kad greitieji testai yra prastesni nei IV kartos ELISA testai, jie plačiai naudojami papildomam populiacijos tyrimui.

ŽIV infekcijos nustatymo testus galite atlikti bet kurioje klinikoje, centrinėje rajono ligoninėje ar specializuotuose AIDS centruose. Rusijos teritorijoje jie laikomi visiškai konfidencialiai arba anonimiškai. Kiekvienas pacientas gali tikėtis medicininės ar psichologinės konsultacijos prieš arba po tyrimo. Už ŽIV tyrimus teks mokėti tik komercinėse ligoninėse, o valstybinėse klinikose ir ligoninėse jie atliekami nemokamai.

Skaitykite apie būdus, kuriais galite užsikrėsti ŽIV ir kokie mitai egzistuoja apie galimybes užsikrėsti