Anti HIV 1 2 kaj. Diagnoza ELISA: kaj je bistvo, določanje protiteles, kako se izvaja in pri katerih boleznih je učinkovita? Verižna reakcija polimeraze

Okužbo s HIV uvrščamo med nenadzorovano bolezen zaradi pomanjkanja metod za njeno specifično preprečevanje in nezadostne učinkovitosti terapije. Zato se za nadzor epidemiološke situacije okužbe s HIV trenutno uporabljajo predvsem presejalne diagnostične študije. Vodilno mesto med metodami za diagnosticiranje okužbe s HIV zaseda encimsko vezan imunosorbentni test (ELISA), ki omogoča identifikacijo seroloških označevalcev povzročitelja te bolezni pri pregledanih posameznikih.

To poročilo predstavlja rezultate določanja protiteles proti virusu HIV v krvnem serumu 40.823 ljudi, vključno s pacienti predporodnih klinik, poliklinik, mestnih bolnišnic, pa tudi zdravstvenih centrov, specializiranih za pregled in zdravljenje ogroženih pacientov (odvisniki od drog, bolniki z virusnimi hepatitisi B, C in spolnimi boleznimi). Študije so bile izvedene leta 2005 v laboratoriju za imunologijo Raziskovalnega inštituta za porodništvo in ginekologijo po imenu V.I. PRED. Ott Ruska akademija medicinskih znanosti, ki ima več kot 15 let izkušenj z uporabo metod ELISA za diagnosticiranje različnih nalezljivih bolezni.

Za primarni pregled vzorcev krvnega seruma smo uporabili CombiBest testni sistem proti HIV-1 + 2 (ZAO Vector-Best, Novosibirsk), ki odkrije skupna specifična protitelesa proti HIV-1 in HIV-2 (imunoglobulini razredov A, G in M). V tem diagnostičnem kompletu se rekombinantni proteini HIV uporabljajo tako za imobilizacijo v vdolbinicah plošč kot v obliki konjugata s hrenovo peroksidazo. Vrednotenje rezultatov analize serumov je bilo izvedeno v skladu s priporočili navodil za testni sistem: preskusni vzorci so bili negativni (ne vsebujejo protiteles proti HIV-1 in HIV-2), optična gostota (OD) od tega v ELISA ni presegla vrednosti ODcrit.

Pri laboratorijskem pregledu je 40222 (98,5%) od 40823 vzorcev seruma prejelo negativen rezultat ELISA, 601 (1,5%) testiranega vzorca pa je bil ocenjen kot primarno pozitiven. Zaradi ponavljajoče se analize vsakega od 601 serumov v dvojnikih (dve vdolbinici plošče) naslednji dan je bilo 440 (73,2%) vzorcev določenih kot pozitivnih, 161 (26,8%) pa kot negativnih. V skladu s priporočili Ministrstva za zdravje in socialni razvoj je bilo 440 pozitivnih serumov pri presejanju zamrznjenih in prenesenih v dodatne potrditvene študije v svetovalno -diagnostično sobo referenčnega laboratorija bolnišnice št. 30 po imenu V.I. S.P. Bot-kin. Te študije so bile izvedene z uporabo encimsko povezanih imunosorbentnih testnih sistemov EKOlab-Vironostika HIV 1,2 Ag / Ab (EKOlab, Elektrogorsk), Genscreen Plus HIV Ag-Ab «(» BioRad «, ZDA), pa tudi komplete za imunoblot. Rezultati analize 440 serumov pri potrditvenih testih so nam omogočili sklep, da je 323 (73,4%) vzorcev pozitivnih, 102 (23,2%) pa negativnih. Neodločen analitični rezultat je bil pridobljen za 15 pregledanih vzorcev (3,4%).

Treba je opozoriti, da so bile vrednosti OD, pridobljene v našem laboratoriju med prvim testiranjem s testnim sistemom CombiBest proti HIV-1 + 2, za 314 (97,2%) od teh 323 pozitivnih serumov od 0,900 do 1,780 in za 9 (2,8%) vzorcev - 0.500–0.900. Vrednosti OD, pridobljene s presejanjem 102 negativnih serumov za 52 vzorcev (51%), so se gibale od 0,195 do 0,400; za 40 (39,2%) vzorcev - 0,401-0,800; 10 (9,8%) vzorcev - več kot 0,800.

Tako se je kot rezultat opravljenega dela pokazalo, da je primarna preiskava krvnega seruma na prisotnost seroloških označevalcev okužbe s HIV z uporabo testnega sistema CombiBest proti HIV-1 + 2 zelo učinkovita. Pozitivni presejalni rezultati so bili potrjeni med dodatnimi študijami v referenčnem laboratoriju v 73% primerov, lažno pozitivni rezultati pa so bili zabeleženi le pri 0,25% od 40,823 analiziranih serumov.

Opis

Priprava

Indikacije

Interpretacija rezultatov

Opis

Metoda določanja Encimsko vezan imunosorbentni test (ELISA).

Študijsko gradivo Krvni serum

Možen obisk na domu

Kombinirano odkrivanje protiteles proti virusom HIV tipa 1 in 2 ter HIV p24 antigen, kvalitativni test.

