पश्च उपदंश में रीत तथा रीफ ऋणात्मक होते हैं। सिफलिस के लिए कौन से रक्त परीक्षण किए जाते हैं और उन्हें कैसे समझा जाता है। निजी विश्लेषण विकल्प आरआईएफ: आरआईएफ अवशोषण

सबसे सटीक परिणाम प्राप्त करने के लिए प्रयोगशाला निदान एक साथ सिफलिस के लिए कई परीक्षणों का उपयोग करता है। इसमें अधिक समय लगता है, लेकिन यह सबसे सटीक उत्तर देता है।

बहुधा, RIF विश्लेषण का परिणाम संख्याओं में प्रस्तुत किया जाता है। डिक्रिप्शन में निम्नलिखित पदनाम हैं:

• तीव्र सकारात्मक परिणाम 4 प्लसस (++++) द्वारा इंगित किया गया है;
• एक सकारात्मक परिणाम 3 प्लसस (+++) द्वारा इंगित किया गया है;
• कमजोर रूप से सकारात्मक परिणाम 2 प्लसस (++);
• संदिग्ध परिणाम 1 प्लस (+);
• एक नकारात्मक परिणाम 1 माइनस (-) द्वारा दर्शाया गया है।

उपदंश के लिए आरआईएफ का परिणाम प्रतिशत के रूप में भी प्रस्तुत किया जाता है, जो संबंधित जीवाणुओं के मात्रात्मक सूचक पर निर्भर करता है:

• एक नकारात्मक परिणाम के साथ, स्थिरीकरण 20% तक;
• कमजोर सकारात्मक परिणाम के साथ, स्थिरीकरण 20 से 50% तक भिन्न होता है;
• सकारात्मक परिणाम के साथ स्थिरीकरण 50% से ऊपर है।

यदि परिणाम है सकारात्मकउत्तर, यह रोग की उपस्थिति बताता है।

यदि परिणाम कमजोर सकारात्मक, यह रक्त में अवशिष्ट एंटीबॉडी की एकल मात्रा को इंगित करता है।

नकारात्मकपरिणाम पेल ट्रेपोनिमा की अनुपस्थिति को इंगित करता है, जिसका अर्थ है कि रोगी स्वस्थ है।

हमारे क्लिनिक के अनुभवी डॉक्टर शीघ्रता से और रीडिंग की उच्च सटीकता के साथ सिफलिस का निदान करेंगे। इसलिए, हम जनसंख्या के सभी वर्गों के लिए सामाजिक रूप से उन्मुख हैं RIF विश्लेषण की लागत सस्ती है. मूल्य हमारी वेबसाइट पर तालिका में दिखाया गया है।

सिफलिस के सीरोलॉजिकल डायग्नोसिस में, एक विश्वसनीय और सटीक परिणाम प्राप्त करना बहुत महत्वपूर्ण है।

डेटा गुणवत्ता में सुधार के लिए कुछ कदम उठाए गए हैं:

• झूठी सकारात्मक प्रतिक्रियाओं से बचने के लिए परीक्षण सीरम 200 गुना (1: 200) पतला होता है। फिर कहते हैं चल रहा है सिफिलिस आरआईएफ 200 के लिए विश्लेषण.
• एक अन्य संस्करण में, जब सीरम को 1:5 पतला किया जाता है, तो एक विशेष अवशोषक का अतिरिक्त रूप से उपयोग किया जाता है, जो अपने आप में "अतिरिक्त" एंटीबॉडी एकत्र करता है ताकि वे परिणामों को विकृत न करें।

ट्रेपोनेमा के आकार भी शोधकर्ताओं के हाथों में हैं। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी के तहत स्पाइरोकेट्स के बड़े माइक्रोबियल निकाय स्पष्ट रूप से दिखाई देते हैं। यदि वे सीरम से फॉस्फोर-लेबल वाले प्रोटीन से "संलग्न" हैं। एक मानकीकृत एंटीजन और सीरा का उपयोग सिफलिस के निदान में आरआईएफ की संवेदनशीलता और विशिष्टता को अधिकतम करना संभव बनाता है।

निजी विश्लेषण विकल्प आरआईएफ: आरआईएफ अवशोषण

वैकल्पिक तरीकों में से एक को आरआईएफ-एबीएस कहा जाता है। यह अध्ययन किए गए सीरम के कम तनुकरण द्वारा सामान्य तकनीक से अलग है - 1:5 बनाम 1:200, हमेशा की तरह।

एक केंद्रित नमूने में बहुत सारे सक्रिय प्रोटीन अणु होते हैं।

संवेदनशीलता से बचने और बढ़ाने के लिए, सीरम को सिफिलिटिक स्पाइरोकेट्स के टुकड़ों से एक विशेष अवशोषक के साथ इलाज किया जाता है। सॉर्बेंट अपने आप में अत्यधिक सक्रिय एंटीबॉडी एकत्र करता है, और फिर नमूने को औद्योगिक, फॉस्फोर-लेबल वाले सीरम के साथ इलाज किया जाता है। इस प्रारंभिक तैयारी के लिए धन्यवाद, परीक्षण के परिणामों को प्रभावित करने वाले सभी अनावश्यक अणु समाप्त हो गए हैं।

उन्होंने इसे निम्नलिखित संकेतों के अनुसार रखा:

• नैदानिक ​​​​कल्याण की पृष्ठभूमि और इतिहास में संक्रमण के जोखिमों की अनुपस्थिति के खिलाफ सकारात्मक।
• पुरानी बीमारियों वाले मरीजों में सकारात्मक आर.वी.
• उपदंश के संदिग्ध लक्षणों के प्रकट होने पर नकारात्मक आर.वी.

संक्रमण के 15-16 दिन बाद पहले सकारात्मक परिणाम दिखाई देते हैं। यदि सकारात्मक से प्रतिक्रिया नकारात्मक हो जाती है, तो यह उपदंश के पूर्ण इलाज का संकेत देता है। झूठे सकारात्मक परिणाम की संभावना 0.4% से कम है।

यह स्थिति कैंसर रोगियों, शराबियों, गर्भवती महिलाओं और प्रतिरक्षा विकारों से पीड़ित लोगों की जांच करते समय हो सकती है।

तकनीकी त्रुटियों पर एक निश्चित अनुपात पड़ता है, क्योंकि उत्पादन काफी जटिल है। ऐसे मामले हैं जब जन्मजात विकृति को अधिग्रहित से अलग करना आवश्यक है। यह रोगी के रक्त में विभिन्न प्रकार के एंटीबॉडी की तलाश करके किया जा सकता है।

