Стандартный бланк анализа синовиальной жидкости. Исследование синовиальной жидкости. В каких случаях назначается исследование синовиальной жидкости

Зачем выполнять анализ синовиальной жидкости?

В ситуациях первичной медицинской помощи данные анализа синовиальной жидкости (СЖ) позволяют определить специалиста, к которому следует направить пациента.

Если невоспалительная СЖ – к ортопеду.
Если воспалительная - к ревматологу.

Диагностическое значение анализа синовиальной жидкости

Воспалительная или невоспалительная патология
Воспаление кристаллическое или сепсис, или обострение
Помощь при выявлении групп заболеваний на основе числа клеток и их типа
Определение типа протезной недостаточности
Прогностическое значение
Ортопедическое вмешательство
Стадия конкретного заболевания
Мониторинг терапии. В частности, отказ от терапии моноклональными антителами.

На рис. 1 и 2 отражен алгоритм диагностики заболеваний суставов на основе данных анализа синовиальной жидкости

Патологические изменения в тканях, окружающих больной сустав, отражаются на объеме, клеточном составе и наличии твердых частиц в СЖ. Воспалительные заболевания суставов, различающиеся по этиологии, имеют характерные клеточные модели, которые могут быть распознаны и использованы в диагностике конкретного заболевания или группы заболеваний (рис.1, 2). Для того чтобы эти различия выявить необходимо правильно отобрать и правильно хранить СЖ, чтобы свести к минимуму аутолитические изменения и деградацию характерных Кл. В качестве антикоагулянта используют ЭДТА. Хранение при 4°С хорошо переносится СЖ и даёт превосходные диагностические результаты. Практически адекватные результаты могут быть получены до 48 часов от аспирации, но более длительное хранение даже при 4°С, как правило, позволяет идентифицировать только кристаллы и частицы. Большинство Кл подвергается лизису.

Цитологический анализ синовиальной жидкости

Тучные Кл, могут быть найдены при анализе СЖ большинства больных с заболеванием суставов, но чаще всего они наблюдаются при воспалительном артрите у пациентов с серонегативными спондилоартропатиями и при невоспалительных поражениях суставов, связанных с травмой.

Этот тип Кл часто обнаруживается при анализе СЖ пациентов с внутрисуставным кровоизлиянием или артрографии, а также при аллергической реакции на инъецированные препараты, такие как искусственная СЖ.

Подготовила: Токшекенова Б.С

Содержащаяся в полости сустава
синовиальная жидкость является
биологической средой, уникальной по
биофизическим, физико-химическим
свойствам и составу. Основы
фундаментальных исследований СЖ
были заложены в середине XIX в.
немецким исследователем Frerichs
(1846), который изучал химический и
клеточный состав синовии животных.
Эти исследования получили развитие и
продолжение в работах His (1865),
Steinberg (1874), О.Э. Гаген-Торна
(1883) и др.

Благодаря применению
микроскопического, гистохимического,
ультраструктурного методов исследования
удалось изучить закономерности
структурных и обменных процессов в
элементах синовиальных суставов. В конце
1960-х - начале 1970-х годов сложилось
представление о синовиальной системе,
основанное на общности развития и
координации функций синовиальной
оболочки, синовии и суставного хряща.
СЖ является транссудатом крови и по
своему составу имеет значительное
сходство с плазмой, но отличается от нее
меньшим содержанием белков и
присутствием специфического
протеогликана - гиалуроновой кислоты
(ГУК). Различия в белковом составе
плазмы и синовии объясняют барьерными
свойствами синовиальной оболочки,
непроницаемой для белковых молекул с
относительной молекулярной массой более
160000
.

СЖ образуется из трех
источников: содержащий воду
транссудат крови, электролиты,
протеины; продукты секреции
синовиальных клеток покровного
слоя оболочки - ГУК и
протеолитические ферменты;
продукты изнашивания и смены
клеток и основного вещества
синовиальной оболочки - в
основном протеогликаны и
гликопротеиды, постоянно
поступающие в полость сустава в
процессе его нормальной
жизнедеятельности.

В норме СЖ представлена синовиальными покровными клетками

синовиоцитами (34,2-37,8%),
гистиоцитами (8,9-12,5%),
лимфоцитами (37,4-42,6%),
моноцитами (1,8-3,2%),
нейтрофилами (1,2-2,0)
неклассифицированными клетками (8,3-10,1%).

Благодаря специфическим физико-химическим свойствам и составу СЖ выполняет в суставах ряд функций:

метаболическую (обменную),
барьерную (защитную),
протекторную (биомеханическую).

Синовиальную
жидкость из полости
сустава забирают с
диагностической и
лечебной целью путем
пункции в
асептических условиях
без предварительной
местной анестезии, так
как новокаин
разрушает хроматин
клеточных ядер.

Синовиальная жидкость распределяют в 3 пробирки:

в пробирку с антикоагулянтом для
цитологического исследования;
в сухую пробирку для химико-микроскопического
исследования и приготовления нативного
препарата для микроскопии в поляризованном
свете;
в стерильную пробирку для бактериологического
исследования.

10.

Анализ синовиальной жидкости следует проводить
в кратчайшие сроки с момента ее получения.
Ложные результаты могут быть получены при
задержке исследования более чем на 6 ч в
результате следующих изменений:
снижения количества лейкоцитов;
уменьшения количества кристаллов
(пирофосфатадигидрата кальция);
наличия артефактов в виде новообразований
кристаллов.

11. Лабораторная практика

Стандартное лабораторное исследование
синовиальной жидкости включает следующие этапы:
оценку физических свойств (объем, цвет, характер,
вязкость, мутность, pH, муциновый сгусток);
цитологическое исследование (подсчет количества
клеток, микроскопию нативного и окрашенного
препарата);
поляризационную микроскопию нативного
препарата;
химический анализ;
дополнительные исследования (по показаниям).

12. ФИЗИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА

Объем синовиальной жидкости оценивают с помощью градуированной пробирки, цвет и
характер - визуально в проходящем свете по сравнению с дистиллированной водой.
Вязкость определяют гемовискозиметром или по длине нити, тянущейся за стеклянной
палочкой, после ее погружения в пробирку и выражают в условных единицах:
1 - высокая вязкость;
2 - умеренная вязкость;
3 - крайне низкая вязкость (приближающаяся к воде).
Для оценки мутности используют балльную оценку:
1 балл - полная прозрачность;
2 балла - легкая мутность;
3 балла - мутность.
Муциновый сгусток образуется при смешивании синовиальной жидкости с уксусной
кислотой.
В зависимости от состава синовиальной жидкости сгусток может быть плотным или рыхлым.
Для определения pH используют диагностические полоски, обычно применяемые для
исследования мочи. Этот показатель необходимо определять немедленно после получения
синовиальной жидкости (при хранении pH изменяется).

13. ЦИТОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ

Существенное диагностическое значение имеет подсчет клеток в
синовиальной жидкости, который проводят по общепринятым правилам
(ручным или автоматическим способом). В норме цитоз составляет не более
100 клеток в 1 мкл. Хранение синовиальной жидкости в течение нескольких
часов при комнатной температуре ведет к разрушению лейкоцитов.
Микроскопическому исследованию подвергают как нативный, так и
окрашенный препарат. Техника его приготовления стандартная, рекомендуют
использование цитоцентрифуги. Исследование нативного препарата позволяет
ориентировочно оценить содержание клеточных элементов, выявить рагоциты
и неклеточные частицы. В окрашенном препарате подсчитывают цитограмму
(синовиоцитограмму) на 100-200 клеток, предпочтительнее в 2-3 препаратах.
Вопреки известному мнению, что клетки тканевого происхождения в
синовиальной жидкости преобладают над форменными элементами крови,
часто клеточный состав выпота представлен преимущественно нейтрофилами
и лимфоцитами.

14. Пункция синовиальной жидкости

15. Клинико-диагностическое значение

При патологии цвет синовиальной жидкости изменяется в зависимости от
характера суставного выпота (серозный, геморрагический, фибринозный,
смешанный). При вторичных синовитах синовиальной жидкости
приобретает янтарный цвет, а при ревматоидном и псориатическом
артрите цвет варьирует от желтого до зеленого.
Желто-зеленый цвет синовиальной жидкости может быть при
инфекционных и подагрических поражениях суставов. При септическом
или травматическом повреждении сустава синовиальной жидкости
приобретает кровянистый цвет различной степени выраженности. При
пигментированном ворсинчато-узловом синовите суставной выпот имеет
коричнево-красный цвет. Сливкообразный характер синовиальной
жидкости могут придавать жиры при внутрисуставных переломах.
Золотистый оттенок синовиальной жидкости обусловлен присутствием
холестерина.