Pozor. V primeru pozitivnih in vprašljivih reakcij se lahko rok za izdajo rezultata podaljša do 10 delovnih dni. HIV (virus humane imunske pomanjkljivosti), ki povzroča AIDS (sindrom pridobljene imunske pomanjkljivosti), spada v družino retrovirusov. Prenaša se z osebe na osebo z uporabo kontaminiranih igel in brizg za intravensko dajanje zdravil ali terapevtske postopke, s spolnimi odnosi, tako heteroseksualnimi kot homoseksualnimi. Prenos virusa se lahko pojavi s transfuzijo okužene krvi in njenih produktov, darovanjem organov ali semena ter pri zdravstvenih delavcih - kadar so poškodovani zaradi okuženih igel ali instrumentov. Okužba s HIV je možna s prenosom z okužene matere na otroka (navpična pot), čeprav lahko sodobne metode preprečevanja z uporabo protiretrovirusne terapije, če upoštevamo vsa priporočila, to tveganje zmanjšamo na minimum.

Proces interakcije virusa s celico vključuje več stopenj: vezava virusa na celico, osvoboditev njegove ovojnice, prodor v citoplazmo, sinteza DNA iz virusne RNA in vstavljanje virusne DNA v genom. gostiteljsko celico. Po tem se začne latentna stopnja okužbe. V tem stanju lahko provirusna DNK obstaja nekaj časa, ne da bi pokazala aktivnost in ne vpliva na vitalno aktivnost celice gostitelja. Dokler ni izražanja virusnih beljakovin, ni imunskega odziva na virus. Protitelesa proti virusu HIV, ki so značilna za imunski odziv telesa, se pojavijo po aktiviranju virusne DNA in virusu, ki se začne aktivno množiti. Trajanje latentnega obdobja je odvisno od številnih dejavnikov, vključno s posameznimi genetskimi značilnostmi organizma.

Protitelesa proti virusu HIV se lahko pojavijo že drugi teden po okužbi; njihova vsebina se poveča v 2-4 tednih in traja več let. Pri 90-95% okuženih se pojavijo v prvih treh mesecih po okužbi, pri 5-9%-v obdobju od treh do šestih mesecev, pri 0,5-1%-pozneje.

V prvih tednih okužbe, še pred pojavom protiteles proti virusu (t.j. pred serokonverzijo), lahko v vzorcih seruma ali plazme odkrijemo prisotnost antigenov HIV, vključno s kapsidnim proteinom p24. Kasneje, po serokonverziji, običajno postane neopazen.

Kombinirani testni sistemi 4. generacije, ki vključujejo HIV Ag / Ab Combo test (Architect, Abbott), zaznavajo protitelesa proti virusom HIV 1 in 2 ter antigen HIV p24, kar omogoča zgodnje odkrivanje okužbe. Posebne značilnosti presejalnega testa, uporabljenega v laboratoriju INVITRO za odkrivanje okužbe s HIV, vključujejo visoko specifičnost študije (> 99,5%); 100% občutljivost testa na protitelesa, značilna za obdobje serokonverzije, občutljivost testa na antigen p24 pa je približno 18 pg / ml.

Postopek laboratorijskega testiranja na HIV je strogo urejen z odredbami Ministrstva za zdravje Ruske federacije in vključuje stopnjo presejalne (presejalne) študije prisotnosti protiteles proti HIV z uporabo encimsko vezanih imunosorbentnih testov (ELISA), ki so odobren za uporabo, in stopnja preverjanja (potrjevanja) podrobnejših raziskav v laboratoriju mestnega centra za boj proti aidsu. Treba je opozoriti, da tudi najboljši presejalni sistemi ELISA ne zagotavljajo 100% specifičnosti, torej obstaja določena verjetnost za pridobitev nespecifičnih, lažno pozitivnih rezultatov, povezanih z značilnostmi pacientovega krvnega seruma. Zato pozitiven rezultat presejalnega testa ELISA morda ne bo potrjen s potrditvenimi testi, nato pa bo bolnik dobil negativen ali nedoločen rezultat. Če je rezultat potrditvene študije negotov, je treba testiranje čez čas ponoviti v 2-3 tednih.

Laboratorijska diagnostika okužbe s HIV pri otrocih, rojenih materam, okuženim s HIV, ima svoje značilnosti. Materinska protitelesa proti virusu HIV (razred IgG) lahko krožijo v krvi do 18 mesecev od rojstva. Odsotnost protiteles proti virusu HIV pri novorojenčkih ne pomeni, da virus ni prodrl v placentno pregrado. Otroci mater, okuženih s HIV, so podvrženi laboratorijski diagnostiki v 36 mesecih po rojstvu.

Priprava

Posebno usposabljanje ni potrebno. Priporočljivo je odvzeti kri ne prej kot 4 ure po zadnjem obroku. Splošne smernice za pripravo na raziskave so na voljo. Študijo za odkrivanje antigena in protiteles proti virusu HIV je priporočljivo opraviti najpozneje dva tedna po možni okužbi, v primeru negativnega rezultata pa ponovitev po treh in šestih tednih. Registracija vlog za raziskovanje pri INVITRO LLC poteka po potnem listu ali dokumentu, ki ga nadomešča (migracijska kartica, začasna registracija v kraju stalnega prebivališča, potrdilo uslužbenca, potrdilo iz urada za potne liste v primeru izgube potnega lista, registrska kartica iz Hotel). Predložen dokument mora vsebovati podatke o začasni ali trajni registraciji na ozemlju Ruske federacije in fotografijo. Če potnega lista (dokumenta, ki ga nadomešča) ni, ima pacient pravico oddati anonimno vlogo za dostavo biomateriala. Z anonimnim pregledom se vlogi in vzorcu biomateriala, prejetemu od stranke, dodeli številka, ki je znana le pacientu in zdravstvenemu osebju, ki je oddalo naročilo. ! Anonimnih rezultatov študij ni mogoče predložiti v bolnišnico, na strokovne preglede in niso predmet registracije v ORUIB.

