Anti HIV 1 2 čo. Diagnostika ELISA: čo je podstata, stanovenie protilátok, ako sa vykonáva a na aké choroby je účinná? Polymerická reťazová reakcia

Infekcia HIV je klasifikovaná ako nekontrolované ochorenie z dôvodu nedostatku metód jeho špecifickej prevencie a nedostatočnej účinnosti liečby. Na kontrolu epidemiologickej situácie infekcie HIV sa preto v súčasnosti používajú hlavne skríningové diagnostické štúdie. Vedúce miesto medzi metódami diagnostiky infekcie HIV má enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA), ktorý umožňuje u vyšetrovaných osôb identifikovať sérologické markery pôvodcu tohto ochorenia.

Táto správa predstavuje výsledky stanovenia protilátok proti HIV v krvnom sére 40 823 osôb, vrátane pacientov z prenatálnych kliník, polikliník, mestských nemocníc, ako aj lekárskych stredísk špecializujúcich sa na vyšetrenie a liečbu rizikových pacientov (drogovo závislí, pacientov s vírusovou hepatitídou B, C a pohlavnými chorobami). Štúdie sa uskutočnili v roku 2005 v laboratóriu imunológie Výskumného ústavu pôrodníctva a gynekológie. PRED. Ott Russian Academy of Medical Sciences, ktorá má viac ako 15 rokov skúseností s používaním metód ELISA na diagnostiku rôznych infekčných chorôb.

Na primárne vyšetrenie vzoriek krvného séra sme použili testovací systém CombiBest anti-HIV-1 + 2 (ZAO Vector-Best, Novosibirsk), ktorý detekuje celkové špecifické protilátky proti HIV-1 a HIV- vo vyšetrovaných vzorkách ľudského séra alebo plazma.2 (imunoglobulíny tried A, G a M). V tejto diagnostickej súprave sa rekombinantné proteíny HIV používajú ako na imobilizáciu v jamkách doštičiek, tak vo forme konjugátu s chrenovou peroxidázou. Vyhodnotenie výsledkov analýzy séra sa uskutočnilo v súlade s odporúčaniami pokynov pre testovací systém: negatívne (neobsahujúce protilátky proti HIV-1 a HIV-2) boli považované za testovacie vzorky, optická hustota (OD) z toho v ELISA neprekročila hodnotu ODcrit.

Pri laboratórnom skríningu bolo získaných 40222 (98,5%) zo 40823 vzoriek séra negatívnych výsledkov testu ELISA a 601 (1,5%) testovanej vzorky bolo považovaných za primárne pozitívne. Ako výsledok opakovanej analýzy každého zo 601 sér v duplikátoch (dve jamky doštičky) vykonanej nasledujúci deň, bolo 440 (73,2%) vzoriek určených ako pozitívnych a 161 (26,8%) - ako negatívnych. V súlade s odporúčaniami Ministerstva zdravotníctva a sociálneho rozvoja bolo 440 pozitívnych sér pri skríningu zmrazených a prenesených na ďalšie potvrdzujúce štúdie do konzultačnej a diagnostickej miestnosti referenčného laboratória nemocnice č. 30 pomenovanej po S.P. Bot-kin. Tieto štúdie sa uskutočňovali s použitím enzýmovo viazaných imunosorbentných testovacích systémov EKOlab-Vironostika HIV 1,2 Ag / At (EKOlab, Elektrogorsk), Genscreen Plus HIV Ag-Ab “(„ BioRad “, USA), ako aj súpravy pre imunoblot. Výsledky analýzy 440 sér v potvrdzovacích testoch viedli k záveru, že 323 (73,4%) vzoriek je pozitívnych a 102 (23,2%) je negatívnych. Neurčený analytický výsledok bol získaný pre 15 vyšetrených vzoriek (3,4%).

Je potrebné poznamenať, že hodnoty OD získané v našom laboratóriu počas ich počiatočného testovania pomocou testovacieho systému CombiBest anti-HIV-1 + 2 pre 314 (97,2%) z týchto 323 pozitívnych sér sa pohybovali od 0,900 do 1,780 a pre 9 (2,8%) vzorky - 0,500–0,900. Hodnoty OD získané skríningom 102 negatívnych sér na 52 vzoriek (51%) sa pohybovali od 0,195 do 0,400; pre 40 (39,2%) vzoriek - 0,401–0,800; 10 (9,8%) vzoriek - viac ako 0,800.

Ako výsledok vykonanej práce sa teda ukázalo, že primárne vyšetrenie krvného séra na prítomnosť sérologických markerov infekcie HIV pomocou testovacieho systému CombiBest anti-HIV-1 + 2 je vysoko účinné. Pozitívne výsledky skríningu boli potvrdené ďalšími štúdiami v referenčnom laboratóriu v 73% prípadov a falošne pozitívne výsledky boli zaznamenané iba u 0,25% z 40 823 analyzovaných sér.

Popis

Školenie

Indikácie

Interpretácia výsledkov

Popis

Metóda stanovenia Enzýmovo viazaný imunosorbentný test (ELISA).

Študijný materiál Krvné sérum

K dispozícii je domáca návšteva

Kombinovaná detekcia protilátok proti HIV typu 1 a 2 a antigénu HIV p24, kvalitatívny test.