एंटी-सिफलिस वर्ग एम (आईजीएम) एंटीबॉडी संक्रमण के तुरंत बाद दिखाई देते हैं और आईजीजी की तुलना में बहुत तेज होते हैं। आपको उनकी पहचान करने की अनुमति देता है सिफिलिस आरआईएफ अवशोषण के लिए विश्लेषणआईजीएम। यदि इस प्रतिक्रिया के परिणाम सकारात्मक हैं, तो हम हाल ही में हुए संक्रमण के बारे में बात कर सकते हैं। इसलिए पुन: संक्रमण के मामलों को पुनरावर्तन से अलग किया जा सकता है या बच्चे के जन्म के बाद बच्चे के संक्रमण का पता लगाया जा सकता है।

आरआईएफ विश्लेषण की इस पद्धति के परिणामों के आधार पर, वे यह भी निष्कर्ष निकालते हैं कि शुरुआती सिफलिस का उपचार प्रभावी है।

यदि आपको सिफलिस का संदेह है, तो किसी अनुभवी वेनेरोलॉजिस्ट से संपर्क करें।

रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए कई तरीकों का उपयोग करके सिफलिस का विश्लेषण किया जाता है। पैथोलॉजी के विकास के साथ, बड़ी संख्या में विशिष्ट लक्षण दिखाई देते हैं, इसलिए, एक सटीक निदान स्थापित करने के लिए, एक बीमार व्यक्ति की जटिल तरीके से जांच की जाती है। उसी समय, एक सामान्य रक्त परीक्षण सूचनात्मक नहीं होता है, इसका उपयोग इस यौन संक्रमण के निदान में नहीं किया जाता है।

अध्ययन के प्रकार और विश्लेषण के लिए बायोमैटिरियल्स

रोग का पता लगाने के लिए विभिन्न तरीकों और बायोमटेरियल का उपयोग किया जाता है। प्रारंभिक अवस्था में, बैक्टीरियोस्कोपिक परीक्षण का उपयोग करके सिफलिस का निर्धारण किया जाता है। माइक्रोस्कोप के तहत नमूनों की जांच की जाती है। डिवाइस आपको रोगज़नक़ के तनाव का पता लगाने की अनुमति देता है। बाद में, सीरोलॉजिकल रक्त परीक्षण किए जाते हैं। उनके लिए धन्यवाद, नमूनों में सिफलिस के एंटीजन और एंटीबॉडी पाए जाते हैं।

यौन संक्रमण को निर्धारित करने के तरीकों को 2 श्रेणियों में विभाजित किया गया है:

• प्रत्यक्ष, एक रोगजनक सूक्ष्मजीव का खुलासा। इनमें शामिल हैं: डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोपी, आरआईटी विश्लेषण (अनुसंधान के लिए जैव सामग्री के साथ खरगोशों का संक्रमण), पीसीआर विधि - पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (इसकी मदद से रोगज़नक़ के आनुवंशिक तत्व पाए जाते हैं)।
• एक रोगज़नक़ के लिए एंटीबॉडी का अप्रत्यक्ष (सीरोलॉजिकल) पता लगाना। वे संक्रमण के जवाब में प्रतिरक्षा प्रणाली द्वारा निर्मित होते हैं।

सीरोलॉजिकल विधियों को 2 श्रेणियों में विभाजित किया गया है: ट्रेपोनेमल और गैर-ट्रेपोनेमल।

• गैर-ट्रेपोनेमल, जिनमें शामिल हैं: टोलुडीन रेड के साथ परीक्षण, आरएसके विश्लेषण, आरपीआर-परीक्षण, आरएमपी एक्सप्रेस पद्धति का उपयोग करके रक्त परीक्षण।
• ट्रेपोनेमल, सहित: इम्युनोब्लॉटिंग, आरएसके परीक्षण, आरआईटी विश्लेषण, आरआईएफ अध्ययन, आरपीजीए परीक्षण, एलिसा विश्लेषण।

संक्रमण के लिए परीक्षणों की सूचनात्मकता अलग है। सिफलिस के लिए मुख्य प्रकार के परीक्षण अधिक बार किए जाते हैं, जिसमें सीरोलॉजिकल तरीके शामिल होते हैं।

अनुसंधान के लिए बायोमटेरियल

पेल ट्रेपोनिमा की पहचान करने के लिए, एक रोगज़नक़ जो एक सर्पिल जैसा दिखता है और सिफलिस का कारण बनता है, नमूने लिए जाते हैं:

• नसयुक्त रक्त;
• शराब (रीढ़ की हड्डी की नहर से स्राव);
• लिम्फ नोड्स की सामग्री;
• अल्सर ऊतक।

यदि उपदंश का पता लगाने के लिए परीक्षण करना आवश्यक है, तो रक्त न केवल क्यूबिटल नस से लिया जाता है, बल्कि उंगली से भी लिया जाता है। बायोमटेरियल और शोध की विधि का विकल्प संक्रमण की गंभीरता और डायग्नोस्टिक सेंटर के उपकरण से प्रभावित होता है।

प्रत्यक्ष अनुसंधान

सिफलिस का ठोस सबूत एक सूक्ष्मदर्शी के तहत संक्रामक एजेंटों की पहचान है। इस प्रकार, 10 में से 8 रोगियों में रोगज़नक़ पाया जाता है। शेष 2 रोगियों में एक नकारात्मक परिणाम का मतलब यह नहीं है कि वे संक्रमित नहीं हैं।

अध्ययन रोग के प्राथमिक और माध्यमिक चरणों (चरणों) में किया जाता है, जो त्वचा पर चकत्ते और उपकला ऊतकों या श्लेष्म झिल्ली पर सिफिलोमा (अल्सरेशन) की उपस्थिति की विशेषता है। घावों के निर्वहन में, रोगजनकों का पता लगाया जाता है जो यौन रोग का कारण बनते हैं।

अधिक सटीक रूप से, एक जटिल परीक्षण, जिसे आरआईएफ कहा जाता है, एक इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया, ट्रेपोनिमा के निर्धारण के साथ मुकाबला करती है। अनुसंधान के लिए नमूना फ्लोरोसेंट एंटीबॉडी के साथ पूर्व-उपचार किया जाता है। चमकने में सक्षम यौगिक बैक्टीरिया के साथ चिपक जाते हैं। एक माइक्रोस्कोप के तहत नमूनों की जांच, संक्रमण के मामले में, प्रयोगशाला सहायक स्पार्कलिंग रोगजनकों को देखता है।

परीक्षण का उपयोग रोग के शीघ्र निदान के लिए किया जाता है। रोग जितना अधिक समय तक रहता है, अनुसंधान विधियों की संवेदनशीलता उतनी ही कम होती है। इसके अलावा, यह एंटीसेप्टिक एजेंटों के साथ चकत्ते और अल्सर के उपचार के बाद और उन रोगियों में गिरता है जिनका इलाज चल रहा है। कभी-कभी, अध्ययन गलत-नकारात्मक और गलत-सकारात्मक परिणाम देता है।

सिफलिस का पता लगाने के लिए RIT विश्लेषण एक बेहद सटीक तरीका है। परीक्षण के दौरान, परिणाम प्रतीक्षा करने में लंबा समय लेते हैं। जब तक संक्रमित खरगोश में संक्रमण के लक्षण दिखाई न दें। परीक्षण का उपयोग बहुत ही कम किया जाता है, इस तथ्य के बावजूद कि यह बेहद सटीक है।