16. Мутность

характерна для ревматоидного, псориатического
или септического артрита. Вязкость синовиальной
жидкости снижается при ревматизме,
ревматоидном, подагрическом и псориатическом
артрите, болезни Рейтера, артрозах,
анкилозирующем спондилоартрите, в меньшей
степени - при посттравматических артритах.
Рыхлый муциновый сгусток всегда указывает на
наличие воспалительного процесса в суставе
(ревматоидный артрит и другие заболевания),
однако существуют более совершенные его
индикаторы.

17. Изменение pH

синовиальной жидкости не имеет принципиального диагностического
значения, его значение снижается при воспалении. При микроскопии
нативного препарата могут быть обнаружены неклеточные частицы -
экзогенные (шипы растений, фрагменты искусственных кристаллов,
компоненты эндопротезов, суспензии лекарственных препаратов) и
эндогенные (фрагменты хряща, менисков, связок, кристаллы)
компоненты. Появление компонентов эндопротезов в синовиальной
жидкости - прогностический признак развития его нестабильности.
Среди эндогенных компонентов синовиальной жидкости важнейший
элемент, имеющий принципиальное клинико-диагностическое
значение, - кристаллы урата натрия и пирофосфата кальция. В
синовиальной жидкости могут выявляться амилоидные тельца, капли
нейтрального жира, кристаллы холестерина, кальция, гематоидина.

18. Цитоз

Один из наиболее чувствительных диагностических критериев,
позволяющий дифференцировать воспалительные и невоспалительные
заболевания и оценивать динамику патологического процесса.
Повышение количества лейкоцитов в синовиальной жидкости характерно
для острого периода любого воспалительного артрита (например, при
приступе подагры количество лейкоцитов достигает 60х106 клеток в 1
мкл). Умеренный цитоз отмечен при псевдоподагре, синдроме Рейтера,
псориатическом артрите. При инфекционном (бактериальном) артрите
цитоз обычно выше (50х103 клеток в 1 мкл), в таких образцах выявляется
рост микрофлоры. Малый цитоз (менее 1-2х103 клеток в 1 мкл,
преимущественно нейтрофилы) характерен для «механического»
поражения сустава, в том числе для микрокристаллических артритов.

19.

При ревматоидном артрите содержание гранулоцитов
достигает 90%, а количество лимфоцитов снижается менее
10%. Эти изменения более выражены при серопозитивном
варианте ревматоидного артрита. При токсикоаллергических синовитах, синовиальной форме
туберкулеза или артритах паранеопластической природы в
синовиальной жидкости преобладают мононуклеары.
Наличие рагоцитов в значительном количестве характерно
для ревматоидного артрита. Единичные рагоциты могут
встречаться и при других поражениях сустава
(септическом артрите и воспалительных артропатиях). LEклетки встречаются в синовиальной жидкости при
системной красной волчанке примерно у 50% больных.
Атипичные клетки в синовиальной жидкости
регистрируют сравнительно редко.

20. Бактериоскопия

имеет только вспомогательное и часто очень ограниченное значение,
так как при подозрении на микробный характер воспаления
необходимо стандартное бактериологическое исследование. Однако
при микроскопии мазка синовиальной жидкости могут быть
обнаружены гонококки при гонококковом артрите. Наличие в мазках
грамположительных кокков, объединенных в гроздья, позволяет
предположить стафилококковую этиологию инфекции. Другими
возбудителями инфекционных артритов могут быть стрептококки,
грамотрицательные палочки. При грибковых артритах (кандидамикозе,
аспергиллезе) в синовиальной жидкости выявляется мицелий грибка.
Уровень белка в синовиальной жидкости несколько повышается при
дегенеративных заболеваниях и посттравматических артритах. Более
выраженное увеличение содержания общего белка наблюдается при
воспалительных заболеваниях (например, при ревматоидном артрите
- до 70 г/л), часто при этом изменяется и его качественный состав

21. Уровень глюкозы.

Это более специфичный, но менее чувствительный индикатор
воспалительных изменений в суставе, так как уровень глюкозы
в синовиальной жидкости заметно снижается при
воспалительных артропатиях. Именно поэтому в последние
годы для экспресс-диагностики гнойных (септических)
артритов определяют уровень лактата в синовиальной
жидкости. Изменения состава синовиальной жидкости
позволяют установить воспалительную природу заболевания,
приведшего к образованию суставного выпота. Нейтрофильный
лейкоцитоз, увеличение концентрации белка и лактата, а также
снижение уровня глюкозы - важные признаки
воспалительного процесса в суставе. Иммунологические
методы также позволяют дифференцировать воспалительные и
невоспалительные заболевания суставов. Аутоантитела
появляются в синовиальной жидкости раньше, чем в плазме
крови.

22.

Содержание белка в синовиальной жидкости
заметно меньше нежели в крови и составляет (1020г/л). При остеоартрозе и посттравматических
артритах значимого повышения протеина не
обнаруживается. При воспалительных артропатиях
уровень белка в синовиальной жидкости
повышается более 20 г/л. Вместе с этим можно
отметить повышение уровня лактатдегидрогиназы,
острофазовых показателей при воспалительных
заболеваниях суставов (чаще С-реактивного
белка).

Анализ синовиальной жидкости — лабораторное исследование скопившегося в полости сустава выпота. Процедура взятия суставной жидкости для анализа называется .

Сустав построен из двух (и более) костей покрытых в месте соприкосновения хрящом. Снаружи окутан прочной и герметичной синовиальной сумкой, усиленной связками и сухожилиями. Изнутри синовиальную сумку выстилают клетки, вырабатывающие синовиальную жидкость. Синовиальная жидкость заполняет все полости и щели в суставе.

Благодаря суставам тело может двигаться как единое целое, а суставная жидкость придает движениям плавность.

Анализ суставной/синовиальной жидкости т ак же важен в диагностике заболеваний суставов, как и общий анализ мочи для выявления почечной патологии или общий анализ крови в диагностике малокровия.

Синовиальная жидкость — это

Синовиальная или суставная жидкость или синовий — это вязкая неньютоновская жидкость, находится в полости всех суставов. По консистенции похожа на яичный белок (откуда и получила свое латинское название), а по химическому составу аналогична плазме .

Суставная жидкость в 20 раз гуще крови!

Состав

фибробласты в синовиальной оболочке вырабатывают гиалуроновую кислоту , (общее количество 3-4 мг/л)
любрицин (протеогликан 4) — смазывает и облегчает скольжение суставных поверхностей
интерстициальная жидкость — профильтрованная плазма крови
ферменты — протеиназы и коллагеназы
белки — часть поступает из крови, часть синтезируется непосредственно синовиальной оболочкой
, и прочие компоненты
клетки — минимальное количество и , единичные для удаления микробов и стареющих клеток синовиальной оболочки в процессе износа сустава

Функции

Суставная жидкость — это плавающая смазка между хрящами в суставе. Становится плотнее при активном движении и жиже в состоянии покоя. Амортизирует и снижает силу удара при беге и прыжках. Поставляет питательные вещества хрящу и удаляет продукты обмена.

Быстро реагирует на все изменения в суставе, выполняя роль индикатора патологического процесса.

Показания

Лабораторное исследование суставной жидкости необходимо для диагностики заболеваний суставов неясного происхождения, особенно для дифференциальной диагностики септического и подагрического артритов, острого моноартрита.

Симптомы-показания к пункции сустава и анализу синовиальной жидкости:

выпот в суставе
острая или хроническая хромота
рука или нога не выполняют функцию опоры из-за боли в суставе
сочетание с повышением температуры тела, деформацией сустава, его покраснением и отеком
значительная

Артроцентез

Артроцентез или пункция сустава — это процедура удаления жидкости из полости сустава для последующего лабораторного анализа или же с целью лечения — уменьшения напряжения и боли, введения лекарственных препаратов.

Артроцентез при артрографии — в сустав вводят контрастное вещество и делают серию рентген-снимков. Один из вариантов диагностического применения артроцентеза. Вытеснена более информативными КТ и МРТ.

Артроцентез практически не имеет противопоказаний. Относительное препятствие к пункции — инфекция кожных покровов в месте будущей пункции, продолжающеея кровотечение в сустав, общее тяжелое состояние. Н аиболее часто пунктируют коленный сустав, затем по мере снижения — плечевой, локтевой, лучезапястный, голеностопный, височно-нижнечелюстной.

Специальная подготовка не нужна. Желательно воздержаться от приема пищи за 8-10 часов до процедуры.

Перед пункцией сустава необходимо сообщить врачу о наличии аллергии на любые лекарственные препараты, особенно местные анестетики и йод. При приеме лекарств разжижающих кровь (аспирин, клопидогрель, варфарин) может потребоваться их отмена на несколько дней перед манипуляцией. При необходимости предварительно делают , анализ и .