Pozor. V prípade pozitívnych a pochybných reakcií je možné lehotu na vydanie výsledku predĺžiť až na 10 pracovných dní. HIV (vírus ľudskej imunodeficiencie), ktorý spôsobuje AIDS (syndróm získanej imunodeficiencie), patrí do rodiny retrovírusov. Prenášajú sa z človeka na človeka použitím kontaminovaných ihiel a striekačiek na intravenózne podanie lieku alebo terapeutických postupov, prostredníctvom sexuálneho styku, heterosexuálneho aj homosexuálneho. K prenosu vírusu môže dôjsť transfúziou infikovanej krvi a jej produktov, darovaním orgánov alebo semena a u zdravotníckych pracovníkov pri poranení infikovanými ihlami alebo nástrojmi. Infekcia HIV je možná prostredníctvom jej prenosu z infikovanej matky na dieťa (vertikálnou cestou), hoci moderné metódy prevencie pomocou antiretrovírusovej liečby, ak sú dodržané všetky odporúčania, môžu toto riziko znížiť na minimum.

Proces interakcie vírusu s bunkou zahŕňa množstvo stupňov: naviazanie vírusu na bunku, jeho uvoľnenie z obalu, penetrácia do cytoplazmy, syntéza DNA z vírusovej RNA a zavedenie vírusovej DNA do hostiteľa. bunkový genóm. Potom začne latentné štádium infekcie. V tomto stave môže provírusová DNA existovať nejaký čas bez toho, aby vykazovala aktivitu a bez ovplyvnenia vitálnej aktivity hostiteľskej bunky. Pokiaľ nedôjde k expresii vírusových proteínov, nedochádza k imunitnej odpovedi na vírus. Protilátky proti HIV, ktoré charakterizujú imunitnú odpoveď tela, sa objavia po aktivácii vírusovej DNA a vírusu sa začne aktívne množiť. Trvanie latentného obdobia závisí od mnohých faktorov, vrátane individuálnych genetických charakteristík organizmu.

Protilátky proti HIV sa môžu objaviť už druhý týždeň po infekcii; ich obsah sa zvyšuje v priebehu 2-4 týždňov a pretrváva mnoho rokov. U 90-95% infikovaných sa objaví v prvých troch mesiacoch po infekcii, u 5-9% - v období od troch do šiestich mesiacov, u 0,5 - 1% - neskôr.

V prvých týždňoch infekcie, dokonca pred objavením sa protilátok proti vírusu (t. J. Pred sérokonverziou), je možné vo vzorkách séra alebo plazmy zistiť prítomnosť antigénov HIV, vrátane jeho kapsidového proteínu p24. Neskôr, po sérokonverzii, sa zvyčajne stáva nedetekovateľnou.

Kombinované testovacie systémy 4. generácie, ktoré zahŕňajú test HIV Ag / Ab Combo (Architect, Abbott), detekujú protilátky proti HIV typu 1 a 2 aj antigén HIV p24, čo umožňuje včasnú detekciu infekcie. Špeciálne vlastnosti skríningového testu používaného v laboratóriu INVITRO na detekciu infekcie HIV zahŕňajú vysokú špecifickosť štúdie (\u003e 99,5%); 100% citlivosť testu na protilátky charakteristické pre obdobie sérokonverzie a citlivosť testu na antigén p24 je asi 18 pg / ml.

Postup laboratórneho testovania na HIV je prísne regulovaný príkazmi Ministerstva zdravotníctva Ruskej federácie a zahŕňa fázu skríningovej (skríningovej) štúdie na prítomnosť protilátok proti HIV pomocou metód ELISA, ktoré sú schválené na použitie, a etapa overenia (potvrdenia) podrobnejšieho výskumu v laboratóriu mestského centra AIDS. Je potrebné poznamenať, že ani tie najlepšie skríningové systémy ELISA nezaručujú 100% špecificitu, to znamená, že existuje určitá pravdepodobnosť získania nešpecifických, falošne pozitívnych výsledkov spojených s charakteristikami krvného séra pacienta. Pozitívny výsledok skríningu ELISA preto nemusí byť potvrdený v potvrdzovacích testoch, po ktorých bude pacientovi udelený negatívny alebo neurčitý výsledok. Ak sú výsledky potvrdzovacej štúdie neisté, testovanie by sa malo opakovať v priebehu 2-3 týždňov.

Laboratórna diagnostika infekcie HIV u detí narodených matkám infikovaným HIV má svoje vlastné charakteristiky. Materské protilátky proti HIV (trieda IgG) môžu cirkulovať v ich krvi až 18 mesiacov od narodenia. Absencia protilátok proti HIV u novorodencov neznamená, že vírus neprenikol cez placentárnu bariéru. Deti matiek infikovaných HIV sú podrobené laboratórnemu a diagnostickému vyšetreniu do 36 mesiacov od narodenia.

Školenie

Nie je potrebné žiadne špeciálne školenie. Krv sa odporúča odobrať najskôr 4 hodiny po poslednom jedle. Všeobecné pokyny na prípravu výskumu možno nájsť. Štúdiu zameranú na detekciu antigénu a protilátok proti HIV sa odporúča vykonať najskôr dva týždne po možnej infekcii, v prípade negatívneho výsledku opakovať po troch a šiestich týždňoch. Registrácia žiadostí o výskum v INVITRO LLC sa vykonáva podľa pasu alebo dokladu, ktorý ho nahrádza (migračná karta, dočasná registrácia v mieste bydliska, osvedčenie opravára, osvedčenie pasového úradu v prípade straty pasu, registračná karta od hotel). Predložený dokument musí obsahovať informácie o dočasnej alebo trvalej registrácii na území Ruskej federácie a fotografiu. Ak chýba cestovný pas (doklad, ktorý ho nahrádza), má pacient právo vydať anonymnú žiadosť o dodávku biomateriálu. Pri anonymnom vyšetrení je aplikácii a vzorke biomateriálu prijatej od klienta pridelené číslo, ktoré pozná iba pacient a zdravotnícky personál, ktorý objednávku urobil. ! Výsledky štúdií uskutočňovaných anonymne nemôžu byť predložené na hospitalizáciu, na odborné vyšetrenia a nepodliehajú registrácii v ORUIB.