का उपयोग करके पोलीमरेज़ चेन रिएक्शनसिफलिस रोगजनकों के आनुवंशिक तत्वों द्वारा निर्धारित किया जाता है। पीसीआर का एकमात्र दोष उच्च लागत है।

गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षण

इस तरह के रक्त परीक्षण एंटीबॉडी का पता लगाने में मदद करते हैं जो रोगज़नक़ झिल्ली की सामान्य संरचना से संबंधित एक यौगिक कार्डियोलिपिन के जवाब में दिखाई देते हैं।

वासरमैन रिएक्शन (РВ या RW)

सिफलिस के लिए सबसे प्रसिद्ध परीक्षण वासरमैन प्रतिक्रिया है। RS पूरक निर्धारण प्रतिक्रियाओं (CFRs) की श्रेणी में शामिल है। नए आरएससी तरीकों में पारंपरिक आरडब्ल्यू से काफी अंतर है। लेकिन वे पहले की तरह "वासरमैन रिएक्शन" की अवधारणा से नामित हैं।

ट्रेपोनिमा आक्रमण के जवाब में प्रतिरक्षा प्रणाली एंटीबॉडी (मार्कर) को संश्लेषित करती है। वासरमैन रिएक्शन मेथड द्वारा सिफलिस के लिए रक्त परीक्षण में उनका पता लगाया जाता है। एक सकारात्मक आरडब्ल्यू परिणाम विषय के संक्रमण की पुष्टि करता है।

हेमोलिसिस प्रतिक्रिया - पीबी विश्लेषण सूचकांक। इसके साथ, 2 पदार्थ परस्पर क्रिया करते हैं: हेमोलिटिक सीरम और भेड़ एरिथ्रोसाइट्स। राम एरिथ्रोसाइट्स के साथ एक खरगोश को प्रतिरक्षित करके सीरम बनाया जाता है। गर्म करने से जैविक द्रव की गतिविधि कम हो जाती है।

आरवी संकेतक इस बात पर निर्भर करते हैं कि हेमोलिसिस पास हुआ है या नहीं। मार्करों से मुक्त नमूने में, हेमोलाइसिस होता है। इस मामले में, प्रतिजनों की प्रतिक्रिया असंभव है। पूरक भेड़ एरिथ्रोसाइट्स के साथ बातचीत पर खर्च किया जाता है। जब नमूने में मार्कर होते हैं, तो कॉम्प्लिमेंट एंटीजन के साथ प्रतिक्रिया करता है। इस मामले में, हेमोलिसिस नहीं होता है।

सिफलिस के लिए ट्रेपोनेमल परीक्षण। सामान्य विवरण।

सिफलिस का मज़बूती से निदान करने और रोगी के शरीर (रक्त सीरम या मस्तिष्कमेरु द्रव में) में एंटी-सिफलिटिक एंटीबॉडी की पहचान करने के लिए, विशेष प्रयोगशाला अनुसंधान तकनीकों का उपयोग किया जाता है - तथाकथित सीरोलॉजिकल तरीके।

सिफलिस के लिए नैदानिक ​​​​परीक्षण करते समय, विभिन्न सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का उपयोग किया जाता है: एग्लूटिनेशन, वर्षा, इम्यूनोफ्लोरेसेंस, पूरक निर्धारण, एंजाइम इम्यूनोसे, आदि। ये सभी सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाएं एंटीजन और एंटीबॉडी की बातचीत पर आधारित होती हैं।

विशिष्ट सीरोलॉजिकल परीक्षण कहा जाता है ट्रेपोनेमलक्योंकि इन परीक्षणों में ट्रेपोनिमा पैलिडम या इसके एंटीजन का उपयोग किया जाता है, जो कि ट्रेपोनेमल मूल के एंटीजन हैं। ट्रेपोनेमल परीक्षणों का उद्देश्य सिफलिस के प्रेरक एजेंट की एंटीजेनिक संरचनाओं के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी की पहचान करना है, अर्थात, एंटीबॉडी विशेष रूप से टी। पैलिडम बैक्टीरिया के खिलाफ निर्देशित होते हैं, न कि ट्रेपोनिमा द्वारा क्षतिग्रस्त शरीर के ऊतकों के खिलाफ। आईजीएम वर्ग के विशिष्ट एंटीट्रेपोनेमल एंटीबॉडी का पता बीमारी के दूसरे सप्ताह के अंत में लगाया जा सकता है।

7. गलत सकारात्मक और गलत नकारात्मक परिणाम

जिन लोगों को यह बीमारी नहीं है, उनमें सिफलिस के लिए सकारात्मक पीबी परीक्षण को गलत सकारात्मक कहा जाता है। स्वस्थ व्यक्तियों में झूठे सकारात्मक परिणामों की आवृत्ति 0.2-0.25% है। यदि स्वस्थ लोगों में आरवी के निरर्थक झूठे सकारात्मक परिणामों का प्रतिशत बहुत कम है, तो कुछ बीमारियों में यह अधिक हो सकता है।

सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं के सभी गैर-विशिष्ट परिणामों को निम्नलिखित मुख्य समूहों में विभाजित किया जा सकता है:

1. समान रोगजनकों (स्पाइरोकेट्स) में सामान्य प्रतिजनों की उपस्थिति के कारण होने वाले रोग: आवर्तक बुखार, यव्स, बेजेल, पिंट, ओरल ट्रेपोनेमा, लेप्टोस्पाइरा।

2. लिपिड चयापचय में परिवर्तन और सीरम ग्लोब्युलिन में परिवर्तन के कारण सकारात्मक प्रतिक्रियाएँ। इनमें गाउट के साथ गर्भवती महिलाओं में सकारात्मक परिणाम, सोडियम सैलिसिलेट, डिजिटेलिस आदि लेने के बाद लेड, फॉस्फोरस के साथ विषाक्तता के परिणामस्वरूप लिपिड रचना विकार शामिल हैं। इन प्रतिक्रियाओं में कुछ संक्रामक रोगों (टाइफस, मलेरिया, निमोनिया) में सकारात्मक प्रतिक्रियाएं भी शामिल होनी चाहिए। कुष्ठ रोग, अन्तर्हृद्शोथ, कोलेजनोसिस, मायोकार्डियल रोधगलन, हिलाना, कैंसर, यकृत का सिरोसिस, आदि)

3. आचरण की तकनीकी त्रुटियाँ। पूरक खुराक का गलत विकल्प, अभिकर्मकों के भंडारण की शर्तों और शर्तों का पालन न करना, प्रतिक्रिया से रक्त सीरम के नियंत्रण नमूनों का बहिष्करण, दूषित परीक्षण ट्यूबों और उपकरणों का उपयोग।