Выполнение

Кожу в месте будущего прокола дезинфицируют и обезболивают. Врач вводит большую пункционную иглу через кожу и синовиальную оболочку в полость сустава.В стерильный шприц аспирирует суставную жидкость.

Процедура длится несколько минут, после чего на место пункции накладывают давящую повязку.

Шприц с синовиальной жидкостью немедленно отправляют для исследования в лабораторию. Реже — переливают в пробирку с антиагрегантом (гепарином).

Если планируется исследование глюкозы в синовиальной жидкости, то перед артроцентезом берут образец крови, чтоб установить уровень гликемии.

Осложнения

инфицирование сустава — крайне редко, риск выше при повторных пункциях
кровотечение в полость сустава
боль, повреждение хряща или нерва, разрыв связки

Синовиальная жидкость в норме

Синовиальной жидкости в норме очень мало. В коленном суставе от 0,5 до 4 мл, а в плечевом — до 3 мл. Она светло-желтая, прозрачная, вязкая, без примесей.

Что исследуют?

физические свойства — количество, цвет, прозрачность, вязкость, рН (кислотность)
химические параметры — глюкоза, мочевая кислота,
микроскопия окрашенного мазка — общее количество , синовиальной жидкости, атипичные клетки
микроскопия в поляризационном микроскопе — для выявления кристаллов
микроскопия мазка по Грамму и бакпосев на питательные среды — для идентификации возбудителя и определения его чувствительности к антибиотикам

Образование муцинового сгустка в уксусной кислоте не проверяют. Тест малоинформативен.

Дополнительно в суставной жидкости исследуют , комплемент, ферменты, иммуноглобулины, гормоны.

Факторы комплемента повышены при ревматоидном артрите и системной красной волчанке.

Физические свойства

В норме синовиальная жидкость прозрачна , светло-соломенного цвета. При воспалении приобретает различные оттенки мутно-желтого и зеленого. Грязно-белый цвет характерен для кристалл-индуцированной артропатии. Красный, коричневый и оранжевый указывают на кровотечение в сустав различного срока давности, что бывает при нарушении свертываемости крови, травме, новообразованиях, туберкулезном артрите, лечении антикоагулянтами.

Чем активнее воспаление в суставе, тем меньше прозрачность.

Для определения вязкости в каплю синовиальной жидкости погружают и вынимают иглу. В норме длинна образовавшегося усика-ниточки больше 5 см. При воспалении — меньше 5 см.

Вязкость остается в пределах нормы при травматическом артрите, системной красной волчанке, остеоартрозе и пигментном виллонодулярном синовиите. Снижается при острой ревматической лихорадке, ревматоидном артрите, подагре, пиогенном и туберкулезном артритах.

Рисовые тельца — это разрушенная суставная оболочка, покрытая сгустками фибрина, бывает при ревматоидном артрите.

Синовиальная жидкость сворачивается при наличии в ней , попавшего при пункции или предыдущей травме. Сгустки мешают подсчету клеток, поэтому суставную жидкость переливают в пробирку с гепарином.

рН (кислотность) снижается при воспалении.

Химический анализ

В здоровой синовиальной жидкости нет белков с высокой молекулярной массой (фибриноген, альфа- и бета-2-макроглобулины), а общее количество белка равно 10-30 г/л (или треть от уровня в крови).

Причины повышения белка: болезнь Бехтерева, артриты, артропатия при болезни Крона и язвенном колите, подагра, псориатический артрит, синдром Рейтера.

Оценить уровень глюкозы в синовии можно только при наличии данных о ее концентрации в крови. По этой причине артроцентез проводят натще, предварительно взяв образец крови.

В норме синовиальная жидкость содержит на 0,5 ммоль/л меньше глюкозы, чем в крови. Инфекционные заболевания суставов снижают глюкозу на 1,1-5,5 ммоль/л по сравнению с кровью.

Уровень мочевой кислоты в синовиальной жидкости 356-475 мкмоль/л, повышается при подагре.

Молочную кислоту (лактат) исследуют редко, в норме до 2,7 ммоль/л, а при септическом артрите — повышается до 55,5 ммоль/л.

Лактатдегидрогераза (ЛДГ ) повышена при ревматоидном артрите, инфекционном артрите, подагре.

Микроскопия

При просмотре мазкапод микроскопом считают количество и вид клеток и кристаллов в суставной жидкости.

Наличие кристаллов в суставной жидкости проверяют в поляризационном микроскопе. В норме их нет.

Виды кристаллов в синовиальной жидкости при заболеваниях

урат натрия — подагра
пирофосфат кальция — псевдоподагра
кортикостероиды — после инъекций стероидов в полость сустава
холестерол — остеоартроз и ревматоидный артрит
гидроксиапатит — кальцифицирующий периартрит, остеоартроз, воспалительный артрит

Микробиологическое исследование

Бакпосев синовиальной жидкости проводят непосредственно после взятия материала.

Расшифровка результата

Результаты исследования синовиальной жидкости сгруппированы следующим образом:

нормальная — все показатели соответствуют норме
воспалительная
не воспалительная
септическая
геморрагическая

Невоспалительная синовиальная жидкость

остеоартроз и дегенеративные заболевания суставов
травматический артрит
хроническая подагра или псевдоподагра
склеродермия
полимиозит
системная красная волчанка
узловая эритема
нейропатическая артропатия (сустав Шарко), например, при сахарном диабете
серповидно-клеточная анемия
гемохроматоз
акромегалия
амилоидоз

Воспалительная суставная жидкость

ревматоидный артрит
реактивный артрит
псориатический артрит
острая ревматическая лихорадка
острая подагра или псевдоподагра
склеродермия
полимиозит
системная красная волчанки
болезнь Бехтерева
воспалительные заболевания кишечника
вирусная, грибковая, бактериальная инфекция в суставе, болезнь Лайма
острый приступ подагры

Септические изменения

гнойная бактериальная инфекция
септический артрит

Геморрагическая суставная жидкость

травма
опухоли
гемофилия и другие коагулопатии — повышенная кровоточивость при дефиците одного из факторов свертывания
тяжелый дефицит витамина С (цинга)
синдром Элерса-Данлоса
нейропатическая артропатия

Пункция сустава и анализ синовиальной жидкости was last modified: Декабрь 1st, 2017 by Мария Бодян

Стандартизованная аналитическая технология клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости.

1. Цель исследования

Технология «Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости» выполняется с целью диагностики заболеваний суставов, а также для мониторинга течения заболевания и эффективности лечения .

Исследование синовиальной жидкости имеет большое значение при:

Все сотрудники должны выполнять инструкции и правила техники безопасности, изложенные в технических паспортах к электрическим приборам, используемым в технологии (фотометры, микроскопы, центрифуги); персонал, работающий с реактивами, должен быть обучен обращению с ними, использовать средства персональной защиты, соблюдать правила личной гигиены.

Для предупреждения пожаров необходимо соблюдать правила пожарной безопасности в соответствии с действующими нормативными документами.

Таким образом, необходимо строго придерживаться всех пунктов инструкций по технике безопасности, пожарной безопасности и биологической безопасности.

2.3 Условия выполнения технологии клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости и функциональное назначение

Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости выполняется в клинико-диагностических лабораториях специализированных амбулаторно-поликлинических и стационарных учреждений здравоохранения (ревматологических и артрологических центров).

Функциональное назначение услуги: проводится с целью диагностики болезней суставов, наблюдения за течением и прогрессированием болезни и эффективностью лечения.

2.4.Материальные ресурсы, необходимые для выполнения технологии: приборы, средства измерения, лабораторное оборудование

2.4.1. Микроскоп бинокулярный с иммерсией и встроенным осветителем.

2.4.2.Микроскоп поляризационный.

2.4.3. Центрифуга лабораторная (с охлаждением: 5-8 оС).

Для приготовления осадка синовиальной жидкости должны использоваться центрифуги, обеспечивающие 1000 об/мин. При использовании центрифуги необходимо строго следовать инструкции производителя.

2.4.4. Счетчик-калькулятор для подсчета лейкоцитарной формулы крови (для подсчета синовиоцитогрммы).

2.4.5. Штатив для пробирок.

2.4.6. Контейнеры и кюветы для окраски и фиксации мазков.

2.4.7. Приспособление для высушивания мазков.

2.4.8. Стеклянные (пластиковые) изделия.

2.4.8.1. Центрифужные пробирки (10 мл).

Для макроскопического изучения СЖ лучше использовать прозрачные стеклянные пробирки. Для центрифугирования СЖ используются центрифужные пробирки из пластика, которые должны иметь коническую форму для концентрирования осадка, градуировку для определения количества полученной при пункции сустава синовиальной жидкости и закрываться крышками для уменьшения опасности разбрызгивания. Пробирки должны быть химически чистыми и маркированными для правильной идентификации пациента. Возможно применение вакуумных пробирок.