Indikacije za imenovanje

Otekle bezgavke na več kot dveh področjih.
Levkopenija z limfopenijo.
Nočno znojenje.
Dramatična izguba teže zaradi nejasnega razloga.
Driska za več kot tri tedne nejasnega vzroka.
Vročina neznanega vzroka.
Načrtovanje nosečnosti.
Predoperativna priprava, hospitalizacija.
Identifikacija naslednjih okužb ali njihovih kombinacij: tuberkuloza, manifestna toksoplazmoza, pogosto ponavljajoča se okužba s herpesvirusom, kandidiaza notranjih organov, ponavljajoča se nevralgija herpes zoster, ki jo povzročajo mikoplazme, pljučnica ali pljučnica legionele.
Kaposijev sarkom v mladosti.
Nenavaden seks.

Interpretacija rezultatov

Razlaga rezultatov testa vsebuje informacije za zdravnika in ne predstavlja diagnoze. Podatkov v tem razdelku ni mogoče uporabiti za samodiagnozo in samozdravljenje. Natančno diagnozo postavi zdravnik z uporabo rezultatov tega pregleda in potrebnih podatkov iz drugih virov: anamneze, rezultatov drugih preiskav itd.

Merske enote v neodvisnem laboratoriju INVITRO: visokokakovostni test. Oblika predstavitve rezultatov: če ni protiteles proti antigenu HIV 1 in 2 ter p24, je odgovor "negativen". V primeru odkrivanja protiteles proti virusu HIV ali antigenu pri imunološkem testu presejalnih encimov se vzorec seruma s potrditveno imunoblotsko metodo pošlje na pregled v mestni center za boj proti aidsu, ki preveri pozitivne in negotove rezultate.

Pozitiven rezultat:

Okužba s HIV;
lažno pozitiven rezultat, ki zahteva ponovne ali dodatne študije *);
študija ni informativna pri otrocih, mlajših od 18 mesecev, rojenih materam, okuženim s HIV.

* Specifičnost sistema presejalnega testa za protitelesa proti virusu HIV 1 in 2 ter antigenu HIV 1 in 2 (HIV Ag / Ab Combo, Abbott) je po ocenah proizvajalca reagenta približno 99,6% tako v splošni populaciji kot v bolniki v skupini z možnimi motnjami (okužbe s HBV, HCV, rdečkami, HAV, EBV, HNLV-I, HTLV-II, E. coli, Chl.trach. itd.), avtoimunske patologije (vključno z revmatoidnim artritisom, prisotnostjo protiteles proti jedru) ), nosečnost, povišane ravni IgG, IgM, monoklonske gamopatije, hemodializa, večkratna transfuzija krvi).

Splošne informacije o študiji

HIV (virus humane imunske pomanjkljivosti) je virus iz družine retrovirusov, ki okuži celice človeškega imunskega sistema (CD4, T-pomočniki). Povzroča AIDS.

HIV-1 je najpogostejša vrsta virusa, najpogosteje ga najdemo v Rusiji, ZDA, Evropi, na Japonskem in v Avstraliji (običajno podtip B).

HIV-2 je redek tip, ki je pogost v zahodni Afriki.

Za diagnosticiranje virusa humane imunske pomanjkljivosti se uporablja kombinirani testni sistem četrte generacije, ki lahko ugotovi okužbo s HIV že 2 tedna po vstopu virusa v krvni obtok, medtem ko testni sistemi prve generacije to storijo šele 6-12 tednov po okužbi .

Prednost tega kombiniranega testa na HIV je odkrivanje, zahvaljujoč uporabi protiteles proti virusu HIV-1 p24 kot reagentov, specifičnega antigena p24 (virusnega kapsidnega proteina), ki ga lahko s tem testom odkrijemo v 1-4 tednih po trenutek okužbe, torej še pred serokonverzijo, kar bistveno skrajša obdobje okna.

Poleg tega takšen test na HIV odkrije protitelesa proti HIV-1 in HIV-2 v krvi (z reakcijo protitelesa-protitelesa), ki se proizvajajo v zadostnih količinah, da jih testni sistem določi po 2-8 tednih od trenutka okužbe.

Po serokonverziji se protitelesa začnejo vezati na antigen p24, kar ima za posledico pozitiven test protiteles proti HIV in negativen test p24. Čez nekaj časa pa se v krvi hkrati določijo protitelesa in antigen. Na zadnji stopnji lahko test AIDS za protitelesa proti HIV povzroči negativen rezultat, saj je mehanizem za proizvodnjo protiteles moten.