8. वासरमैन प्रतिक्रिया का संशोधन

सेरेब्रोस्पाइनल तरल पदार्थ के साथ ठंड में, गुणात्मक और मात्रात्मक संस्करणों में वासरमैन प्रतिक्रिया के संशोधन हैं।

ठंड में आरवी का संशोधनज्यादा संवेदनशील नजर आए। ठंड में वासरमैन प्रतिक्रिया स्थापित करने की विधि की एक विशेषता तीन-चरण तापमान शासन है, जिस पर पूरक बाध्यकारी आय होती है। यह प्रतिक्रिया कार्डियोलिपिन और ट्रेपोनेमल एंटीजन के साथ भी डाली जाती है।

आरडब्ल्यू के गुणात्मक मूल्यांकन के अलावा, इसके लिए एक पद्धति भी है मात्रात्मक सेटिंगरक्त सीरम के विभिन्न तनुकरणों के साथ (1:10, 1:20, 1:80, 1:160, 1:320)। रीगिन टिटर अधिकतम कमजोर पड़ने से निर्धारित होता है, जो अभी भी तेजी से सकारात्मक परिणाम (4+) देता है। सिफलिस के कुछ रूपों के निदान और चिकित्सा की प्रभावशीलता की निगरानी में आरवी का मात्रात्मक सूत्रीकरण महत्वपूर्ण है।

9. दायरा

रूस में, आरएसकेटी सिफलिस (एसएसआर) के लिए मानक सीरोलॉजिकल परीक्षणों के परिसर का हिस्सा है।

ट्रेपोनेमल और कार्डियोलिपिन एंटीजन (RSKt) के साथ वासरमैन प्रतिक्रिया का उपयोग किया जाता है

• उपदंश के सभी रूपों का निदान,
• उपचार की प्रभावशीलता पर नियंत्रण,
• सिफलिस के रोगी के साथ यौन संपर्क रखने वाले व्यक्तियों की परीक्षा,
• उपदंश के नैदानिक ​​और आमनेस्टिक संदेह वाले व्यक्तियों की परीक्षा
• मनश्चिकित्सीय और न्यूरोलॉजिकल अस्पतालों में रोगियों के उपदंश के लिए निवारक परीक्षा के दौरान, दाताओं और गर्भवती महिलाओं, जिनमें गर्भावस्था के कृत्रिम समापन के लिए संदर्भित व्यक्ति शामिल हैं।

वर्तमान में, रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय के आदेश से, आरएसकेटी को अधिक संवेदनशील ट्रेपोनेमल विधियों (एलिसा या आरपीएचए) से बदलने की सिफारिश की जाती है।

विदेश में, ट्रेपोनेमल एंटीजन के साथ वासरमैन प्रतिक्रिया का लंबे समय से नैदानिक ​​​​प्रयोगशाला अभ्यास में उपयोग नहीं किया गया है और विश्व स्वास्थ्य संगठन द्वारा अनुशंसित मानक परीक्षणों की सूची में शामिल नहीं है।

शास्त्रीय सीरोलॉजिकल प्रतिक्रियाओं का परिसर (सीएसआर)

डीएसी- ये है प्रतिक्रिया जटिलएक मानक विधि के रूप में सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस के लिए उपयोग किया जाता है। प्रतिक्रियाओं के इस परिसर में कार्डियोलिपिन एंटीजन (लेसिथिन और कोलेस्ट्रॉल से समृद्ध एक बैल के दिल से एक अर्क) और ट्रेपोनेमल एंटीजन (अल्ट्रासाउंड के साथ इलाज किए गए एपैथोजेनिक कल्चरल पेल ट्रेपोनेमास का एक निलंबन) के साथ वासरमैन प्रतिक्रिया शामिल है, साथ ही एक माइक्रोप्रेजर्वेशन रिएक्शन (आरएमपी) ) प्लाज्मा या निष्क्रिय सीरम के साथ, जिसे कार्डियोलिपिन एंटीजन के साथ रखा गया है

CSR प्राथमिक अवधि के मध्य में सकारात्मक हो जाता है (इसका सीरोनिगेटिव और सेरोपोसिटिव में विभाजन CSR द्वारा सटीक रूप से निर्धारित होता है), द्वितीयक अवधि में CSR 98-100% रोगियों में सकारात्मक होता है, और तृतीयक अवधि में - केवल 60-70 में %। यानी जैसे-जैसे बीमारी की अवधि बढ़ती है, सीएसआर की सकारात्मकता धीरे-धीरे कम होती जाती है।

केएसआर के लाभ:

1) सस्तापन, सरलता और सेटिंग की गति। यह विशेष रूप से सूक्ष्म वर्षा प्रतिक्रिया के लिए सच है: आरएमपी वर्तमान में मुख्य स्क्रीनिंग (स्क्रीनिंग) विधि है;

2) उपदंश के इलाज की निगरानी के लिए गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षण सुविधाजनक हैं।

सीएसआर के नुकसान:

1) प्रतिक्रियाओं के परिणामों के मूल्यांकन की विषयवस्तु ("आंख से");

2) उपदंश के बाद के रूपों में कम संवेदनशीलता;

3) अधिक आधुनिक परीक्षणों की तुलना में विशिष्टता का अभाव। जब उन्हें किया जाता है, तो झूठी सकारात्मक प्रतिक्रियाएं (एलपीआर) अक्सर नोट की जाती हैं।

एलपीआर फीके स्पाइरोचेट और अन्य रोगाणुओं, लिपिड और प्रोटीन चयापचय संबंधी विकारों, कोशिका झिल्ली की अस्थिरता और स्वप्रतिपिंडों के गठन के बीच क्रॉस-रिएक्टिविटी के कारण हो सकता है। LPR तीव्र (मलेरिया, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, आदि) और जीर्ण (तपेदिक, कुष्ठ रोग, हेपेटाइटिस, बोरेलिओसिस, आदि) संक्रमणों, मायोकार्डिअल रोधगलन, यकृत सिरोसिस, कोलेजनोज़ (विशेष रूप से SLE में), ऑनकोपैथोलॉजी, टीकाकरण, नशीली दवाओं के उपयोग में उल्लेख किया गया है। शराब और वसायुक्त खाद्य पदार्थों का दुरुपयोग। गर्भावस्था के आखिरी हफ्तों में, बच्चे के जन्म के बाद, और कुछ महिलाओं में मासिक धर्म के दौरान गलत सकारात्मक सीएसआर हो सकता है। गलत-नकारात्मक सीएसआर परिणाम एचआईवी संक्रमण से जुड़े हो सकते हैं।