2.4.8.2. Камера Горяева.

2.4.8.3. Стекла предметные и стекла покровные для микроскопии нативного препарата.

Стекло предметное (желательно с матовым полем для маркировки, размер 26 х 76 х 1.1 мм.) для микроскопии окрашенного препарата.

Стекло предметное со шлифованным краем (размер 26 х 76 х1.1 мм.) или шпатель из пластика для приготовления мазка.

2.4.8.4. Пипетки для переноса синовиальной жидкости. В настоящее время используют пластиковые пастеровские пипетки с тонко оттянутым концом и баллончиком, предназначенные для стандартизации объема капли осадка и уменьшения риска биологической опасности, связанной с ресуспендированием или переносом синовиальной жидкости. Они должны быть сухими и химически чистыми.

2.4.8.5 Стеклянные палочки.

2.5 Реактивы

2.5.1 Растворы фиксаторов-красителей и другие необходимые реактивы для приготовления окрашенных мазков (см. ГОСТ Р Цитологическое исследование пунктата костного мозга);

2.5.2 раствор уксусной кислоты 5%;

2.5.3 ЭДТА (двукалиевая или двунатриевая соль).

2.5.4. раствор ализаринового красного 2%.

2.6 Прочий расходуемый материал

2.6.1. Перчатки резиновые.

2.6.2. Дезинфицирующие средства.

3. Характеристика методики выполнения технологии исследования синовиальной жидкости

3.1 Получение образцов синовиальной жидкости

Для правильного проведения преаналитического этапа необходимо соблюдать требования стандарта ГОСТ Р 53079.4-2008. .

Пункцию сустава проводит врач-клиницист.

Правила хранения и транспортировки образцов синовиальной жидкости изложены в

приложении А.

При пункции сустава СЖ собирают в стерильные центрифужные пробирки (2-3 или более, в зависимости от количества полученной СЖ) и немедленно передают в клинико-диагностическую лабораторию. Одну из пробирок (или более, в зависимости от числа полученных пробирок) направляют в микробиологическую лабораторию (отдел) для проведения микробиологических исследований, а остальные используют для проведения клинического лабораторного исследования СЖ (определения физико-химических свойств и микроскопического исследования нативных и окрашенных азур-эозином препаратов с подсчетом синовиоцитограммы, подсчета клеточных элементов в 1мкл (цитоз), а также выполнения биохимических и иммунологических исследований. Биохимические и иммунологические исследования проводят в супернатанте после центрифугирования СЖ, а осадок используют для поиска кристаллов в нативном препарате с применением поляризационного микроскопа, а также для подсчета синовиоцитограммы в окрашенном мазке. Для подсчета клеток можно собирать СЖ в пробирку, содержащую антикоагулянт (двунатриевую или двукалиевую соль ЭДТА), выпускаются специальные вакуумные пробирки с К2ЭДТА, которые могут быть использованы для взятия СЖ.

При наличии соответствующих показаний (подозрение на наличие клеток новообразований) окрашенный мазок направляется в цитологическую лабораторию.

3.2 Идентификация образца

В направлении на исследование должна быть включена следующая информация: фамилия и инициалы пациента, возраст или дата рождения, пол, отделение медицинского учреждения и палата (в стационаре), номер медицинской карты (идентификационный номер), диагноз, дата и время сбора образца синовиальной жидкости, время доставки образца в лабораторию. Должны быть перечислены все показатели, которые требуется определить. При необходимости указать лекарства, вводимые в пунктируемый сустав.

Немаркированные или неправильно маркированные образцы не пригодны для исследования, о чем необходимо уведомить клинициста, назначившего анализ.

3.3 Приемлемость образца

Так как точность результатов исследования синовиальной жидкости во многом зависит от качества доставленного образца, необходимо неукоснительно следовать правилам хранения и транспортировки синовиальной жидкости (приложение А).

После доставки образца синовиальной жидкости в лабораторию сотрудник лаборатории, принимающий материал, должен проверить правильность оформления направления на анализ, маркировку посуды (код или фамилия больного и другие данные должны быть идентичны данным, указанным в бланке-направлении) и зарегистрировать поступивший материал.

Синовиальная жидкость, собранная в пробирку с К2 ЭДТА, должна исследоваться в течение также 30 мин., а при хранении в холодильнике (температура 3-50С) – не позднее, чем через 24 часа (только для проведения исследования окрашенных мазков).

П р и м е ч а н и е ─ Длительное хранение супернатанта СЖ допускается при температуре -70О С для биохимических и иммунологических исследований.

Отсрочка анализа и использование охлаждения образца отмечаются в бланке ответа.

Перед исследованием образцы должны быть доведены до комнатной температуры.

3.4 Макроскопическая оценка и исследование физико-химических свойств синовиальной жидкости

3.4.1.Количество синовиальной жидкости в норме варьирует от 0,2 до 2,0 мл (в зависимости от величины сустава). При различных заболеваниях суставов количество СЖ может достигать 100 мл и более.

3.4.2. Цвет синовиальной жидкости.

Цвет синовиальной жидкости в норме – светло-желтый

П р и м е ч а н и е ─Светло-желтая или желтая окраска синовиальной жидкости наблюдается при дегенеративных заболеваниях суставов; кровянистая – при травматических артритах ; для воспалительных болезней суставов (ревматоидный артрит (РА), реактивный артрит (РеА), анкилозирующий спондилоартрит, псориатический артрит) характерны разные оттенки желтого и коричневого цвета (светло-желтого, желтого, лимонного, светло-коричневого, бурого, ягнтарного или оранжевого); при подагре наблюдается светло-желтая, зеленовато-желтая, молочно-белая, молочно-желтая, розовато-белая окраска СЖ; при пирофосфатных артритах и хондрокальцинозах – желтая или молочно-желтая, при септических артритах – серовато-желтая, зеленовато-желтая или кровянистая.

3.4.3. Прозрачность синовиальной жидкости.

Нормальная синовиальная жидкость абсолютно прозрачна. Помутнение обычно обусловлено увеличением числа клеточных элементов, наличием кристаллов или микроорганизмов.

Оценка прозрачности.

Различают 4 степени прозрачности: прозрачная, полупрозрачная, умеренно-мутная и интенсивно-мутная.

П р и м е ч а н и е – при дегенеративных заболеваниях суставов (остеоартроз) СЖ прозрачная и полупрозрачная; при воспалительных заболеваниях (РА, серонегативные артриты, подагра, пирофосфатные артриты) – полупрозрачная, умеренно-мутная или интенсивно-мутная; при септических артритах – интенсивно-мутная, густая.

3.4.4. Наличие осадка.

В норме в СЖ осадка нет. Он появляется только при патологии и, как правило, представляет собой обрывки клеточных мембран, фибриновыъх нитей, фрагменты тканей, образующиеся в результате деструкции хряща и синовиальной оболочки, а также кристаллы.

П р и м е ч а н и е ─ При дегенеративных заболеваниях суставов в СЖ обнаруживают аморфный осадок при амилоидозе. При воспалительных заболеваниях суставов осадок обнаруживают практически всегда. В СЖ больных РА, особенно часто у детей с ювенильным РА, можно наблюдать зернистый осадок, напоминающий рисовые зерна или «рисовые тельца», образованные из микроскопических фрагментов насыщенной фибрином некротической синовиальной оболочки. Подобный осадок может быть показателем высокой воспалительной активности процесса.

3.4.5. Вязкость

Важнейшей особенностью СЖ, отличающей ее от других биологических жидкостей, является присутствие гиалуроновой кислоты – высокомолекулярного полимера. Именно гиалуроновая кислота, обладая высокой вязкостью, главным образом обеспечивает выполнение основных функций СЖ. Существует прямая зависимость между содержанием, молекулярной массой гиалуроновой кислоты и вязкостью СЖ.

Методы определения вязкости.

Количественные характеристики вязкости СЖ определяют с помощью вискозиметра.

В рутинных исследованиях обычно используют метод со стеклянной палочкой:

стеклянная палочка опускается в СЖ, а затем вынимается. Вязкость оценивается по длине муциновых нитей, различают три степени вязкости:

при длине нити выше 5 см – вязкость высокая, до 5 см – средняя, менее 1 см – низкая.

Возможно выражение вязкости в бальных единицах: 1 - высокая, 2 - средняя, 3 - низкая. В норме вязкость СЖ высокая.

Интенсивность вязкости зависит от концентрации кристаллов, степени полимеризации гиалуроновой кислоты и температуры.

П р и м е ч а н и е ─ Использование инструментальных методов с применением различных вискозиметров требует (кроме наличия прибора) целого ряда дополнительных операций и в связи с этим значительных затрат времени, не давая при этом какой-либо принципиально новой информации по сравнению с доступным лабораторным тестом.