Indikácie pre menovanie

Opuchnuté lymfatické uzliny vo viac ako dvoch oblastiach.
Leukopénia s lymfopéniou.
Nočné potenie.
Dramatické chudnutie z nejasného dôvodu.
Hnačka po dobu viac ako troch týždňov nejasnej príčiny.
Horúčka z neznámej príčiny.
Plánovanie tehotenstva.
Predoperačná príprava, hospitalizácia.
Identifikácia nasledujúcich infekcií alebo ich kombinácií: tuberkulóza, zjavná toxoplazmóza, často sa opakujúca infekcia herpesvírusom, kandidóza vnútorných orgánov, opakovaná neuralgia herpes zoster spôsobená mykoplazmou, pneumocystis alebo legionella pneumónia.
Kaposiho sarkóm v mladom veku.
Ležérny sex.

Interpretácia výsledkov

Interpretácia výsledkov testu obsahuje informácie pre ošetrujúceho lekára a nepredstavuje diagnózu. Informácie v tejto časti nemožno použiť na samodiagnostiku a samoliečbu. Presnú diagnózu stanoví lekár na základe výsledkov tohto vyšetrenia a potrebných informácií z iných zdrojov: anamnéza, výsledky ďalších vyšetrení atď.

Merné jednotky v nezávislom laboratóriu INVITRO: kvalitatívny test. Forma prezentácie výsledkov: pri absencii protilátok proti antigénu HIV 1 a 2 a p24 je odpoveď „negatívna“. V prípade detekcie protilátok proti HIV alebo antigénu v skríningovom enzýmovom imunoteste sa vzorka séra odošle na vyšetrenie potvrdzujúcou imunoblotovou metódou do centra AIDS, ktoré overí pozitívne a neisté výsledky.

Pozitívny výsledok:

HIV infekcia;
falošne pozitívny výsledok vyžadujúci opakované alebo ďalšie štúdie *);
štúdia nie je informatívna u detí mladších ako 18 mesiacov narodených matkám infikovaným HIV.

* Špecifickosť skríningového testovacieho systému na protilátky HIV 1 a 2 a antigén HIV 1 a 2 (HIV Ag / Ab Combo, Abbott) je podľa odhadov poskytnutých výrobcom reagencií asi 99,6% tak v bežnej populácii, ako aj v skupina pacientov s potenciálnymi interferenciami (infekcie HBV, HCV, Rubella, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl. trach., atď.), autoimunitné patológie (vrátane reumatoidnej artritídy, prítomnosť antinukleárnych protilátok). ), tehotenstvo, zvýšené hladiny IgG, IgM, monoklonálne gamapatie, hemodialýza, viacnásobné transfúzie krvi).

Všeobecné informácie o štúdii

HIV (Human Immunodeficiency Virus) je vírus z rodiny retrovírusov, ktorý napáda bunky ľudského imunitného systému (CD4, T-pomocníci). Spôsobuje AIDS.

HIV-1 je najbežnejší typ vírusu, ktorý sa najčastejšie vyskytuje v Rusku, Spojených štátoch, Európe, Japonsku a Austrálii (zvyčajne podtyp B).

HIV-2 je vzácny typ, ktorý je bežný v západnej Afrike.

Na diagnostiku vírusu ľudskej imunodeficiencie sa používa kombinovaný testovací systém štvrtej generácie, ktorý je schopný určiť infekciu HIV už 2 týždne po vstupe vírusu do krvi, zatiaľ čo testovacie systémy prvej generácie to robia iba 6-12 týždňov po infekcii.

Výhodou tohto kombinovaného testu na HIV je detekcia špecifického antigénu p24 (vírusový kapsidový proteín), ktorý je možné pomocou tohto testu zistiť do 1 až 4 týždňov od začiatku, vďaka použitiu protilátok proti HIV-1 p24 ako reagenciám. okamih infekcie, tj ešte pred sérokonverziou, čo výrazne skracuje obdobie okna.

Takýto test na HIV navyše detekuje protilátky proti HIV-1 a HIV-2 v krvi (pomocou reakcie antigén-protilátka), ktoré sa vytvárajú v dostatočnom množstve na stanovenie testovacím systémom 2 - 8 týždňov po infekcii.

Po sérokonverzii sa protilátky začnú viazať na antigén p24, čo vedie k pozitívnemu testu na protilátky proti HIV a negatívnemu testu na p24. Avšak po chvíli budú v krvi súčasne stanovené protilátky aj antigén. V terminálnom štádiu môže test na HIV protilátky proti AIDS priniesť negatívny výsledok, pretože je narušený mechanizmus produkcie protilátok.

Fázy infekcie HIV

Inkubačná doba alebo „séronegatívne obdobie“ je doba od infekcie do vytvorenia ochranných protilátok proti vírusu v krvi, keď sú testy na protilátky HIV negatívne, ale človek už môže vírus prenášať na ostatných. Trvanie tohto obdobia je od 2 týždňov do 6 mesiacov.
Obdobie akútnej infekcie HIV začína v priemere 2 - 4 týždne po infekcii a trvá približne 2 - 3 týždne. V tomto štádiu sa u niektorých ľudí môžu vyvinúť nešpecifické príznaky podobné chrípke v dôsledku aktívnej vírusovej replikácie.
Latentné štádium je asymptomatické, počas neho však dochádza k postupnému znižovaniu imunity a zvyšovaniu množstva vírusu v krvi.
AIDS (syndróm získanej imunodeficiencie) je poslednou fázou vývoja infekcie HIV, ktorá sa vyznačuje silným potlačením imunitného systému, ako aj sprievodnými chorobami, encefalopatiou alebo rakovinou.