RIT, RIBT - पीला ट्रेपोनिमा की स्थिरीकरण प्रतिक्रिया

ट्रेपोनिमा पैलिडम इमोबिलाइजेशन टेस्ट (TPI; ट्रेपोनिमा पैलिडम इमोबिलाइजेशन टेस्ट, टीपीआई) एक क्लासिक तरीका है जो विशिष्ट ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी का पता लगाने का काम करता है। आरआईबीटी प्रतिक्रिया एक एंटीजन के रूप में खरगोश के अंडकोष में उगाए जाने वाले रोगजनक ट्रेपोनिमा पैलिडम टी. पैलिडम (निकोल्स स्ट्रेन) का उपयोग करती है। आरआईबीटी रोगी के रक्त सीरम और पूरक से एंटीबॉडी के संपर्क में आने के बाद लाइव पेल ट्रेपोनेमा की गतिशीलता के नुकसान पर आधारित है। परिणामों का मूल्यांकन डार्क फील्ड माइक्रोस्कोपी द्वारा किया जाता है। इस तथ्य के बावजूद कि आरआईबीटी परीक्षण को सिफिलिस के लिए एक विशिष्ट परीक्षण के रूप में नैदानिक ​​​​अभ्यास में पेश किया गया था, यह श्रमसाध्य, तकनीकी रूप से जटिल, समय लेने वाला और उपयोग करने में महंगा है।

1. आरआईबीटी पद्धति का इतिहास

ट्रेपोनिमा पैलिडम स्थिरीकरण परीक्षण (टीपीआरटी) वास्तव में सिफलिस के निदान के लिए पहला विशिष्ट परीक्षण है। यह प्रतिक्रिया 1949 में अमेरिकी शोधकर्ताओं नेल्सन और मेयर (आर. डब्ल्यू. नेल्सन और एम. एम. मेयर) द्वारा प्रस्तुत की गई थी और बाद के दशकों में वैज्ञानिक पत्रों में विस्तार से चर्चा की गई थी। परीक्षणों में लाइव ट्रेपोनेमा का उपयोग करने के असफल प्रयास पहले किए गए हैं। इस तथ्य के कारण कि नेल्सन एक ऐसा वातावरण बनाने में कामयाब रहे जिसमें ट्रेपोनेमा 8 दिनों तक व्यवहार्य रहा, उनके शोध को सफलता मिली।

2. आरआईबीटी पद्धति का सिद्धांत

यह विधि अध्ययन किए गए रक्त सीरम के एंटीट्रेपोनेमल एंटीबॉडी को स्थिर करने और अवायवीय परिस्थितियों में पूरक होने की उपस्थिति में पेल ट्रेपोनेमा द्वारा गतिशीलता के नुकसान की घटना पर आधारित है। प्रतिजन कृत्रिम रूप से उपदंश से संक्रमित खरगोशों से प्राप्त जीवित रोगजनक पीला ट्रेपोनिमा है।

3. आरआईबीटी परीक्षण की स्थापना

प्रतिक्रिया में परीक्षण सीरम, पूरक और प्रतिजन भाग लेते हैं। कृत्रिम संक्रमण के बाद खरगोश के अंडकोष के ऊतकों से प्राप्त लाइव ट्रेपोनेम्स में विषय का रक्त सीरम जोड़ा जाता है। सीरम में एंटी-ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी-इमोबिलिज़िन की उपस्थिति में, पेल ट्रेपोनेमास हिलना बंद कर देता है (स्थिर)। इमोबिलिसिन एंटीबॉडी देर से एंटीट्रेपोनेमल एंटीबॉडी हैं।

प्रतिक्रिया गर्मी-निष्क्रिय सीरा के साथ या लच्छेदार कागज (सूखी बूंदों) पर सूखे सेरा के नमूनों के साथ की जाती है। 56 डिग्री सेल्सियस के तापमान पर 30 मिनट के लिए गर्म करके सीरम निष्क्रियता की जाती है। रक्त लेने से पहले, विषय को दवा नहीं लेनी चाहिए, विशेष रूप से पेनिसिलिन की तैयारी। शरीर में उनकी संभावित देरी की अवधि के लिए दवाओं का रिसेप्शन रद्द कर दिया गया है।

एंटीजन के रूप में, 7-10-दिन के खरगोश सिफिलिटिक ऑर्काइटिस (वृषण सूजन) से प्राप्त निकोल्स स्ट्रेन के बैक्टीरिया का उपयोग किया जाता है। प्रतिक्रिया की स्थापना के समय से लेकर इसके परिणामों के पंजीकरण तक की अवधि 18-20 घंटे तक रहती है, इसलिए सूक्ष्मजीवों की व्यवहार्यता और अच्छी गतिशीलता बनाए रखने के लिए एक जीवित वातावरण आवश्यक है।

आरआईबीटी गिनी पिग पूरक का उपयोग करता है। पूरक प्राप्त करने के लिए, रक्त को कई गिनी सूअरों से बाँझ परिस्थितियों में लिया जाना चाहिए।

जीवाणु संदूषण के मामले में, पूरक को त्याग दिया जाता है। पीला ट्रेपोनिमा संरक्षित पूरक, टीके के स्थिरीकरण की प्रतिक्रिया में इस्तेमाल नहीं किया जा सकता है। यह सूक्ष्मजीवों के लिए विषैला होता है।

स्थिरीकरण प्रतिक्रिया में, पूरक की अधिकता का उपयोग किया जाता है। इसकी मात्रा काफी हद तक पेल ट्रेपोनिमा के लिए जीवित रहने के वातावरण पर निर्भर करती है।

आरआईबीटी को बाँझ बक्से में रखा जाता है, जिसे पहले 45-60 मिनट के लिए एक जीवाणुनाशक क्वार्ट्ज लैंप से विकिरणित किया जाता है। प्रत्येक रक्त सीरम की दो टेस्ट ट्यूबों में जांच की जाती है: अनुभवतथा नियंत्रण. दोनों टेस्ट ट्यूब में टेस्ट सीरम और एंटीजन को आवश्यक मात्रा में मिलाया जाता है। टेस्ट ट्यूब में सक्रिय पूरक डाला जाता है, और निष्क्रिय गिनी पिग रक्त सीरम की समान मात्रा को नियंत्रण ट्यूब में डाला जाता है। भरने के बाद, ट्यूबों की सामग्री को हल्के से हिलाकर मिलाया जाता है।

आरआईबीटी अवायवीय परिस्थितियों में आगे बढ़ता है। सामग्री के साथ टेस्ट ट्यूब को एक माइक्रोएनेरोस्टेट में रखा जाता है, जिसमें से एक वैक्यूम पंप द्वारा वायुमंडलीय हवा को चूसा जाता है और एक गैस मिश्रण को एक सिलेंडर (95 भाग नाइट्रोजन और 5 भाग कार्बन डाइऑक्साइड) से इंजेक्ट किया जाता है। टेस्ट ट्यूब के साथ माइक्रोएनेरोस्टेट को 18-20 घंटे के लिए थर्मोस्टेट (35 डिग्री सेल्सियस) में रखा जाता है।