4.4.6. Определениение плотности муцинового сгустка в синовиальной жидкости.

Гиалуроновая кислота в СЖ существует в комплексе с белками, известном как муцин. Определение муцинового сгустка имеет большое диагностическое значение при воспалительных заболеваниях. Тест на муцин в синовиальной жидкости хорошо коррелирует с вязкостью.

Методы исследования плотности муцинового сгустка.

Принцип метода: при воздействии на СЖ уксусной кислоты образуется муциновый сгусток.

Ход определения:

В пробирку, содержащую 3 мл 5% раствора уксусной кислоты (СН3СООН), добавляют каплю СЖ. Интенсивно встряхивают содержимое пробирки в течение 1 мин., образуется осадок. Различают 4 степени плотности осадка: плотный (осадок выглядит плотным комком), умеренно плотный (вид разветвленной, но не распавшейся структуры), умеренно рыхлый и рыхлый – в большей или меньшей степени распадается на мельчайшие частицы. Образование плотного муцинового сгустка свидетельствует о значительном содержании муцина.

В норме осадок плотный.

П р и м е ч а н и е 1 ─ При невоспалительных артропатиях муциновый сгусток как правило – плотный или умеренно плотный.. При воспалительных заболеваниях суставов - умеренно рыхлый и рыхлый.

П р и м е ч а н и е 2 ─ Определение вязкости и плотности муцинового сгустка имеет важное значение для дифференциации «невоспалительного» и воспалительного характера процесса в суставе. Эти методы могут быть взаимоконтролирующими: показатели одного метода строго соответствуют показателям другого. Высокая вязкость соответствует плотному, средняя – умеренно плотному, низкая – умеренно рыхлому и рыхлому муциновому сгустку.

3.5 Микроскопическое исследование синовиальной жидкости

3.5.1.Требования к образцу синовиальной жидкости для микроскопического исследования.

Перед проведением микроскопического исследования врач должен иметь информацию о времени получения синовиальной жидкости и результатах оценки физико-химических свойств.

В настоящее время для взятия биологических жидкостей выпускаются вакуумные пробирки, содержащие антикоагулянт (К2ЭДТА), который является также консервантом для клеточных элементов и не влияет на их морфологию .

П р и м е ч а н и е 1 ─ Синовиальную жидкость, стабилизированную К2ЭДТА нельзя использовать для обнаружения рагоцитов.

Проводится три вида микроскопического исследования:

подсчет клеток в нативной синовиальной жидкости в камере Горяева (цитоз), исследование нативного препарата и окрашенного азур-эозином препарата с подсчетом синовиоцитограммы.

3.5.2 Подсчет количества клеточных элементов в 1 мкл синовиальной жидкости камере Горяева (определение цитоза).

Ход исследования.:

Исследование проводят в нативной или стабилизированной К2ЭДТА синовиальной жидкости.

В пробирку налить 0,4 мл изотонического или гипотонического раствора NaCI.

Суспензию профильтровать и хранить в холодильнике в склянке из темного стекла. Непосредственно перед исследованием необходимое количество краски профильтровать через миллипоровый фильтр.

20 мкл краски смешать с равным объемом СЖ или осадка, полученного после центрифугирования. Приготовить нативный препарат и микроскопировать лучше в поляризационном микроскопе: кристаллы овоидной формы, 2-3 мкм в диаметре, насыщенной красной окраски с розовым ореолом.

П р и м е ч а н и е 4 ─ Эти кристаллы обнаруживаются при гидроксиапатитной артропатии.

В синовиальной жидкости могут быть также обнаружены кристаллы оксалата кальция, холестерина, липидов, Шарко-Лейдена и др.

П р и м е ч а н и е 5 ─ Кристаллы оксалата кальция (С2СаО4 · Н2О) имеют обычно кубическую форму но могут образовывать бесцветные, блестящие, сильно преломляющие свет кристаллы различной величины в форме октаэдров или прямоугольников, напоминающих почтовые конверты. Иногда встречаются кристаллы оксалата кальция округлой формы и с перехватом, напоминающие песочные часы, гимнастические гири или банты (С2СаО4 · 2Н2О). Эти кристаллы могут фагоцитироваться полиморфоядерными лейкоцитами (нейтрофилами).

П р и м е ч а н и е 6 ─ Жидкие кристаллы липидов представлены на темном поле в виде черных мальтийских крестов, делящих каждую каплю липида на четыре белых блестящих сегмента. Капли нейтрального жира не обладают эффектом двулучевого преломления света.

Кристаллы холестерина, оксалата натрия и жидкие кристаллы липидов не специфичны для какого-либо определенного суставного заболевания и могут встречаться при различных артропатиях, отражая нарушение метаболизма.

П р и м е ч а н и е 7 ─ В СЖ можно обнаружить амилоидные глыбки. Это бесцветные образования округлой формы, слоистого строения, напоминающего спил дерева, с характерным блеском. Идентифицируются в нативных препаратах при увеличении х400, а также с иммерсией при увеличении х1000. Амилоид можно определить в нативной СЖ, окрашенной красным конго. Полученный препарат можно смотреть как в световом, так и в поляризационном микроскопе.

Амилоидные глыбки находят при заболеваниях, слпровождающихся амилоидной артропатией.

Кристаллы гематоидина.

Кристаллы гематоидина образуются при распаде гемоглобина в гематомах без доступа кислорода. Это слегка вытянутые в длину ромбики и/или иглы золотисто-желтого цвета. Кристаллы гематоидина хорошо различимы как в нативном, так и в окрашенном азур-эозином препаратах. Так как обычно в СЖ эти кристаллы достаточно мелкие, нативные препараты рекомендуется микроскопировать на иммерсии. В очаге воспаления эти кристаллы могут быть фагоцитированы макрофагами или располагаться на поверхности клеточных элементов.

П р и м е ч а н и е 8 ─ При травме и внутрисуставном кровотечении в полости сустава создаются условия, при которых могут образовываться кристаллы гематоидина.

Кристаллы Шарко-Лейдена.

Кристаллы Шарко-Лейдена по форме напоминают стрелку компаса или резко вытянутый в длину ромб. Обычно кристаллы Шарко-Лейдена расположены на фоне детрита или в сочетании с большим количеством эозинофилов и образуются при распаде эозинофилов из эозинофильной зернистости, эти кристаллы можно обнаружить в СЖ больных, страдающих аллергическим синовитом.

Кристаллы лекарственных препаратов

Стероиды. Внутрисуставные инъекции стероидных препаратов приводят к их кристаллизации внутри суставов, где могут сохраняться до 10 недель. Обнаружение этих кристаллов при микроскопическом исследовании нативных препаратов и последующая неправильная дифференцировка может привести к ошибочным заключениям.

Неклеточные и некристаллические элементы в СЖ.

В СЖ могут быть обнаружены фрагменты хряща и поврежденных связок. Фрагменты хряща в нативном препарате можно распознать по характерному шелковистому блеску. Обнаруживают также фрагменты хряща, содержащие кластеры хондроцитов и фрагменты мениска, которые представлены волнистыми коллагеновыми волокнами и также хондроцитами; фрагменты связок представлены длинными тонкими фибриллами и параллельно расположенными нитями коллагена

П р и м е ч а н и е 9 ─ Встречаются наиболее часто в СЖ после травмы коленного сустава.

П р и м е ч а н и е 10 ─ Несмотря на высокую чувствительность метода поляризационной микроскопии, при его использовании возможны серьезные ошибки, которые обычно возникают из-за недостаточно высокой разрешающей способности конкретного микроскопа, наличия посторонних кристаллоподобных примесей и повреждений на предметном или покровном стекле. Микроскопист должен учитывать возможность помех и хорошо знать принципы распознавания кристаллов.

3.5.5. Микроскопическое исследование препаратов синовиальной жидкости, окрашенных азур-эозином (с подсчетом синовиоцитограммы).

Приготовление мазков СЖ и методы их окраски (п.5.5.2).

Клеточный состав синовиальной жидкости (синовиоцитограмма).

Определение клеточного состава СЖ – важнейший этап ее исследования, позволяющий уточнить диагноз, определить степень воспалительной активности процесса и прогноз. Определение количественного распределения клеток (синовиоцитограмма) является важнейшим показателем для дифференциальной диагностики болезней суставов. Подсчет процентного соотношения клеток проводят так же, как и подсчет лейкоцитарной формулы крови. (подсчитывают 100 клеток в мазке и рассчитывают процентное содержание каждого вида клеток).

В норме в СЖ преобладают клетки тканевого происхождения (синовиоциты и гистиоциты) – до 65%. Лимфоциты составляют около 30%, а моноциты и нейтрофилы – 1-2%.