Faze okužbe s HIV

Inkubacijsko obdobje ali "seronegativno okensko obdobje" je čas od okužbe do razvoja zaščitnih protiteles proti virusu v krvi, ko so testi na protitelesa proti HIV negativni, vendar lahko oseba že prenese virus na druge ljudi. To obdobje traja od 2 tednov do 6 mesecev.
Obdobje akutne okužbe s HIV se začne v povprečju 2-4 tedne po okužbi in traja približno 2-3 tedne. Na tej stopnji se lahko pri nekaterih ljudeh zaradi aktivne replikacije virusa razvijejo nespecifični gripi podobni simptomi.
Latentna stopnja je asimptomatska, vendar se med njo postopno zmanjšuje imunost in povečuje količina virusa v krvi.
AIDS (sindrom pridobljene imunske pomanjkljivosti) je zadnja stopnja v razvoju okužbe s HIV, za katero je značilno hudo zatiranje imunskega sistema, pa tudi spremljajoče bolezni, encefalopatija ali rak.

Kljub dejstvu, da je okužba s HIV neozdravljiva, danes obstaja zelo aktivna protiretrovirusna terapija (ART), ki lahko znatno podaljša življenje osebe, okužene s HIV, in izboljša njeno kakovost.

Ta test ima posebno visoko diagnostično vrednost, če se je okužba s HIV pojavila tik pred testom (2-4 tedne).

Za kaj se uporabljajo raziskave?

Analiza se uporablja za zgodnjo diagnozo HIV, ki omogoča preprečevanje nadaljnjega prenosa virusa na druge ljudi, pa tudi takojšen začetek protiretrovirusne terapije in zdravljenja bolezni, ki prispevajo k napredovanju okužbe s HIV.

Kdaj je načrtovan študij?

S stalnimi simptomi (2-3 tedne) nejasne etiologije: nizka telesna temperatura, driska, nočno znojenje, nenadna izguba teže, otekle bezgavke.
S ponavljajočo se okužbo s herpesom, virusnim hepatitisom, pljučnico, tuberkulozo, toksoplazmozo.
Če ima bolnik spolno prenosljive bolezni (sifilis, klamidijo, gonorejo, genitalni herpes, bakterijsko vaginozo).
Če je imela pacientka nezaščiten vaginalni, analni ali oralni seks z več spolnimi partnerji, novim partnerjem ali partnerjem, za katerega bolnik ni prepričan.
Ko je bil bolnik podvržen transfuziji krvodajalčeve krvi (čeprav so primeri okužbe na ta način praktično izključeni, saj je kri temeljito testirana na prisotnost virusnih delcev in je podvržena posebni toplotni obdelavi).
Če je bolnik injiciral zdravila z nesterilnimi instrumenti.
Med nosečnostjo / načrtovanjem nosečnosti (jemanje azidotimidina med nosečnostjo, carski rez, da se prepreči prenos virusa na otroka v času prehoda skozi porodni kanal in zavrnitev dojenja zmanjša tveganje prenosa virusa HIV z matere na otroka s 30% na 1 %).
Nenamerno injiciranje z brizgo ali drugim predmetom (na primer medicinskim instrumentom), ki vsebuje okuženo kri (v takih primerih je verjetnost okužbe izjemno majhna).

ELISA (encimsko vezan imunosorbentni test, ELISA - angleščina) je v prakso medicine vstopil nekje v 60. letih prejšnjega stoletja. Njegova začetna naloga so bile histološke raziskave v znanstvene namene, ki so se zreducirale na iskanje in identifikacijo antigene strukture celic živega organizma.

Metoda ELISA temelji na interakciji specifičnih (AT) in sorodnih antigenov (AG) s tvorbo kompleksa "antigen - protitelo", ki se zazna z uporabo encima. To dejstvo je znanstvenike prepričalo, da se lahko metoda uporabi za diagnostične namene za identifikacijo specifičnih imunoglobulinov različnih razredov, vključenih v imunski odziv na določeno okužbo. In to je bil preboj v klinični laboratorijski diagnostiki!

Metoda se je začela aktivno uporabljati šele v zgodnjih 80. letih, nato pa predvsem v specializiranih ustanovah. Prvi encimski imunoanalizatorji so bili opremljeni s centri za transfuzijo krvi in postajami, infekcijskimi in venerološkimi bolnišnicami, saj je moški, rojen na afriški celini, grozljiv AIDS, ki se je pojavil na obzorju in se takoj pridružil "starim" okužbam, zahteval takojšnje diagnostične ukrepe in iskanje zdravil, ki vplivajo nanj.

Področje uporabe metode ELISA

Možnosti encimskega imunskega testa so resnično velike. Zdaj si je težko predstavljati, kako je mogoče brez takšnih študij, ki se uporabljajo v dobesedno vseh vejah medicine. Zdi se, kaj lahko ELISA naredi pri onkologiji? Izkazalo se je, da lahko. In veliko. Sposobnost analize, da najde markerje, značilne za nekatere vrste malignih novotvorb, je osnova zgodnjega odkrivanja tumorja, ko ga zaradi majhnosti še ne določi druga metoda.

Sodobna klinična laboratorijska diagnostika (CDL) ima poleg tumorskih označevalcev pomemben arzenal plošč ELISA in jih uporablja za diagnosticiranje različnih patoloških stanj (nalezljivi procesi, hormonske motnje) in spremljanje farmacevtskih zdravil, da bi ugotovili njihov učinek na bolnikovo telo in, mimogrede, ne samo oseba. Trenutno se encimski imunski test široko uporablja v veterinarski službi, saj so tudi "naši manjši bratje" dovzetni za številne bolezni, od katerih včasih zelo trpijo.