Napriek tomu, že infekcia HIV je nevyliečiteľná, v súčasnosti existuje vysoko aktívna antiretrovírusová terapia (ART), ktorá môže významne predĺžiť život HIV infikovanej osoby a zlepšiť jej kvalitu.

Tento test má obzvlášť vysokú diagnostickú hodnotu, ak sa infekcia HIV vyskytla krátko pred testovaním (2 - 4 týždne).

Na čo sa výskum používa?

Analýza sa používa na včasnú diagnostiku HIV, čo umožňuje zabrániť ďalšiemu prenosu vírusu na ďalších ľudí, ako aj urýchlene zahájiť antiretrovírusovú terapiu a liečbu chorôb, ktoré prispievajú k progresii infekcie HIV.

Kedy je štúdia naplánovaná?

S pretrvávajúcimi príznakmi (po dobu 2 - 3 týždňov) nejasnej etiológie: horúčka nízkeho stupňa, hnačky, nočné potenie, náhle chudnutie, opuchnuté lymfatické uzliny.
Pri opakovanej herpetickej infekcii, vírusovej hepatitíde, pneumónii, tuberkulóze, toxoplazmóze.
Ak pacient trpí sexuálne prenosnými chorobami (syfilis, chlamýdie, kvapavka, genitálny opar, bakteriálna vaginóza).
Ak pacient mal nechránený vaginálny, análny alebo orálny sex s viacerými sexuálnymi partnermi, novým partnerom alebo partnerom, ktorého stav HIV si pacient nie je istý.
Keď pacient podstúpil postup transfúzie darcovskej krvi (aj keď prípady infekcie týmto spôsobom sú prakticky vylúčené, pretože krv je dôkladne testovaná na prítomnosť vírusových častíc a podrobená špeciálnemu tepelnému ošetreniu).
Ak si pacient injekčne podal lieky pomocou nesterilných nástrojov.
Počas tehotenstva / plánovania tehotenstva (užívanie azidotymidínu počas tehotenstva, cisársky rez, aby sa zabránilo prenosu vírusu na dieťa v čase prechodu pôrodnými cestami a odmietnutie dojčenia znížilo riziko prenosu HIV z matky na dieťa z 30% na 1 %).
Náhodné podanie injekčnej striekačky alebo iného predmetu (napríklad lekárskeho prístroja) obsahujúceho infikovanú krv (v takýchto prípadoch je pravdepodobnosť infekcie extrémne nízka).

ELISA (enzýmovo viazaný imunosorbentný test, ELISA - angl.) Vstúpila do života praktickej medicíny niekde v 60. rokoch minulého storočia. Jeho pôvodnou úlohou bol histologický výskum na vedecké účely, ktorý sa zameral na hľadanie a identifikáciu antigénnej štruktúry buniek živého organizmu.

Metóda ELISA je založená na interakcii špecifických (AT) a príbuzných antigénov (AG) s tvorbou komplexu antigén-protilátka, ktorý sa deteguje pomocou enzýmu. Táto skutočnosť podnietila vedcov k domnienke, že metódu je možné použiť na diagnostické účely na identifikáciu špecifických imunoglobulínov rôznych tried podieľajúcich sa na imunitnej reakcii na konkrétnu infekciu. A to bol prielom v klinickej laboratórnej diagnostike!

Metóda sa začala aktívne používať až začiatkom 80. rokov a potom predovšetkým v špecializovaných inštitúciách. Prvé imunotestovacie analyzátory boli vybavené transfúznymi centrami a stanicami, infekčnými a pohlavnými nemocnicami, pretože človek narodený na africkom kontinente, hrozivý AIDS, ktorý sa objavil na obzore a okamžite sa pripojil k „starým“ infekciám, vyžadoval okamžité diagnostické opatrenia a hľadať lieky, ktoré ho ovplyvňujú.

Rozsah metódy ELISA

Možnosti enzýmovej imunotesty sú skutočne rozsiahle. Teraz je ťažké si predstaviť, ako sa dá zaobísť bez takýchto štúdií, ktoré sa používajú doslova vo všetkých odvetviach medicíny. Zdá sa, čo dokáže test ELISA v onkológii? Ukazuje sa, že môže. A veľa. Schopnosť analýzy nájsť markery vlastné niektorým typom malígnych novotvarov je základom včasnej detekcie nádoru, keď ešte nie je stanovený inou metódou kvôli jeho malej veľkosti.

Moderná klinická laboratórna diagnostika (CDL) má okrem nádorových markerov aj významný arzenál panelov ELISA a využíva ich na diagnostiku rôznych patologických stavov (infekčné procesy, hormonálne poruchy) a na sledovanie farmaceutických liečivých prípravkov s cieľom zistiť ich vplyv na pacienta telo a, mimochodom, nerobí iba človeka. V súčasnosti sa vo veterinárnej službe široko používa enzýmová imunotest, pretože „naši menší bratia“ sú tiež náchylní na mnoho chorôb, ktorými občas veľmi trpia.