Клетки крови в СЖ.

Нейтрофилы (полиморфноядерные лейкоциты).

Нейтрофилы в 1,5-2 раза больше эритроцита, по диаметру (14-16 мкм). Соотношение ядра и цитоплазмы сдвинуто в сторону ядра. Цитоплазма сиреневого цвета, заполнена мелкой, пылевидной зернистостью, имеющей окраску ядра клетки. Ядра состоят из 3-4 сегментов, с четким делением на окси - и базихроматин. При дистрофии количество сегментов в нейтрофилах резко увеличивается до 5-7 (гиперсегментация). При апоптозе в нейтрофиле фрагменты ядра сливаются в одну или две гиперхромные гомогенные, бесструктурные массы правильной круглой формы.

В нормальной СЖ количество нейтрофилов не превышает в формуле 1-2%.

П р и м е ч а н и е 1 ─ При ревматоидном артрите содержание нейтрофилов достигает 90%, а количество лимфоцитов снижается до 10%. Аналогичная картина отмечается при анкилозирующем спондилоартрите. При воспалительных заболеваниях и внутрисуставном кровотечении нейтрофилы составляют в формуле СЖ 60-80%, а при септической артропатии - более 95%.

Лимфоциты.

Это клетки до 12 мкм в диаметре. Соотношение цитоплазмы и ядра сдвинуто в сторону ядра (9: 1). Ядро грубо глыбчатой структуры, базофильная цитоплазма узким ободком окружает ядро, иногда просматривается зона просветления вокруг ядра.

В нормальной СЖ количество лимфоцитов колеблется от 8 до 30%.

П р и м е ч а н и е 2 ─ При воспалительных заболеваниях преобладают нейтрофилы, а при дегенеративных – лимфоциты. При дегенеративных заболеваниях суставов и травматическом артрите в СЖ содержание лимфоцитов достигает 85%. Преобладают лимфоциты в формуле также при токсико-аллергических синовитах и синовиальной форме туберкулеза. При артритах вирусной этиологии, например вызванной вирусом HTLV-1 - появляются атипичные лимфоциты, количество которых достигает 20%.

Моноциты.

П р и м е ч а н и е 3 ─ Моноциты встречаются при различных суставных артропатиях, в том числе при вирусных артритах и при моноцитарных артритах, а также при повреждении имплантационных протезов.

Кроме этих клеток в СЖ (при патологии) могут быть обнаружены в небольшом количестве другие клетки крови: эозинофилы, базофилы, плазматические клетки.

П р и м е ч а н и е 4─ Эозинофилы встречаются в СЖ крайне редко, идентичны эозинофилам периферической крови.

П р и м е ч а н и е 5─ Базофилы встречаются в незначительном количестве при воспалительных артритах, серонегативной артропатии, невоспалительных артропатиях, связанных с травмой.

П р и м е ч а н и е 6 ─ Плазматические клетки встречаются в СЖ при воспалительных артропатиях. Обнаружение плазматических клеток характерно, в частности, для ревматоидного артрита, т. е. для длительного вяло текущего воспалительного процесса.

Тканевые клетки в СЖ.

Синовиоциты.

Эти клетки относятся к однослойному уплощенному эпителию, покрывающему синовиальные оболочки суставов. По своей морфологии они идентичны мезотелиальным клеткам. Синовиациты - эпителиальные клетки диаметром 18-25 мкм, с различным ядерно/цитоплазматическим соотношением. Они содержат центрально или эксцентрично расположенные ядра круглой или овальной формы, мелко-глыбчатой или петлистой структуры, окруженные широким ободком базофильной цитоплазмы, иногда с «оборочкой» по периферии. Цитоплазма в перинуклеарной зоне у некоторых синовиоцитов содержит мелкую зернистость. Синовиоциты отторгаются от поверхности синовиальной оболочки сустава и обнаруживаются в СЖ при артропатиях. Синовиальные клетки могут содержать 2 и более ядер (многоядерные).

Различают три вида синовиоцитов:

тип А – макрофагальные синовиоциты, способные к фагоцитозу;

тип В – синовиальные фибробласты, способные к синтезу и секреции гиалуроновой кислоты;

тип АВ – переходные формы клеток, сочетающие эти оба свойства.

Гистиоциты.

Тканевые макрофаги – клетки размером мкм с округлым или моноцитоидным компактным ядром, окруженным мелкозернистой или не содержащей зернистости цитоплазмой.

П р и м е ч а н и е 7 ─ Гистиоциты всегда присутствуют в СЖ при воспалительных процессах.

П р и м е ч а н и е 8 ─ В СЖ могут быть обнаружены многоядерные клетки, которые представляют собой синовиоциты или плазматические клетки и имеют такое же значение как и мононуклеарные варианты этих клеток.

П р и м е ч а н и е 9 ─ Обнаружение LЕ –клеток, содержащих в цитоплазме включения гомогенезированного ядерного материала, в СЖ в отличие от периферической крови, не является прямым указанием на СКВ. Однако сочетание LE-клеток с большим количеством лимфоцитов в СЖ позволяет заподозрить наличие у больного СКВ.

П р и м е ч а н и е 10 ─ Клетки в митозе.

Митотические фигуры не имеют диагностического значения. Синовиоциты в состоянии деления подтверждают процесс пролифераии клеток выстилки суставной сумки.

Недифференцируемые клетки.

Недифференцируемые клетки отмечаются практически во всех синовиограммах.

В тонких, хорошо сделанных мазках СЖ, фиксированных фиксаторами или фиксаторами- красителями и докрашенных азур-эозином, все клеточные элементы поддаются дифференцировке. Только в толстых мазках, приготовленных неопытной рукой лаборанта из вязкой, гиперклеточной и предварительно неразведенной СЖ, встречаются клетки, неподдающиеся дифференцированию. Это могут быть любые клеточные элементы - и тканевые, и кровяные. В таких препаратах практически невозможно обнаружить кристаллы и микроорганизмы.

4. Регистрация результатов анализа синовиальной жидкости

Каждый сотрудник лаборатории должен использовать одни и те же формы (бланки результатов анализов) для сообщения полученных результатов. Форма бланка должна содержать название лаборатории и медицинский организации; информацию о пациенте, достаточную для его идентификации; название биологического материала и всех исследуемых показателей; дату получения пробы и, если это необходимо, время получения; результаты исследования; референтные интервалы; фамилию и подпись сотрудника, выполнившего исследование. Порядок выдачи результатов должен быть определен инструкцией, утвержденной руководителем медицинской организации

5. Обеспечение качества выполнения технологии анализа синовиальной жидкости

5.1. Программы обеспечения качества

Программы обеспечения качества включают последовательный мониторинг каждого аспекта процедуры для обеспечения гарантии достаточно высоких возможностей диагностики и наблюдения состояния пациента. Программы обеспечения качества должны включать все этапы работы и устанавливать связи между всеми составляющими процесса (пациент, лаборатория, клиницист). Контроль необходим и на этапах взятия образца, хранения, доставки, ручной обработки, ведения регистрации, выдачи документов. Нуждается в контроле также и техническая компетентность персонала, непрерывное продолжение образования. Для успешного осуществления всех контрольных мероприятий необходимо следовать правилам, изложенным в стандарте ГОСТ Р ИСО 15189 -2006. .

5.2. Ведение регистрации контрольных мероприятий

Регистрация проведения контроля должна осуществляться на всех уровнях: преаналитическом, аналитическом и постаналитическом, для каждого этапа должны быть разработаны и документированы правила проведения всех процедур.

Для клиницистов должна быть разработана форма запроса на исследование, включающая дату назначения и взятия пробы, информацию для идентификации пациента, диагноз, сведения о приеме лекарств или диагностических процедурах, если они могут влиять на результаты исследования.

Методика взятия образцов СЖ должна быть стандартизована и подробно описана в соответствующей инструкции для врачей и сестер хирургического отделения, производящих пункции суставов.

В инструкцию по доставке пробы должны быть включены условия и сроки хранения проб и правила безопасной транспортировки.

Для персонала лаборатории должны быть определены критерии для приема и отказа в приеме проб, требования по регистрации пробы, обработке, маркировке и хранению пробы до анализа. Аналитический этап проводится в соответствии с методиками исследований. На постаналитическом этапе необходимо разработать правила оценки приемлемости результатов анализа, которые должны включать оценку интерференции лекарственных препаратов, сравнение результатов с референтным интервалом, проверку правильности регистрации. Форма выдачи результатов должна быть утверждена в учреждении и согласована с лечебными отделениями.