Tako ELISA lahko zaradi svoje občutljivosti in specifičnosti na podlagi vzorca krvi, vzetega iz vene, določi:

Hormonski status (ščitnični in nadledvični hormoni, spolni hormoni);
Prisotnost virusnih in bakterijskih okužb (HIV, B in C, klamidija, sifilis in in ter številne druge bolezni, ki jih povzročajo patogeni mikroorganizmi);
Sledi vitalne aktivnosti mikroorganizmov, ki so sprožili infekcijski proces, ki se je srečno končal in prešel v fazo oblikovanja imunskega odziva na ta patogen. Takšne sledi, torej protitelesa, v mnogih primerih ostanejo v krvi v življenju, kar človeka ščiti pred ponovno okužbo.

Kaj je bistvo ELISA?

Encimski imunski test vam omogoča, da ugotovite ne le prisotnost samega patogena (kvalitativna analiza), temveč tudi njegovo količinsko vsebnost v krvnem serumu bolnika.

Virusni ali bakterijski odmerek pomembno vpliva na potek infekcijskega procesa in njegov izid, zato ima kvantitativna analiza pomembno vlogo pri diagnosticiranju in zdravljenju bolezni v različnih oblikah in fazah.

Ker pa poznamo encimski imunski test kot metodo ELISA, sploh ne razmišljamo o tem, kako mu uspe pokriti tako širok spekter mikroorganizmov, ki naseljujejo naš planet, od katerih mnogi predstavljajo neposredno grožnjo zdravju in življenju ljudi in živali. Dejstvo je, da ima ELISA številne možnosti (nekonkurenčne in konkurenčne - neposredne in posredne), od katerih vsaka reši svoj problem in tako omogoča ciljno iskanje.

Za identifikacijo takšnih ali drugačnih imunoglobulinov se uporablja tradicionalna polistirenska plošča s 96 vdolbinicami (plošča), v vdolbinicah katere so v trdni fazi koncentrirani sorbirani rekombinantni proteini. Protitelesa ali antigeni, ujeti v vdolbinico s krvnim serumom, najdejo "znan" predmet in z njim tvorijo kompleks (AG - AT), ki se bo, ko se bo fiksiral s konjugatom encima, pokazal s spremembo barve vdolbinice, ko branje rezultatov.

Imunski test encimov se izvaja na preskusnih sistemih določene specifičnosti, izdelanih v posebnih laboratorijih in opremljenih z vsemi potrebnimi reaktivnimi komponentami. Raziskave je mogoče izvesti z uporabo podložk ("podložk") in odčitanih spektrofotometrov, ki večinoma vključujejo ročno delo. Seveda je hitreje in bolj priročno delati na popolnoma avtomatskih strojih, ki laboranta osvobodijo monotonega zakopavanja, pranja in drugih rutinskih opravil, vendar si vsi luksuzni laboratoriji ne morejo privoščiti tega razkošja in še naprej delati na staromoden način - na polavtomatskem naprave.

Interpretacija rezultatov ELISA je v pristojnosti doktorja laboratorijske diagnostike, nujno pa je treba upoštevati lastnost skoraj vseh imunokemičnih reakcij, da dajejo lažno pozitivne ali lažno negativne odzive.

Video: sodobni encimski imunski test

Rezultati ELISA na primeru sifilisa

Encimski imunski test je primeren za odkrivanje vseh oblik, in se poleg tega uporablja v presejalnih študijah. Za analizo se uporablja pacientova venska kri, odvzeta na tešče. Pri delu se uporabljajo plošče z določeno specifičnostjo (razredi AT A, M, G) ali celotna protitelesa.

Glede na to, da se protitelesa v sifilisu proizvajajo v določenem zaporedju, lahko ELISA zlahka odgovori na vprašanje, kdaj je prišlo do okužbe in v kateri fazi je proces, razlago dobljenih rezultatov pa lahko predstavimo v naslednji obliki:

IgM označuje trajanje infekcijskega procesa (lahko se pojavi s poslabšanjem kroničnih vnetnih bolezni);
IgA navaja, da se je okužba zgodila pred več kot mesecem dni;
IgG kaže, da je okužba v polnem teku ali da gre za nedavno zdravljenje, kar zlahka razkrijemo z anamnezo.

Pri testiranju na sifilis bodo vdolbinice z negativnim odzivom (in negativno kontrolo) ostale brezbarvne, medtem ko bo pozitiven rezultat (tako kot pozitivna kontrola) dal svetlo rumeno obarvanje zaradi razbarvanja kromogena, dodanega med študijo. Vendar intenzivnost barve ne sovpada vedno s kontrolo, torej je lahko nekoliko bolj bleda ali rahlo rumenkasta. To so dvomljivi rezultati, ki jih je praviloma treba ponovno pregledati z obveznim upoštevanjem količinskih kazalnikov, pridobljenih na spektrofotometru, vendar je na splošno barva v neposrednem sorazmerju s številom imunskih kompleksov (med seboj povezanih) s strani AG in AT).