Preto ELISA vďaka svojej citlivosti a špecifickosti môže zo vzorky krvi odobratej z žily určiť:

Hormonálny stav (hormóny štítnej žľazy a nadobličiek, pohlavné hormóny);
Prítomnosť vírusových a bakteriálnych infekcií (HIV, B a C, chlamýdie, syfilis a, a tiež mnoho ďalších chorôb spôsobených patogénnymi mikroorganizmami);
Stopy vitálnej aktivity mikroorganizmov, ktoré iniciovali infekčný proces, ktorý sa šťastne skončil a prešiel do štádia formovania imunitnej odpovede na tento patogén. Takéto stopy, to znamená protilátky, v mnohých prípadoch zostávajú v krvi po celý život, čo chráni človeka pred opätovnou infekciou.

Čo je podstatou testu ELISA?

Enzýmový imunotest vám umožňuje určiť nielen prítomnosť samotného patogénu (kvalitatívna analýza), ale aj jeho kvantitatívny obsah v krvnom sére pacienta.

Vírusová alebo bakteriálna dávka významne ovplyvňuje priebeh infekčného procesu a jeho výsledok; kvantitatívna analýza preto hrá dôležitú úlohu pri diagnostike a liečbe chorôb v rôznych formách a štádiách.

Keďže však poznáme enzýmovú imunotest ako metódu ELISA, vôbec neuvažujeme o tom, ako sa jej podarí pokryť také široké spektrum mikroorganizmov, ktoré obývajú našu planétu, z ktorých mnohé predstavujú priamu hrozbu pre zdravie a život ľudí a zvierat. Faktom je, že ELISA má veľa možností (nekonkurenčných a konkurenčných - priamych i nepriamych), z ktorých každá rieši svoj vlastný problém a umožňuje tak cielené vyhľadávanie.

Na detekciu imunoglobulínov jednej alebo druhej triedy sa používa tradičný 96-jamkový polystyrénový panel (doštička), v ktorého jamkách sú koncentrované sorbované rekombinantné proteíny v tuhej fáze. Protilátky alebo antigény zachytené v jamke s krvným sérom nájdu „známy“ predmet a vytvoria s ním komplex (AG - AT), ktorý sa po fixácii enzýmovým konjugátom prejaví zmenou farby jamky, keď čítanie výsledkov.

Enzýmová imunotest sa vykonáva na testovacích systémoch určitej špecificity, vyrábaných v špeciálnych laboratóriách a vybavených všetkými potrebnými reaktívnymi zložkami. Výskum je možné uskutočniť pomocou podložiek (podložiek) a odčítaných spektrofotometrov, ktoré väčšinou zahŕňajú manuálnu prácu. Je samozrejme rýchlejšie a pohodlnejšie pracovať na plnoautomatických strojoch, ktoré laboratórneho asistenta zbavujú monotónneho zakopávania, prania a ďalších bežných úkonov, ale nie všetky laboratóriá si môžu tento luxus dovoliť a pokračovať v práci staromódnym spôsobom - ďalej poloautomatické stroje.

Interpretácia výsledkov testu ELISA je v kompetencii laboratórneho diagnostika, pričom sa vždy berie do úvahy vlastnosť, ktorá je vlastná takmer pri všetkých imunochemických reakciách, aby poskytla falošne pozitívne alebo falošne negatívne reakcie.

Video: moderný enzýmový imunotest

Výsledky testu ELISA pre syfilis

ELISA je vhodná na detekciu všetkých foriem, a okrem toho sa používa pri skríningových štúdiách. Na analýzu sa použije venózna krv pacienta odobratá na prázdny žalúdok. V práci sú použité doštičky s určitou špecifickosťou (AT triedy A, M, G) alebo celkovými protilátkami.

Ak vezmeme do úvahy, že protilátky v syfilise sú produkované v špecifickej sekvencii, môže ELISA ľahko odpovedať na otázku, kedy došlo k infekcii a v akom štádiu je proces, a interpretáciu získaných výsledkov možno predstaviť nasledovne:

IgM naznačujú trvanie infekčného procesu (môžu sa objaviť s exacerbáciou chronických zápalových ochorení);
IgA uvádza, že k infekcii došlo pred viac ako mesiacom;
IgG naznačuje, že infekcia je v plnom prúde alebo sa týka nedávnej liečby, ktorá sa dá ľahko zistiť anamnézou.

Pri testovaní na syfilis zostanú jamky s negatívnou odpoveďou (a negatívnou kontrolou) bezfarebné, zatiaľ čo pozitívny výsledok (ako pozitívna kontrola) poskytne jasne žlté sfarbenie v dôsledku zafarbenia chromogénu pridaného počas štúdie. Nie vždy sa však intenzita farby zhoduje s kontrolou, to znamená, že môže byť mierne bledšia alebo mierne žltkastá. Ide o pochybné výsledky, ktoré sa spravidla musia opätovne preskúmať s povinným zohľadnením kvantitatívnych ukazovateľov získaných na spektrofotometri, ale farba je vo všeobecnosti priamo úmerná počtu imunitných komplexov (navzájom súvisiacich). AG a AT).

Najzaujímavejšie z enzýmových imunotestov - ELISA na HIV

Analýza pre, možno viac ako iné, je zaujímavá pre široký okruh obyvateľstva, pretože stále nemožno s istotou povedať, že zmizlo veľa sociálnych problémov (prostitúcia, drogová závislosť atď.). HIV, bohužiaľ, ovplyvňuje nielen tieto vrstvy ľudskej spoločnosti, je možné sa nakaziť za rôznych okolností, ktoré nesúvisia so sexuálnou promiskuitou alebo užívaním drog. Ak je však potrebné testovanie na HIV, nemalo by sa báť, že sa všetci okolo dozvedia o návšteve takéhoto laboratória. Teraz sú ľudia infikovaní HIV chránení zákonom a pochybovači sa môžu obrátiť na anonymné úrady, kde môžu problém vyriešiť bez obáv z publicity a odsúdenia.