आरआईबीटी के परिणामों का मूल्यांकन थर्मोस्टेट और माइक्रोएनेरोस्टेट (यानी, 18-20 घंटे के अनुभव के बाद) से टेस्ट ट्यूब को हटाने के बाद किया जाता है। पाश्चर पिपेट के साथ, टेस्ट ट्यूब की सामग्री की एक बूंद एक ग्लास स्लाइड पर लगाई जाती है, जिसे कवर स्लिप से कवर किया जाता है और माइक्रोस्कोप के अंधेरे क्षेत्र में जांच की जाती है (उद्देश्य 40, ऐपिस 10X)। तैयारी के विभिन्न भागों में देखने के कई क्षेत्रों की जांच की जाती है, प्रत्येक में मोबाइल और इमोबेल पेल ट्रेपोनेमा की संख्या की गणना की जाती है। गिनती दवा के नियंत्रण से शुरू होती है, और फिर टेस्ट ट्यूब से।

प्रतिक्रिया की स्थापना करते समय, 5 नियंत्रण अध्ययनों का उपयोग किया जाता है: स्पष्ट रूप से सकारात्मक और नकारात्मक रक्त सीरम के साथ, सक्रिय और निष्क्रिय पूरक और पीला ट्रेपोनिमा के लिए उत्तरजीविता माध्यम के साथ। इस प्रयोग में पेल ट्रेपोनिमा की गतिशीलता की डिग्री का न्याय करने के लिए नियंत्रण नकारात्मक रक्त सीरम का उपयोग किया जाता है। नियंत्रण सकारात्मक रक्त सीरम - इस प्रयोग की शर्तों के तहत गतिहीन गतिविधि की डिग्री का आकलन करने के लिए। पेल ट्रेपोनिमा की गतिशीलता पर उनके प्रभाव को निर्धारित करने के लिए सक्रिय और निष्क्रिय पूरक और पर्यावरण का अध्ययन किया जाता है।

प्रयोग में पूरक की कमी के साथ, इमोबिलाइजिंग एंटीबॉडी अपनी गतिविधि को ठीक से नहीं दिखाते हैं और ट्रेपेनेमा मोबाइल रहते हैं। इसलिए, प्रयोग के बाद, अवशिष्ट पूरक का निर्धारण यह आकलन करने के लिए किया जाता है कि क्या परीक्षण ट्यूबों में पीले ट्रेपोनेमा की गतिशीलता पूरक की कमी के कारण थी। इसके लिए, एक हेमोलिटिक प्रणाली का उपयोग किया जाता है - रैम एरिथ्रोसाइट्स के निलंबन का मिश्रण और थर्मोस्टैट में रखे पतला हेमोलिटिक सीरम।

अवशिष्ट पूरक प्रत्येक ट्यूब में आवश्यक मात्रा में हेमोलिटिक प्रणाली को जोड़कर निर्धारित किया जाता है। ट्यूबों को थर्मोस्टेट में 37 डिग्री पर 45 मिनट के लिए रखा जाता है। प्रयोगात्मक परीक्षण ट्यूबों में, एरिथ्रोसाइट्स का हेमोलिसिस होना चाहिए, नियंत्रण ट्यूबों में हेमोलिसिस में देरी होनी चाहिए। टेस्ट ट्यूब में हेमोलिसिस की अनुपस्थिति पूरक की अपर्याप्त मात्रा को इंगित करती है, इन मामलों में अध्ययन को दोहराया जाना चाहिए। रक्त सीरम की बार-बार जांच केवल तभी नहीं की जाती है, जब पेल ट्रेपोनेमा के 100% स्थिरीकरण का उल्लेख किया गया हो।

4. आरआईबीटी के परिणामों के लिए लेखांकन

डार्क-फील्ड माइक्रोस्कोपी का उपयोग करके एक माइक्रोस्कोप के तहत इमोबिलाइज्ड ट्रेपोनेमा की गिनती की जाती है। शोधकर्ता के पास ट्रेपोनेमा की गति का आकलन करने का कौशल होना आवश्यक है। उसे पेल ट्रेपोनिमा द्वारा किए गए आंदोलनों की तीव्रता पर ध्यान देना चाहिए। इस जीवाणु में, कभी-कभी केवल घूर्णी वाले तरंग-जैसे संकुचन और फ्लेक्सन आंदोलनों का निरीक्षण करना संभव नहीं होता है। आपको ट्रेपोनेमा के सक्रिय आंदोलनों को द्रव प्रवाह के साथ आंदोलन से अलग करने में भी सक्षम होना चाहिए।

प्रतिक्रिया के परिणामों का मूल्यांकन करने के लिए, पेल ट्रेपोनेमा के स्थिरीकरण के प्रतिशत की गणना की जाती है, अर्थात प्रयोग में (सक्रिय पूरक के साथ) और नियंत्रण (निष्क्रिय पूरक के साथ) सूत्र के अनुसार मोबाइल और मोबाइल ट्रेपोनेमा का अनुपात:

एक्स \u003d (एम - सी) × 100 / एम

जहां एम नियंत्रण में मोबाइल ट्रेपोनेमा की संख्या है; सी - प्रयोग में मोबाइल ट्रेपोनेमा की संख्या; एक्स - % स्थिरीकरण। व्यावहारिक कार्य में, उपरोक्त सूत्र का उपयोग करके पूर्व-संकलित तालिका के अनुसार स्थिरीकरण का प्रतिशत निर्धारित किया जाता है।

पेल ट्रेपोनिमा के स्थिरीकरण की प्रतिक्रिया का अनुमान है

• सकारात्मकस्थिरीकरण के दौरान 51 - 100% ट्रेपोनेम,
• कमजोर सकारात्मक: 31 - 50% स्थिर ट्रेपोनेमा,
• संदिग्ध: 21 - 30% स्थिर ट्रेपोनेमा,
• नकारात्मक: 0 - 20% स्थिर ट्रेपोनेमा।

पेल ट्रेपोनिमा के स्थिरीकरण की प्रतिक्रिया प्राथमिक के अंत में सकारात्मक हो जाती है - सिफलिस की द्वितीयक अवधि की शुरुआत (संक्रमण के क्षण से 7-8 वें सप्ताह से और अधिक)। इसी समय, सिफलिस के शुरुआती चरणों के निदान के लिए आरआईबीटी का बहुत कम उपयोग होता है, क्योंकि एंटीबॉडी जो पीले ट्रेपोनेमा को स्थिर करते हैं और प्रतिक्रिया में निर्धारित होते हैं, संक्रमण के 3-6 सप्ताह बाद ही दिखाई देते हैं। एंटीबॉडी-इमोबिलिसिन इम्युनोग्लोबुलिन आईजीजी के वर्ग से संबंधित हैं। वे रक्त में रीगिन्स (एंटीकार्डियोलिपिन एंटीबॉडीज) की तुलना में बाद में दिखाई देते हैं, बाद में फ्लोरेसिन एंटीबॉडीज (आरआईएफ और एलिसा का पता लगाया जाता है) और प्रीसिपिटिन्स (आरएमपी का पता लगाया जाता है)।