Najbolj razburljiv encimsko vezan imunosorbentni test - HIV ELISA

Analiza za, morda bolj kot druge, je zanimiva za širok krog prebivalstva, saj je še vedno nemogoče z gotovostjo trditi, da so mnoge družbene težave izginile (prostitucija, odvisnost od drog itd.). Žal HIV ne vpliva le na te plasti človeške družbe, okuži se lahko v različnih okoliščinah, ki niso povezane s spolno promiskuiteto ali uživanjem drog. Ker pa se je pojavila potreba po testiranju na HIV, se ne smemo bati, da bodo vsi obiskovalci izvedeli za obisk takega laboratorija. Zdaj so osebe, okužene s HIV, zaščitene z zakonom, dvomljivi pa se lahko obrnejo na anonimne pisarne, kjer lahko problem rešijo brez strahu pred objavo in obsodbo.

Encimski imunosorbentni test, ki se uporablja za diagnosticiranje okužbe s HIV, spada med primarne standardne študije, ki pa zahtevajo posebne pogoje, saj je tema zelo občutljiva.

Smiselno je, da se ELISA za HIV opravi po spolnem odnosu, transfuziji krvi, drugih medicinskih manipulacijah, ki nakazujejo okužbo, in ob koncu inkubacijske dobe ("seronegativno okno"), vendar je treba upoštevati, da je to obdobje ni konstantna. Lahko se konča v 14-30 dneh in lahko traja tudi do šest mesecev, zato se za povprečno vrednost šteje interval od 45 do 90 dni. Pri virusu HIV se kri podarja na enak način kot pri drugih okužbah - iz vene na tešče. Rezultati bodo pripravljeni glede na kopičenje materiala v laboratoriju in njegovo delovno obremenitev (od 2 do 10 dni), čeprav najpogosteje laboratoriji dajo odgovor isti ali naslednji dan.

Kaj lahko pričakujete od rezultatov HIV?

ELISA za okužbo s HIV odkrije protitelesa proti dvema vrstama virusa: HIV-1 (pogostejši v Rusiji in drugih državah Evrope in Azije) in HIV-2 (pogosteje v Zahodni Afriki).

Naloga ELISA za HIV je iskanje protiteles razreda G, ki so odkrita na vseh testnih sistemih, v poznejšem obdobju pa protiteles razreda A in M, odkritih na rekombinantnih testnih kompletih nove generacije, ki omogočajo odkrivanje protiteles na najzgodnejše faze (inkubacijska doba - "seronegativno okno"). Od IFA lahko pričakujete naslednje možnosti odgovora:

Primarni pozitivni rezultat: kri je treba ponovno preveriti na testnem sistemu iste vrste, vendar, če je mogoče, v drugi seriji in pri drugi osebi (laboratorijski pomočnik);
Ponovljeno (+) predvideva novo vzorčenje krvi pri pacientu s pregledom, podobnim primarni analizi;
Naslednji pozitivni rezultat je predmet referenčne analize, v kateri se uporabljajo zelo specifični testni kompleti (2-3 kosov);
Pozitiven rezultat v obeh (ali v treh) sistemih se pošlje na imunobloting (ista ELISA, vendar izvedena posamično na testnih kompletih s posebno visoko specifičnostjo).

Zaključek o okužbi s HIV je narejen le na podlagi imunoblotinga. Pogovor z okuženo osebo poteka v popolni zaupnosti. Za razkritje zdravniških skrivnosti v Rusiji, pa tudi v drugih državah, velja kazenska kazen.

Posebno priljubljenost so dobile tudi analize klamidije in citomegalovirusa z encimskim imunskim testom, saj lahko določijo čas okužbe, stopnjo bolezni in učinkovitost terapevtskih ukrepov.

Ob uvedbi je mogoče opaziti tudi pojav protiteles različnih razredov. v različnih fazah patološkega stanja, ki ga povzroča povzročitelj okužbe:

IgM je mogoče odkriti že sedem dni po okužbi;
IgA kaže, da okužba v telesu živi že več kot mesec dni;
IgG potrjuje diagnozo klamidije, pomaga spremljati zdravljenje in ugotavljati njegovo učinkovitost. Treba je opozoriti, da protitelesa razreda G ostanejo in krožijo v telesu ne glede na starost bolezni, zato je za pravilno razlago analize treba upoštevati referenčne vrednosti (norme), ki, Mimogrede, za vsak CDL so različne: ob upoštevanju znamke preskusnega sistema in posebnosti reagentov, vključenih v komplet. Normativne vrednosti se vnesejo v obrazec poleg rezultata ELISA.

Kar se tiče tukaj je nekoliko drugače: protitelesa razreda M se pojavijo v približno mesecu in pol, to pomeni, da pozitiven rezultat (IgM +) postane v fazi primarne okužbe ali ob ponovni aktivaciji latentne okužbe in ostane tako od 4 mesecev do šestih mesecev.

Prisotnost protiteles razreda G je značilna za začetek primarne akutne okužbe ali ponovne okužbe. Analiza navaja, da virus obstaja, vendar ne daje informacij o stopnji infekcijskega procesa. Medtem pa določanje norme titra IgG povzroča tudi težave, saj je v celoti odvisno od imunskega statusa določene osebe, ki pa se ugotovi z odkrivanjem imunoglobulinov razreda G. Glede na to vedenje protiteles pri diagnosticiranju CMVI postane potrebno za oceno sposobnosti protiteles razreda G, da medsebojno delujejo s CMV, da ga kasneje "nevtralizirajo" (avidnost AT). V začetni fazi bolezni se IgG zelo slabo veže na antigene virusa (nizka avidnost) in šele nato začnejo kazati aktivnost, zato lahko govorimo o povečanju avidnosti protiteles.