Enzýmovo viazaný imunosorbentný test používaný na diagnostiku infekcie HIV patrí k primárnym štandardným štúdiám, ktoré si však vyžadujú špeciálne podmienky, pretože téma je veľmi chúlostivá.

Je logické uskutočňovať test ELISA na HIV po pohlavnom styku, transfúzii krvi, iných lekárskych manipuláciách, ktoré naznačujú infekciu, a na konci inkubačnej doby („séronegatívne okno“), je však potrebné mať na pamäti, že táto doba nie je konštantná. Môže sa skončiť o 14 - 30 dní a môže trvať až šesť mesiacov, preto sa za priemernú hodnotu považuje interval od 45 do 90 dní. Pri HIV sa krv daruje rovnakým spôsobom ako pri iných infekciách - z žily na prázdny žalúdok. Výsledky budú pripravené v závislosti od akumulácie materiálu v laboratóriu a jeho pracovnej záťaže (od 2 do 10 dní), hoci laboratóriá najčastejšie poskytujú odpoveď v ten istý alebo nasledujúci deň.

Čo môžete očakávať od výsledkov HIV?

ELISA na infekciu HIV detekuje protilátky proti dvom typom vírusu: HIV-1 (bežnejší v Rusku a ďalších krajinách Európy a Ázie) a HIV-2 (vyskytujú sa častejšie v západnej Afrike).

Úlohou testu HIV ELISA je vyhľadávať protilátky triedy G, ktoré sa detegujú na všetkých testovacích systémoch, ale až v neskoršom období, a protilátky triedy A a M detegované na súpravách novej generácie rekombinantných testov, ktoré umožňujú nájsť protilátky na najskoršie štádiá (inkubačná doba - „séronegatívne okno“). Od IFA možno očakávať nasledujúce možnosti odpovede:

Primárny pozitívny výsledok: krv musí byť znovu skontrolovaná na testovacom systéme rovnakého typu, ale pokiaľ je to možné, inej šarži a inej osobe (laborant);
Opakované (+) predpokladá nový odber krvi od pacienta s jeho vyšetrením podobným primárnej analýze;
Nasledujúci pozitívny výsledok je predmetom referenčnej analýzy, v ktorej sa používajú vysoko špecifické testovacie súpravy (2 - 3 ks);
Pozitívny výsledok v obidvoch (alebo v troch) systémoch je odoslaný na imunoblotovanie (rovnaký test ELISA, ale vykonaný individuálne na testovacích súpravách so zvlášť vysokou špecifickosťou).

Záver o infekcii HIV sa robí iba na základe imunoblotu. Rozhovor s infikovanou osobou sa vedie v úplnej dôvernosti. Odhalenie lekárskeho tajomstva v Rusku a tiež v ďalších krajinách je predmetom trestného postihu.

Analýzy na chlamýdie a cytomegalovírusy uskutočnené pomocou enzýmového imunotestu si tiež získali osobitnú popularitu, pretože umožňujú určiť čas infekcie, štádium ochorenia a účinnosť terapeutických opatrení.

Po zavedení môžete tiež pozorovať výskyt protilátok rôznych tried v rôznych fázach patologického stavu spôsobeného infekčným agens:

IgM možno zistiť už sedem dní po infekcii;
IgA naznačuje, že infekcia v tele žije už viac ako mesiac;
IgG potvrdzuje diagnózu chlamýdií, pomáha monitorovať liečbu a určovať jej účinnosť. Je potrebné poznamenať, že protilátky triedy G zostávajú a cirkulujú v tele bez ohľadu na vek ochorenia, preto je pre správne dešifrovanie analýzy potrebné brať do úvahy referenčné hodnoty (normy), ktoré spôsobom sa líšia pre každú CDL: berúc do úvahy značku testovacieho systému a špecifickosť reagencií zahrnutých v súprave. Normálne hodnoty sa zadávajú do formulára vedľa výsledku testu ELISA.

Pokiaľ ide o, tu je to trochu iné: protilátky triedy M sa objavia asi za mesiac a pol, to znamená, že pozitívny výsledok (IgM +) sa stane vo fáze primárnej infekcie alebo pri reaktivácii latentnej infekcie a zostane tak od 4 mesiacov do šiestich mesiacov.

Prítomnosť protilátok triedy G je charakteristická pre nástup primárnej akútnej infekcie alebo reinfekcie. Analýza uvádza, že vírus existuje, ale neposkytuje informácie o štádiu infekčného procesu. Medzitým stanovenie normy titra IgG tiež spôsobuje ťažkosti, pretože to úplne závisí od imunitného stavu konkrétnej osoby, ktorý sa však stanoví detekciou imunoglobulínov triedy G. Vzhľadom na toto chovanie protilátok pri diagnostike CMVI je je nevyhnutné na posúdenie schopnosti protilátok triedy G interagovať s CMV, aby sa neskôr „neutralizovali“ (avidita AT). V počiatočnom štádiu ochorenia sa IgG veľmi zle viaže na antigény vírusu (nízka avidita) a až potom začnú vykazovať aktivitu, preto môžeme hovoriť o zvýšení avidity protilátok.