5.3. Инструкции к используемым методикам лабораторных исследований

Методика процесса выполнения лабораторных исследований должна быть оформлена в виде документа и быть доступна на рабочем месте. Методика должна быть основана на методических указаниях или других документах, утвержденных в установленном порядке. Она должна включать критерии приемлемости или отбрасывания образцов СЖ (учитываются продолжительность срока хранения образца после взятия, достаточное количество СЖ для исследования); референтные интервалы; способ регистрации результатов; предосторожности, связанные с биологической опасностью исследуемого материала; причины получения ложноположительных и ложноотрицательных результатов.

5.4. Контроль качества микроскопических исследований.

При разработке требований к аналитической надежности визуального метода должны использоваться в качестве ориентира результаты исследования образцов биоматериала, произведенного исследователем, имеющим большой опыт визуального изучения изображений, правильного обнаружения и классификации исследуемых компонентов биоматериалов.

5.5. Непрерывное образование специалистов

Для обеспечения качества анализа квалификация персонала должна соответствовать сложности выполняемого исследования. Весь персонал лаборатории должен периодически (раз в пять лет) проходить обучение на циклах усовершенствования, которые проводятся медицинскими образовательными учреждениями, имеющими соответствующую лицензию. Каждый специалист должен заниматься самообразованием. Лаборатория должна иметь доступную для пользования современную литературу , включая периодические издания по лабораторной диагностике и атласы. Специалистам лаборатории необходимо участвовать в конференциях и семинарах.

6. Требования к режиму труда и отдыха, диете и ограничениям при подготовке пациента

Для персонала, осуществляющего взятие материала, должна быть разработана инструкция, содержащая, кроме процедуры взятия, условия подготовки пациента. Особенно важно влияние лекарств, например, введение в сустав стероидных гормонов, которые могут кристаллизоваться, (приложение А.2).

7. Трудозатраты на выполнение технологии клинического лабораторного анализа синовиальной жидкости

Таблица 1 - Трудозатраты в УЕТ на выполнение технологии «Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости»

Код услуги	Вид исследования	Трудозатраты в УЕТ
Специалиста со средним образованием	Врача клинической лабораторной диагностики, биолога
	Клинический лабораторный анализ синовиальной жидкости
	Регистрация (предварительная и окончательная: поступившего материала, паспортных данных пациентов, результатов исследований и т. д.), ручная или на компьютере.
	Оценка физических свойств СЖ, измерение количества
	Определение вязкости СЖ
	Определение образования муцинового сгустка
	Получение осадка СЖ при помощи центрифугирования и приготовление препаратов из осадка (для микроскопического исследования).
	Подсчет клеточных элементов СЖ в камере Горяева
	Микроскопическое исследование нативного препарата
	Микроскопическое исследование препарата, окрашенного азур-эозином с подсчетом процентного содержангия клеток.

ПРИЛОЖЕНИЕ А

(справочное)

Сбор образцов СЖ, условия хранения и доставки (преаналитический этап)

А.1 Введение

Пункция сустава произволится врачами-клиницистами.

Преаналитический этап проводится в лечебном отделении и после доставки биоматериала в лабораторию – в самой лаборатории. Врачами-клиницистами составляются заявки на исследования. В заявке должны быть указаны ФИО пациента, пол, возраст или год рождения, отмечен способ получения биоматериала, сустав, который подвергается пункции, время пункции, количество пробирок, заполненных СЖ, нативных и с К2 ЭДТА. Обязательно должен быть указан клинический диагноз и влияющие на анализ лекарственные препараты. Отсутствие в заказе диагноза или принимаемых пациентом лекарств, влияющих на результаты, может привести к неправильной трактовке полученных результатов и ошибке в постановке диагноза. Средний медицинский персонал отделения отвечает за подготовку пациента, срочную доставку пробирок с СЖ в клинико-диагностическую лабораторию.

Продолжение преаналитического этапа в лаборатории заключается в приеме и регистрации поступившего биоматериала, хранении его при необходимости до исследования, обработке и подготовке к исследованию.

Составление клиницистами заявки на анализы является очень важным моментом, так как правильность диагноза во многом зависит от правильно составленной заявки.

А.2 Подготовка пациента

Подготовка пациента к пункции сустава должна быть стандартизована.

Стероиды, вводимые в суставную сумку могут кристаллизоваться и мешать при диагностике патологического процесса или привести к неправильной диагностике, поэтому должно быть отменено внутрисуставное введение стероидов не менее чем за 5-7 дней до пункции сустава. Если введение в суставную сумку стероидов отменить заранее невозможно, врач-клиницист должен отмечать введение этих препаратов в заявке на исследование. В заявке, кроме паспортных данных пациента, должны быть отмечено, пункция какого сустава проведена, количество заполненных СЖ пробирок, время пункции, обязательно указать клинический диагноз, хотя бы на уровне диагностического предположения.

А.3 Хранение и доставка.

Для проведения общего анализа СЖ обычно в лабораторию доставляют сразу после пункции. Производится исследование нативного препарата, приготовленного из нестабилизированной СЖ для обнаружения рагоцитов и кристаллов, а также определения цитоза. Исследование окрашенного мазка можно производить при хранении пробирки с СЖ, стабилизированной К2 ЭДТА, в холодильнике при температуре +3- +50С в течение 24 часов.

Длительное хранение СЖ допускается при температуре -70О С, эти образцы используются для биохимических и иммунологических исследований.

П р и м е ч а н и е ─ В настоящее время выпускаются специальные вакуумные пробирки и контейнеры разового пользования для сбора биологических жидкостей объемом 100 мл из небьющегося материала без реактивов, с К2ЭДТА или другими рективами.

Библиография

1.Захарова синовиальной жидкости. В кн.: Ревматология. Национальное руководств. Под ред. академика РАМН и академика РАМН. М., «ГЭОТАР-Медиа»,2008, стр. 62-66.

2.Инструкция по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений, Москва, 1991.

3. Правила сбора, хранения и удаления отходов лечебно-профилактических учреждений. СанПиН 2.1.1.728-99., Москва, 1999 г.

4. ГОСТ Р ИСО 52095 -2:2003) Требования безопасности.

5. ГОСТ Р 53079.4-2008 Технологии медицинские лабораторные. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4 Правила ведения преаналитического этапа клинических лабораторных исследований.

6. ГОСТ Р ИСО 15189 -2006 Лаборатории медицинские. Частные требования к качеству и компетентности.

Проект стандартизованной технологии подготовили:

, (ММА им. И.М. Сеченова), (НИИ ревматологии РАМН), (РМАПО), (РОНЦ им. РАМН), (поликлиника № 000 г. Москвы).

Исследование синовиальной жидкости с анализом ее физических свойств и описанием клеточных элементов выполняется с целью диагностики различных суставных патологий и мониторинга проводимого лечения. Манипуляция довольно болезненна, но необходима пациентам с поражениями неясного генеза для исключения инфекционного фактора как причины недомогания. Проводится в амбулаторных условиях методом пункции (прокола) сочленения с дальнейшим извлечением содержимого. Не вызывает осложнений, за исключением кратковременного дискомфорта и припухлости.

Синовий - тягучая, прозрачная или слегка желтоватая субстанция, заполняющая внутреннюю полость сочленения. Играет роль внутрисуставной смазки, не допускает трения головок кости и их раннее изнашивание, улучшает подвижность соединения, служит амортизатором и обеспечивает трофику гиалинового вещества.

В норме количество синовиального экссудата не превышает 2–5 мл. Но при различных травматических, инфекционных и асептических поражениях наблюдается появление «выпота» - излишнего количества внутрисуставной жидкости.

К основным причинам, способным спровоцировать подобное состояние, относят:

артриты, в том числе подагрический;
бурсит;
синовит;
гемартроз;
рассекающий остеохондрит;
гонартроз;
ревматизм;
кисту Бейкера;
вирусные инфекции;
опухоли;
псевдоподагру;
травмы суставных костей, повреждение коленного мениска.

Накопление экссудата может быть спровоцировано проникновением в синовиальную полость патогенных бактерий из внешней среды в результате травмы или посредством крови и лимфы из соседних очагов воспаления.

Симптомами накопления суставного экссудата являются:

боль во время движения или при попытке согнуть конечность;
припухание пораженного соединения;
локальная гиперемия и повышение местной температуры.

Все эти признаки лишь указывают на патологические изменения в сочленении. Для точного определения причины их возникновения требуется ряд диагностических мероприятий, одним из которых и является пункция сустава.

В каких случаях назначается исследование синовиальной жидкости

Основным показанием к проведению артроцентеза считается неясная этиология суставных болей. Потребность в исследовании может возникнуть и при необходимости дифференцировать артрит и артроз либо для контроля эффективности назначенной терапии.

Основными показаниями к исследованию синовия принято считать боль и опухоль в суставе

Очень важным диагностическим моментом является исключение инфекционного начала, поскольку своевременное выявление и лечение недуга во многом определяет исход недомогания.