O prednostih imunskega testa z encimi je mogoče veliko govoriti, saj je s to metodo uspelo rešiti številne diagnostične težave z uporabo samo venske krvi. Pri zbiranju gradiva za raziskave ni treba dolgo čakati, skrbeti in imeti težav. Poleg tega se preskusni sistemi za ELISA še naprej izboljšujejo in ni več daleč dan, ko bo test 100% zanesljiv.

Video: izobraževalni film Moskovske državne medicinske univerze. Sechenov o osnovah ELISA

Pravočasna diagnoza okužbe s HIV postaja izjemno pomemben ukrep, saj lahko zgodnejši začetek zdravljenja v veliki meri vnaprej določi nadaljnji razvoj bolezni in podaljša bolnikovo življenje. V zadnjih letih je bil dosežen pomemben napredek pri odkrivanju te grozljive bolezni: stare testne sisteme nadomeščajo naprednejši, metode pregledov postajajo vse bolj dostopne, njihova natančnost pa se znatno povečuje.

V tem članku bomo govorili o sodobnih metodah diagnosticiranja okužbe s HIV, ki jih je koristno poznati za pravočasno zdravljenje te težave in ohranjanje normalne kakovosti življenja bolne osebe.

Diagnostične tehnike za HIV

V Rusiji se za diagnozo okužbe s HIV izvaja standardni postopek, ki vključuje dve ravni:

Testni sistem ELISA (presejalna analiza);
imunski blot (IB).

Za diagnosticiranje se lahko uporabijo tudi druge metode:

ekspresni testi.

Preskusni sistemi ELISA

Na prvi stopnji diagnostike se za odkrivanje okužbe s HIV uporablja presejalni test (ELISA), ki temelji na proteinih HIV, ustvarjenih v laboratorijih, ki zajamejo specifična protitelesa, ki nastanejo v telesu kot odgovor na okužbo. Po interakciji z reagenti (encimi) preskusnega sistema se barva indikatorja spremeni. Nadalje se te spremembe barve obdelujejo na posebni opremi, ki določa rezultat opravljene analize.

Takšni testi ELISA lahko pokažejo rezultate v nekaj tednih po uvedbi okužbe s HIV. Ta analiza ne zazna prisotnosti virusa, ampak zazna proizvodnjo protiteles proti njemu. Včasih se v človeškem telesu proizvodnja protiteles proti HIV začne po 2 tednih po okužbi, pri večini ljudi pa se razvijejo pozneje, po 3-6 tednih.

Obstajajo štiri generacije testov ELISA z različno občutljivostjo. V zadnjih letih so se pogosteje uporabljali preskusni sistemi III in IV generacije, ki so ustvarjeni na osnovi sintetičnih peptidov ali rekombinantnih beljakovin in imajo večjo specifičnost in natančnost. Z njimi lahko diagnosticiramo okužbo s HIV, spremljamo razširjenost virusa HIV in zagotovimo varnost pri pregledu krvodajalcev. Natančnost preskusnih sistemov ELISA III in IV generacije je 93-99% (občutljivejši testi, ki se proizvajajo v zahodni Evropi, so 99%).

Za izvedbo testa ELISA se iz bolnikove vene vzame 5 ml krvi. Med zadnjim obrokom in testom (običajno zjutraj na tešče) mora preteči najmanj 8 ur. Takšen test je priporočljivo opraviti najpozneje 3 tedne po domnevni okužbi (na primer po nezaščitenem spolnem odnosu z novim spolnim partnerjem).

Rezultati testa ELISA so pridobljeni v 2-10 dneh:

negativen rezultat: kaže na odsotnost okužbe s HIV in ne zahteva obiska specialista;
lažno negativen rezultat: opazimo ga lahko v zgodnjih fazah okužbe (do 3 tedne), v poznih fazah aidsa, z izrazitim zatiranjem imunosti in z nepravilno pripravo krvi;
lažno pozitiven rezultat: opazimo ga lahko pri nekaterih boleznih in pri nepravilno opravljeni pripravi krvi;
pozitiven rezultat: kaže na okužbo z virusom HIV, zahteva IB in pacientovo napotitev k specialistu v centru za AIDS.

Zakaj lahko test ELISA da lažno pozitivne rezultate?

Lažno pozitivne rezultate testa ELISA na HIV lahko opazimo pri nepravilni predelavi krvi ali pri bolnikih z naslednjimi stanji in boleznimi:

multipli mielom;
nalezljive bolezni, ki jih povzroča virus Epstein-Barr;
stanje po;
avtoimunske bolezni;
v ozadju nosečnosti;
stanje po cepljenju.

Zaradi zgoraj opisanih razlogov so v krvi lahko prisotna nespecifična navzkrižno reaktivna protitelesa, katerih nastanek ni sprožila okužba s HIV.

V zadnjih letih se je pogostost lažno pozitivnih rezultatov znatno zmanjšala zaradi uporabe testnih sistemov III in IV generacije, ki vsebujejo bolj občutljive peptide in rekombinantne beljakovine (sintetizirani so z genskim inženiringom in vitro). Po začetku uporabe takšnih testov ELISA se je pogostost lažno pozitivnih rezultatov znatno zmanjšala in je približno 0,02-0,5%.