Dá sa veľa hovoriť o výhodách enzýmovej imunotesty, pretože táto metóda dokázala vyriešiť veľa diagnostických problémov iba s použitím venóznej krvi. Nie je potrebné dlhé čakanie, starosti a problémy so zberom materiálu na výskum. Okrem toho sa testovacie systémy pre test ELISA neustále zdokonaľujú a nie je ďaleko ani deň, keď test dá 100% spoľahlivosť výsledku.

Video: vzdelávací film Moskovskej štátnej lekárskej univerzity. Sechenov o základoch testu ELISA

Včasná diagnostika infekcie HIV sa stáva mimoriadne dôležitým opatrením, pretože skoršie zahájenie liečby môže do značnej miery predurčiť ďalší vývoj ochorenia a predĺžiť život pacienta. V posledných rokoch nastal výrazný pokrok v detekcii tejto hroznej choroby: staré testovacie systémy sa nahrádzajú pokročilejšími, vyšetrovacie metódy sú čoraz prístupnejšie a ich presnosť sa výrazne zvyšuje.

V tomto článku si povieme o moderných metódach diagnostiky infekcie HIV, ktoré je užitočné poznať pre včasné liečenie tohto problému a udržanie normálnej kvality života chorého človeka.

Diagnostické techniky HIV

V Rusku sa na diagnostiku infekcie HIV vykonáva štandardný postup, ktorý zahŕňa dve úrovne:

Testovací systém ELISA (skríningová analýza);
imunitný blot (IB).

Na diagnostiku je možné použiť aj ďalšie metódy:

expresné testy.

Testovacie systémy ELISA

V prvej etape diagnostiky sa na detekciu infekcie HIV používa skríningový test (ELISA), ktorý je založený na proteínoch HIV vytvorených v laboratóriách, ktoré zachytávajú špecifické protilátky produkované v tele ako odpoveď na infekciu. Po ich interakcii s činidlami (enzýmami) testovacieho systému sa farba indikátora zmení. Ďalej sú tieto farebné zmeny spracované na špeciálnom zariadení, ktoré určuje výsledok vykonanej analýzy.

Takéto testy ELISA sú schopné preukázať výsledky v priebehu niekoľkých týždňov po zavedení infekcie HIV. Táto analýza nestanovuje prítomnosť vírusu, ale zisťuje tvorbu protilátok proti nemu. Niekedy v ľudskom tele začne tvorba protilátok proti HIV po 2 týždňoch po infekcii, ale u väčšiny ľudí sa vyvinú neskôr, po 3 - 6 týždňoch.

Existujú štyri generácie testov ELISA s rôznou citlivosťou. V posledných rokoch sa častejšie používajú testovacie systémy III a IV generácie, ktoré sú vytvorené na báze syntetických peptidov alebo rekombinantných proteínov a majú väčšiu špecifickosť a presnosť. Môžu byť použité na diagnostiku infekcie HIV, na sledovanie prevalencie HIV a na zaistenie bezpečnosti pri skríningu darovanej krvi. Presnosť testovacích systémov ELISA III a IV generácie je 93 - 99% (citlivejšie testy vyrobené v západnej Európe sú 99%).

Na vykonanie testu ELISA sa z žily pacienta odoberie 5 ml krvi. Medzi posledným jedlom a analýzou by malo uplynúť najmenej 8 hodín (spravidla sa vykonáva ráno nalačno). Takéto vyšetrenie sa odporúča vykonať najskôr 3 týždne po údajnej infekcii (napríklad po nechránenom pohlavnom styku s novým sexuálnym partnerom).

Výsledky testu ELISA sa získajú za 2 - 10 dní:

negatívny výsledok: naznačuje absenciu infekcie HIV a nevyžaduje odporúčanie špecialistovi;
falošne negatívny výsledok: možno pozorovať v počiatočných štádiách infekcie (až 3 týždne), v neskorých štádiách AIDS, s výrazným potlačením imunity a nesprávnou prípravou krvi;
falošne pozitívny výsledok: možno ho pozorovať pri niektorých chorobách a pri nesprávne vykonanej príprave krvi;
pozitívny výsledok: naznačuje infekciu HIV, vyžaduje IB a kontakt pacienta so špecialistom v centre AIDS.

Prečo môže test ELISA poskytnúť falošne pozitívne výsledky?

Falošne pozitívne výsledky testu ELISA na HIV možno pozorovať pri nesprávnom spracovaní krvi alebo u pacientov s nasledujúcimi stavmi a chorobami:

mnohopočetný myelóm;
infekčné choroby vyvolané vírusom Epstein-Barr;
stav po;
autoimunitné choroby;
na pozadí tehotenstva;
stav po očkovaní.

Z vyššie opísaných dôvodov môžu byť v krvi prítomné nešpecifické krížovo reaktívne protilátky, ktorých produkcia nebola vyvolaná infekciou HIV.

V posledných rokoch sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov významne znížila v dôsledku použitia testovacích systémov tretej a štvrtej generácie, ktoré obsahujú citlivejšie peptidové a rekombinantné proteíny (syntetizujú sa pomocou genetického inžinierstva in vitro). Po začiatku používania takýchto testov ELISA sa frekvencia falošne pozitívnych výsledkov významne znížila a je približne 0,02 - 0,5%.

Nájdenie falošne pozitívneho výsledku ešte neznamená, že je človek nakazený vírusom HIV. V takýchto prípadoch WHO odporúča ďalší test ELISA (povinná IV generácia).