Особенности диагностики синовиальной жидкости

Важным условием получения достоверных результатов исследования является стандартизация технологий обработки лабораторного анализа. К сожалению, сегодня не приходится говорить о единых методах изучения суставного экссудата. Не существует и общих принципов организации контроля над качеством диагностики. Поэтому так часто наблюдается вариабельность результатов исследования синовиальной жидкости.

Возможно, к единой диагностической технологии поможет прийти новая Литос-система. Комплексное обследование всего организма позволяет получить целостную картину недуга, а не набор отдельных, иногда трудно трактуемых, результатов. Кроме того, методика способна выявить нарушения в доклинической стадии и провести мониторинг патологического процесса в развитии.

Процедура исследования

Артроцентезу должна предшествовать специфическая подготовка пациента. Кортикостероиды, вводимые в полость сустава, могут закристаллизоваться и привести к неправильной трактовке анализа. Поэтому гормональные инъекции прекращают за неделю до пункции.

Если лечение стероидами отменить невозможно, врач отмечает это в карточке больного, указав, в какой сустав и сколько было введено препарата.

Техника аспирации не сложна и подробно описывается во многих медицинских инструкциях. Манипуляция проводится в процедурном кабинете поликлиники или стационара с соблюдением всех рекомендаций асептики. Кожу в зоне вмешательства обрабатывают антисептиком, высушивают и прокалывают иглой 18 калибра, надетой на шприц емкостью 10 мл.

Введение местного анестетика при заборе пунктата обычно не применяют, поскольку раствор новокаина или другого обезболивающего лекарства может исказить результаты диагностики. Для цитологического исследования экссудат забирают с антикоагулянтом.

Визуальный анализ синовиальной жидкости

Получив пункцию, можно визуально оценить ее физико-химические параметры и определить, какой процесс проходит в полости сустава. Обращают внимание на цвет, прозрачность и консистенцию жидкости. Далее экссудат отправляют на химическое исследование, но именно общеклинический анализ позволяет сделать предположения о воспалительном или не воспалительном течении заболевания.

Основные параметры исследования

Физические свойства суставного экссудата оценивают в проходящем свете. Прозрачность сравнивают по отношению к дистиллированной воде, вязкость изучают по длине муцинового сгустка - в норме она не должна быть короче 3 см.

У здорового человека суставной экссудат на 1/3 состоит из белков и гиалоруната, фибриновых остатков в ней нет. Может содержать клетки эпителия и лейкоциты (<200 в 1 мкл) и нейтрофилы <25%).

Объем

В норме объем синовия не превышает 4 мл, в коленном суставе содержится до 5 мл экссудата. При поражении сочленений объем жидкости может увеличиться до 25 мл.

Цвет

При воспалительных поражениях здоровый цвет синовия меняется в зависимости от типа недуга и может стать зеленым, серым, ярко-желтым, мутно-белым, розовым. Красный и коричневый оттенок пунктата говорят о кровоизлиянии в сустав, чаще в результате травмы.

Прозрачность

Изучение прозрачности также помогает обозначить предварительный диагноз. Посторонние вкрапления, взвеси или общая замутненность указывают на высокую концентрацию клеток, присутствие липидов или кристаллов.

Вязкость

Исследование густоты проводят методом перелива из шприца в сосуд или путем нанесения капли пунктата на стеклянную пластину.

Существует 3 типа густоты:

низкая - при длине муциновой нити ≤1 см;
нормальная - волокно растягивается до 3 см;
высокая - протяженность слизистого экссудата ≥ 3 см.

Степень вязкости зависит от насыщенности синовия гиалуроновой кислотой. Во время воспалительного процесса проницаемость суставной оболочки возрастает и содержимое разбавляется плазмой.

Примеси

Кровь в пунктате появляется в результате травм, виллезонодулярнго синовита, остро развивающихся артритов или у людей, страдающих гемофилией.

Кроме того, в экссудате могут присутствовать и другие посторонние включения. Например, для ревматоидного артрита типичны свободно плавающие рисовые тела - фрагменты выпавших нитей фибрина.

Цитоз

Цитологическое обследование экссудата проводится в счетной камере. Клеточное содержимое синовия представлено эпителием суставной капсулы и лейкоцитами. Последних не должно быть более 600 в мм 3 .

При умеренном воспалении лейкоцитоз поднимается до 2000 в 1 мкл, при сильном может достигать 76000 в мм 3 . Для септического артрита характерно повышение количества белых кровяных телец до 100 000. Возрастает и число нейтрофилов - до 90%.

Бактериологическое исследование

В случае подозрения на бактериальную причину пунктат подвергают бактериоскопическому изучению. Для этого каплю жидкости помещают на стеклянную пластину и окрашивают по методике Грамма и Циля-Нильсена.

В готовых мазках могут проявиться спирохеты, палочки Коха, диплококки, стрептококки или стафилококки. Для выделения и установления типа возбудителя выполняют бактериологическое исследование. Анализ помогает выявить чувствительность патогена к конкретной группе антибиотиков и назначить этиотропное лечение.

Поляризационная микроскопия для выявления кристаллов

Этот вид исследования необходим для обнаружения и идентификации содержащихся в суставной жидкости кристаллов. Однако диагностическую ценность для ревматолога представляют только ураты и соли пирофосфата кальция.

Кристаллы мочевой кислоты напоминают длинные тонкие шипы

Первые имеют форму острых игл и являются симптомом подагры, Вторые напоминают короткие палочки или ромбы и обнаруживаются при псевдоподагре.

Как диагностировать заболевание по результатам исследования

Развитие воспалительного очага в суставе приводит к мгновенному изменению в составе синовиальной жидкости. Причем некоторые заболевания имеют очень характерные и легко узнаваемые отклонения, применимые в дифференциальной диагностике.

Объединим все аномалии физико-химических показателей и их трактовку в сравнительную таблицу.

Вид заболевания	Цвет и прозрачность жидкости	Вязкость	Уровень лейкоцитов, в мм3/ нейтрофилов, %	Наличие кристаллов	Присутствие бактерий
Травматический артрит	Грязно-желтая, мутная, с кровяными сгустками	Высокая	2000/30	Нет	Нет
Септический артрит	Серо-зеленного оттенка или кровянистая	Низкая	>80000/90	Нет	Да
Туберкулезный артрит	Мутная, желтая	Низкая	26000/55	Нет	Да
Инфекционный полиартрит	Желто-зеленая, мутная	Низкая	15000/65	Нет	Нет
Ревматический артрит	Мутная, желтая	Низкая	10000/60	Нет	Нет
Подагра, псевдоподагра	Молочно-грязного оттенка	Низкая	13000/60	Да	Нет
Травматический артроз, остеоартроз	Соломенно-желтая	Высокая		Нет	Нет

Для окончательной постановки диагноза, помимо изучения синовиальной жидкости, требуются и другие данные, а именно: лабораторные анализы крови и мочи, результаты инструментальных исследований. Только сопоставление всех итогов даст клиническую картину болезни в целом.

Цена на общеклиническое исследование суставной жидкости не превышает 1 тыс. руб. Микробиологический анализ обойдется в 800–900 руб., изучение поляризатором - в 1500 рублей.

Лечение избытка синовиальной жидкости

На первой стадии терапии чаще всего прибегают к проколу сочленения с целью выведения излишнего экссудата и очистки синовиальной полости. Затем вводят противомикробный препарат для предотвращения инфицирования.

В период лечения необходимо уменьшить нагрузку на пораженную конечность. Для этих целей применяют бандажи или фиксирующие повязки, иногда накладывают лангет. Делают это после аспирации, носят устройство не менее недели.

Для уменьшения риска осложнений назначают медикаментозное лечение. Оно включает в себя следующие группы препаратов:

НПВС в таблетках и мазях - Диклофенак, Индометацин, Найз, Ибупрофен;

иммуностимулирующие и общеукрепляющие средства - Активанад-Н, Витамакс, Кропанол, ФиБС;
препараты кальция.

При инфекционной природе недуга назначают противомикробные лекарства широкого спектра влияния: Кларитромицин, Амоксиклав, Азитромицин. Подагрический артрит нуждается в дополнительной базисной терапии урикодепрессантами и урикозуриками.

Если речь идет о хроническом накоплении экссудата с постоянными обострениями, то все указанные меры должны стать пожизненными.

Во избежание очередного рецидива пациенту рекомендуют соблюдать диету, беречь сустав от травмирования и переохлаждения, заниматься ЛФК и регулярно проходить курс физиотерапии.

Заключение

К исследованию синовиальной жидкости необходимо относиться очень серьезно - подобная проблема может быть признаком тяжелых суставных патологий. А потому любая самодеятельность и использование народных рецептов в этом случае не уместно и опасно. Все действия должны быть согласованы с врачом и проводиться только под его наблюдением.