Odkrivanje lažno pozitivnega rezultata ne pomeni, da je oseba okužena s HIV. V takih primerih WHO priporoča še en test ELISA (obvezna IV generacija).

Pacientovo kri pošlje v referenčni ali arbitražni laboratorij z oznako "ponovitev" in analizira na testnem sistemu ELISA IV generacije. Če je rezultat nove analize negativen, se prvi rezultat prepozna kot napačen (lažno pozitiven) in IB se ne izvede. V primeru pozitivnega ali dvomljivega rezultata med drugim testom je treba bolniku v 4-6 tednih dodeliti IB, da potrdi ali ovrže okužbo s HIV.

Imunsko blotiranje

Dokončno diagnozo okužbe s HIV je mogoče postaviti šele po pozitivnem rezultatu imunskega blotnja (IB). Za njegovo izvedbo se uporablja nitrocelulozni trak, na katerega se nanesejo virusne beljakovine.

Odvzem krvi za IB se izvede iz vene. Nato se podvrže posebni obdelavi in beljakovine v njegovem serumu se ločijo v posebnem gelu glede na njihov naboj in molekulsko maso (manipulacija se izvaja na posebni opremi pod vplivom električnega polja). Nitrocelulozni trak se nanese na gel v krvnem serumu in se v posebni komori izvede blotting ("blotting"). Trak se obdeluje in če so v uporabljenih materialih protitelesa proti HIV, se vežejo na antigene trakove na IB in se pojavijo kot črte.

IB velja za pozitivnega, če:

po ameriških merilih CDC - na traku sta dve ali tri vrstice gp41, p24, gp120 / gp160;
po merilih ameriške FDA - na traku sta dve vrstici p24, p31 in linija gp41 ali gp120 / gp160.

V 99,9% primerov pozitiven rezultat IB kaže na okužbo s HIV.

Če ni vrstic - je IB negativen.

Pri identifikaciji vrstic z gp160 sta gp120 in gp41-IB dvomljiva. Takšen rezultat je mogoče zaznati, če:

onkološke bolezni;
nosečnost;
pogoste transfuzije krvi.

V takih primerih je priporočljivo opraviti ponovni pregled z uporabo kompleta drugega podjetja. Če po dodatnem IB rezultat ostane dvomljiv, je potrebno spremljanje šest mesecev (IB se izvaja vsake 3 mesece).

Verižna reakcija polimeraze

PCR test lahko zazna RNA virusa. Njegova občutljivost je precej visoka in omogoča odkrivanje okužbe s HIV že 10 dni po okužbi. V nekaterih primerih lahko PCR da lažno pozitivne rezultate, saj se lahko njegova visoka občutljivost odzove tudi na protitelesa proti drugim okužbam.

Ta diagnostična tehnika je draga in zahteva posebno opremo in visoko usposobljene strokovnjake. Ti razlogi ne omogočajo izvajanja med množičnim testiranjem prebivalstva.

PCR se uporablja v takih primerih:

odkrivanje virusa HIV pri novorojenčkih, rojenih materam, okuženim s HIV;
za odkrivanje virusa HIV v "okenskem obdobju" ali v primeru dvomljivega IB;
za nadzor koncentracije HIV v krvi;
za preučevanje darovane krvi.

Le s testom PCR se HIV ne diagnosticira, ampak se izvede kot dodatna diagnostična metoda za reševanje spornih situacij.

Ekspresne metode

Ena od novosti pri diagnostiki HIV so postali hitri testi, katerih rezultate je mogoče oceniti v 10-15 minutah. Najbolj učinkoviti in natančni rezultati so doseženi z imunokromatografskimi testi, ki temeljijo na principu kapilarnega pretoka. So posebni trakovi, na katere se nanese kri ali druge raziskane tekočine (slina, urin). V prisotnosti protiteles proti virusu HIV se po 10-15 minutah na testu pojavi obarvan in kontrolni trak - pozitiven rezultat. Če je rezultat negativen, se prikaže samo kontrolni trak.

Tako kot po testih ELISA je treba rezultate hitrih testov potrditi z analizo IB. Šele potem je mogoče postaviti diagnozo okužbe s HIV.

Obstajajo hitri kompleti za domače testiranje. Test OraSure Technologies1 (ZDA) je odobren s strani FDA, prodaja se brez recepta in se lahko uporablja za odkrivanje virusa HIV. Po testu je v primeru pozitivnega rezultata bolniku priporočljivo opraviti pregled v specializiranem centru za potrditev diagnoze.

Preostali testi za domačo uporabo še niso bili odobreni s strani FDA in so lahko zelo vprašljivi.

Kljub dejstvu, da so hitri testi po natančnosti slabši od testov ELISA IV generacije, se pogosto uporabljajo za dodatna testiranja populacije.

Za odkrivanje okužbe s HIV lahko opravite teste v kateri koli kliniki, osrednji okrožni bolnišnici ali v specializiranih centrih za boj proti aidsu. Na ozemlju Rusije se hranijo popolnoma zaupno ali anonimno. Vsak bolnik lahko pričakuje zdravniški ali psihološki nasvet pred testom ali po njem. Testiranje na HIV boste morali plačati le v komercialnih bolnišnicah, v državnih poliklinikah in bolnišnicah pa jih opravijo brezplačno.

Preberite o načinih, kako se lahko okužite s HIV, in o mitih o možnostih okužbe