Krv pacienta sa odošle do referenčného alebo arbitrážneho laboratória s označením „opakovať“ a analyzuje sa v testovacom systéme ELISA na generáciu IV. Ak je výsledok novej analýzy negatívny, potom sa prvý výsledok rozpozná ako chybný (falošne pozitívny) a IB sa nevykoná. V prípade pozitívneho alebo pochybného výsledku počas druhého testu musí byť pacientovi pridelený IB do 4 - 6 týždňov na potvrdenie alebo vyvrátenie infekcie HIV.

Imunitné blotovanie

Definitívnu diagnózu infekcie HIV je možné stanoviť až po dosiahnutí pozitívneho výsledku imunoblotu (IB). Na jeho implementáciu sa používa nitrocelulózový prúžok, na ktorý sa nanášajú vírusové proteíny.

Odber krvi pre IB sa vykonáva z žily. Potom prejde špeciálnym spracovaním a proteíny obsiahnuté v jeho sére sa rozdelia v špeciálnom géli podľa ich náboja a molekulovej hmotnosti (manipulácia sa vykonáva na špeciálnom zariadení pod vplyvom elektrického poľa). Na gél krvného séra sa nanesie nitrocelulózový prúžok a blotovanie („blotovanie“) sa uskutoční v špeciálnej komore. Prúžok sa spracuje a ak sa v použitých materiáloch nachádzajú protilátky proti HIV, viažu sa na antigénne pásy na IB a vyzerajú ako čiary.

IB sa považuje za pozitívny, ak:

podľa amerických kritérií CDC - na páse sú dva alebo tri riadky gp41, p24, gp120 / gp160;
podľa kritérií amerického FDA - na páse sú dve linky p24, p31 a linka gp41 alebo gp120 / gp160.

V 99,9% prípadov pozitívny výsledok IB naznačuje infekciu HIV.

Ak neexistujú riadky, záporný je IB.

Pri identifikácii línií s gp160 je gp120 a gp41-IB pochybné. Takýto výsledok možno zistiť, keď:

onkologické choroby;
tehotenstvo;
časté krvné transfúzie.

V takýchto prípadoch sa odporúča vykonať opätovné vyšetrenie pomocou súpravy od inej spoločnosti. Ak po ďalšej IB bude výsledok pochybný, je potrebné pozorovanie po dobu šiestich mesiacov (IB sa vykonáva každé 3 mesiace).

Polymerická reťazová reakcia

Test PCR dokáže zistiť RNA vírusu. Jeho citlivosť je pomerne vysoká a umožňuje vám zistiť infekciu HIV už 10 dní po infekcii. V niektorých prípadoch môže PCR poskytnúť falošne pozitívne výsledky, pretože jej vysoká citlivosť môže reagovať aj na protilátky proti iným infekciám.

Táto diagnostická technika je drahá, vyžaduje špeciálne vybavenie a vysoko kvalifikovaných odborníkov. Tieto dôvody neumožňujú jeho uskutočnenie počas hromadného testovania populácie.

PCR sa používa v týchto prípadoch:

na detekciu HIV u novorodencov, ktorí sa narodili matkám infikovaným HIV;
na detekciu HIV v „okennom období“ alebo v prípade pochybnej IB;
na kontrolu koncentrácie HIV v krvi;
na štúdium darcovskej krvi.

Iba pomocou testu PCR nie je HIV diagnostikovaný, ale vykonáva sa ako ďalšia diagnostická metóda na riešenie kontroverzných situácií.

Expresné metódy

Jednou z noviniek v diagnostike HIV sa stali expresné testy, ktorých výsledky je možné vyhodnotiť v priebehu 10 - 15 minút. Najefektívnejšie a najpresnejšie výsledky sa dosiahnu imunochromatografickými testami založenými na princípe kapilárneho prietoku. Sú to špeciálne prúžky, na ktoré sa nanáša krv alebo iné vyšetrované kvapaliny (sliny, moč). V prítomnosti protilátok proti HIV sa po 10 - 15 minútach na teste objaví farba a kontrolný prúžok - pozitívny výsledok. Ak je výsledok negatívny, zobrazí sa iba kontrolný prúžok.

Rovnako ako po testoch ELISA musia byť výsledky rýchlych testov potvrdené analýzou IB. Až potom je možné stanoviť diagnózu infekcie HIV.

K dispozícii sú expresné súpravy na domáce testovanie. Test OraSure Technologies1 (USA) je schválený FDA, predáva sa bez lekárskeho predpisu a je možné ho použiť na detekciu HIV. Po ukončení testu sa pacientovi v prípade pozitívneho výsledku odporúča podstúpiť vyšetrenie v špecializovanom centre na potvrdenie diagnózy.

Zvyšok testov na domáce použitie ešte nebol schválený FDA a môže byť veľmi otázny.

Napriek skutočnosti, že rýchle testy majú nižšiu presnosť ako testy ELISA na IV. Generáciu, často sa používajú na ďalšie testovanie populácie.

Testy na zistenie infekcie HIV môžete podstúpiť na ktorejkoľvek klinike, v centrálnej okresnej nemocnici alebo v špecializovaných centrách proti AIDS. Na území Ruska sú zadržiavaní absolútne dôverne alebo anonymne. Každý pacient môže očakávať, že dostane lekársku alebo psychologickú radu pred alebo po vyšetrení. Za testy na HIV budete musieť platiť iba v komerčných nemocniciach a v štátnych poliklinikách a nemocniciach sa vykonávajú bezplatne.

Prečítajte si o spôsoboch, ako sa môžete nakaziť vírusom HIV, a aké mýty existujú o možnostiach infikovania sa