भविष्य में, आरआईबीटी सकारात्मक रहता है। सिफलिस के बाद के रूपों में प्रतिक्रिया की उच्च संवेदनशीलता होती है। माध्यमिक, देर से सिफलिस, न्यूरोसाइफिलिस, जन्मजात सिफलिस के साथ, एक सकारात्मक आरआईबीटी परिणाम 95-100% मामलों में दर्ज किया जाता है। तृतीयक सिफलिस के साथ, आंतरिक अंगों के विशिष्ट घावों के साथ, तंत्रिका तंत्र, जब आरवी अक्सर नकारात्मक होता है, आरआईबीटी 98-100% मामलों में सकारात्मक परिणाम देता है।

आरआईबीटी को लंबे समय से उपदंश के लिए सबसे विशिष्ट परीक्षण के रूप में मान्यता दी गई है। साहित्य के अनुसार, आरआईबीटी की विशिष्टता 99% है, संवेदनशीलता 79 से 94% तक है। TsNIKVI के अनुसार, RIBT की संवेदनशीलता (उपदंश के सभी चरणों के लिए कुल मिलाकर) 87.7% है।

7. विधि का दायरा

सेटिंग की अवधि, उच्च लागत और श्रम तीव्रता के कारण आरआईबीटी का दायरा धीरे-धीरे कम हो रहा है। आरआईबीटी एक जटिल और महंगा विश्लेषण है जिसके लिए अत्यधिक योग्य कर्मियों और एक मछली पालने का बाड़ा की उपस्थिति की आवश्यकता होती है। इस संबंध में, हाल के वर्षों में इस पद्धति का उपयोग काफी कम हो गया है। यूएस में, इस परीक्षण का उपयोग वर्तमान में केवल अनुसंधान प्रयोगशालाओं में किया जाता है।

आरआईएफ और आरआईबीटी की जटिलता और उच्च लागत के आधार पर, सिफलिस के देर से और अव्यक्त रूपों के निदान के लिए उनका उपयोग करना समझ में आता है। आरआईबीटी सिफलिस के प्रारंभिक अव्यक्त रूपों और झूठे सकारात्मक परिणामों के विभेदक निदान में "प्रतिक्रिया-मध्यस्थ" के रूप में अपनी स्थिति बनाए रखता है। यह प्रतिक्रिया neurosyphilis के निदान में उपयोगी हो सकती है और जब अन्य सीरोलॉजिकल परीक्षण असंगत होते हैं।

RIF और RV की तुलना में RIBT बहुत बाद में सकारात्मक हो जाता है। इसलिए, इसका उपयोग उपदंश के संक्रामक रूपों के निदान के लिए नहीं किया जाता है।

आरआईबीटी, आरआईएफ की तरह, एंटीसिफलिटिक थेरेपी की प्रक्रिया में बहुत धीरे-धीरे नकारात्मक होता है। नतीजतन, यह एंटीसेफिलिटिक थेरेपी की प्रगति की निगरानी के लिए अनुपयुक्त है।

आरआईबीटी में गलत-सकारात्मक परिणाम (एफपीआर) दुर्लभ हैं और मुख्य रूप से कई ट्रेपोनमैटोस (याज, पिंटा, बेजेल) में देखे गए हैं, जो रूस में नहीं पाए जाते हैं, साथ ही कुष्ठ रोग, सारकॉइडोसिस, एसएलई, तपेदिक, सिरोसिस में भी पाए जाते हैं। यकृत और गैर-सिफलिटिक प्रकृति के कुछ अन्य दुर्लभ रोग। रोगियों की उम्र के साथ, आरआईबीटी के गलत-सकारात्मक परिणामों की संख्या बढ़ जाती है।

यदि परीक्षण सीरम में ट्रेपोनेमिकाइडल पदार्थ (उदाहरण के लिए, पेनिसिलिन, टेट्रासाइक्लिन, एरिथ्रोमाइसिन) शामिल हैं, तो आरआईबीटी गलत सकारात्मक हो सकता है, जो पेल ट्रेपोनिमा के गैर-विशिष्ट स्थिरीकरण का कारण बनता है। यह ट्रेपोनेमोसाइडल एंटीबायोटिक्स लेने वाले रोगी के कारण हो सकता है, इसलिए, परीक्षा नहीं है पिछले महीने के भीतर एंटीबायोटिक्स प्राप्त करने वाले व्यक्तियों में किया गया। आरआईबीटी के लिए रक्त की जांच एंटीबायोटिक्स और अन्य एंटीसेफिलिटिक दवाओं की समाप्ति के 2 सप्ताह से पहले नहीं की जा सकती है।

9. पेल ट्रेपोनेमा के स्थिरीकरण की प्रतिक्रिया में संशोधन

माइक्रोएनेरोस्टेटिक तकनीक के अलावा, N.M के अनुसार RIBT की एक मिश्रित सेटिंग है। ओविचिनिकोव। प्रतिक्रिया के निर्माण के दौरान अवायवीय स्थिति प्रतिक्रिया मिश्रण को मेलेंजर (ल्यूकोसाइट मिक्सर) में रखकर बनाई जाती है, जिसके दोनों सिरे रबर की अंगूठी से बंद होते हैं। मेलेंज रिएक्शन तकनीक एक वैक्यूम पंप, नाइट्रोजन और कार्बन डाइऑक्साइड के मिश्रण के साथ एक सिलेंडर और एक माइक्रोएनेरोस्टेट के साथ वितरण करना संभव बनाती है। एक बड़ी नैदानिक ​​सामग्री पर एक तुलनात्मक अध्ययन में, ऐसे परिणाम प्राप्त हुए जो क्लासिकल एनारोस्टेटिक तकनीक से कमतर नहीं हैं।

10. आरआईबीटी की विशेषताएं, फायदे और नुकसान

आरआईबीटी एक तकनीकी रूप से जटिल और महंगी निदान पद्धति है। प्रौद्योगिकी को खरगोशों के रखरखाव और परीक्षण के लिए महत्वपूर्ण धन की आवश्यकता होती है। यह समय लेने वाला परीक्षण वर्तमान में मुख्य रूप से वैज्ञानिक उद्देश्यों के लिए उपयोग किया जाता है। अधिकांश विदेशी देशों में, लगभग 40 वर्षों के लिए, आरआईबीटी व्यावहारिक रूप से नैदानिक ​​​​उद्देश्यों के लिए नहीं, बल्कि केवल शोध कार्य में उपयोग किया गया है।

प्रतिक्रिया नुकसान:

• आरआईबीटी को निकोलस स्ट्रेन के जीवित रोगजनक ट्रेपोनिमा पैलिडम के साथ काम करने की आवश्यकता है, जो खरगोशों के अनुकूलन के बावजूद मनुष्यों के लिए संक्रामक रहता है।
• प्रतिक्रिया जटिल, समय लेने वाली और महंगी है
• एक जीवशाला की आवश्यकता है
• अत्यधिक योग्य कर्मियों को प्रतिक्रिया स्थापित करने, परिणाम रिकॉर्ड करने और मछली पालने का बाड़ा बनाए रखने की आवश्यकता होती है
• परिणाम मूल्यांकन की व्यक्तिपरकता
• स्वचालन की कमी
• इस सीरोलॉजिकल विधि को मानकीकृत करने का कोई तरीका नहीं है।
• चल रही एंटीसेफिलिटिक थेरेपी की पृष्ठभूमि के खिलाफ प्रतिक्रिया लागू नहीं होती है
• इलाज को नियंत्रित करने के लिए उपयोग करने में असमर्थता। सिफलिस के रोगियों में आरआईबीटी कई वर्षों तक (और यहां तक ​​कि जीवन भर के लिए) सकारात्मक रह सकता है, भले ही पूर्ण उपचार प्राप्त किया गया हो।
• प्रतिक्रिया घातक ट्यूमर, मधुमेह, कुष्ठ रोग, ऑटोइम्यून बीमारियों, निमोनिया, गंभीर हृदय विकृति वाले रोगियों में गलत सकारात्मक परिणाम दे सकती है।

आरआईबीटी के फायदे हैं:

1) पर्याप्त रूप से उच्च संवेदनशीलता;

2) उच्च विशिष्टता।

आरआईएफ (इम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन)

इम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन (आरआईएफ) माइक्रोबियल एंटीजन का पता लगाने या एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए एक एक्सप्रेस डायग्नोस्टिक तरीका है। एक फ्लोरोसेंट सिग्नल का पता लगाने के आधार पर टेस्ट सिफलिस के लिए सबसे अच्छे परीक्षणों में से एक माने जाते हैं।

1. विधि का इतिहास

फ्लोरेसेंट ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी (FTA) को पहली बार 1957 में Deacon et al. (Deacon, Falcone and Harris) द्वारा विकसित किया गया था।

2. विधि का सिद्धांत

आरआईएफ विधि इस तथ्य पर आधारित है कि फ्लोरोक्रोमेस के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी के साथ प्रतिरक्षा सीरा के साथ इलाज किए गए ऊतक एंटीजन या रोगाणु एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप की यूवी किरणों में चमक सकते हैं। एक स्मीयर में बैक्टीरिया, इस तरह के ल्यूमिनसेंट सीरम के साथ इलाज किया जाता है, जो हरे रंग की सीमा के रूप में कोशिका की परिधि के साथ चमकता है

आरआईएफ में एंटीजन के रूप में, खरगोश ऑर्काइटिस से निकोल्स स्ट्रेन के लाइव रोगजनक पेल ट्रेपोनेमास के निलंबन का उपयोग किया जाता है, जिसे एक ग्लास स्लाइड पर सुखाया जाता है और एसीटोन के साथ तय किया जाता है। रोगी के रक्त सीरम को पीले ट्रेपोनेमा में जोड़ा जाता है और ग्लास में एसीटोन के साथ सुखाया जाता है।

धोने के बाद, तैयारी को फ्लोरेसिन के साथ लेबल किए गए मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एंटीबॉडी युक्त सीरम के साथ इलाज किया जाता है। एक बार फिर, तैयारी को धोया जाता है और फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के नीचे देखा जाता है। यदि परीक्षण सीरम में एंटी-ट्रेपोनेमल फ्लोरेसिन एंटीबॉडी होते हैं, तो ट्रेपोनेमा की एक पीली-हरी चमक देखी जाएगी।

3. आरआईएफ विधि द्वारा अनुसंधान करने की विधि

कांच की स्लाइड पर तय एंटीजन (रोगजनक ट्रेपोनिमा पैलिडम) को परीक्षण सीरम द्वारा संसाधित किया जाता है। धोने के बाद, तैयारी को फ्लोरोक्रोम के साथ लेबल किए गए फ्लोरोसेंट एंटी-ह्यूमन इम्युनोग्लोबुलिन सीरम के साथ इलाज किया जाता है। इस मामले में, परिणामी फ्लोरोसेंट कॉम्प्लेक्स (एंटी-ह्यूमन ग्लोब्युलिन + फ्लोरेसिन थियोइसोसाइनेट) मानव ग्लोब्युलिन को पेल ट्रेपोनेमा की सतह पर बांधता है, एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत पेल ट्रेपोनेमा की चमक प्रदान करता है।

एंटीजन-एंटीबॉडी परिसरों का पता लगाने के लिए, ल्यूमिनेसेंट सीरम का उपयोग किया जाता है, जो FITC के साथ संयुग्मित एंटी-प्रजाति (मानव-विरोधी) इम्युनोग्लोबुलिन का प्रतिनिधित्व करता है। फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप के तहत जांच करने पर सीरम में ट्रेपोनेमा के एंटीबॉडी की उपस्थिति ट्रेपोनेमा की चमक से निर्धारित होती है। परीक्षण गुणात्मक और अर्ध-मात्रात्मक संस्करणों में किया जाता है।

4. परिणामों के लिए लेखांकन

एक फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोप का उपयोग करके आरआईएफ परिणामों का विज़ुअलाइज़ेशन किया जाता है। परिणाम तैयारी में treponemas की चमक की डिग्री से मूल्यांकन कर रहे हैं। एंटीबॉडी की उपस्थिति में, ट्रेपोनेमा की चमक दिखाई देती है, लेकिन अगर सीरम में कोई एंटी-ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी नहीं है, तो ट्रेपोनेमा दिखाई नहीं देता है। कांच के लिए तय किए गए सूखे पीले ट्रेपोनिमा के लुमिनेसिसेंस की डिग्री "प्लस" ("-" से "++++") में इंगित की गई है। नकारात्मक परिणाम - कोई चमक या पृष्ठभूमि स्तर नहीं - 1+।

5. रोग की किस अवधि में इसका उपयोग करना बेहतर होता है

इम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन (आरआईएफ) ऊष्मायन अवधि के अंत से देर से सिफलिस तक, संक्रमण के सभी चरणों में काफी संवेदनशील है। शास्त्रीय पाठ्यक्रम में सिफलिस की प्राथमिक अवधि संक्रमण के 3-4 सप्ताह बाद शुरू होती है। संक्रमण के बाद तीसरे सप्ताह से प्राथमिक अवधि के पहले दिनों में या ऊष्मायन अवधि के अंत में भी आरआईएफ सकारात्मक हो जाता है। RIF के परिणाम सभी अवधियों में सकारात्मक रहते हैं, जिसमें देर से होने वाले रूप भी शामिल हैं।

आरडब्ल्यू की तुलना में आरआईएफ कुछ पहले सकारात्मक हो जाता है। कुछ रिपोर्टों के अनुसार, प्राथमिक सेरोनिगेटिव सिफलिस वाले 80% रोगियों में सकारात्मक RIF होता है। माध्यमिक अवधि में, आरआईएफ लगभग 100% मामलों में सकारात्मक है। यह अव्यक्त उपदंश में हमेशा सकारात्मक होता है और रोग के बाद के रूपों और जन्मजात उपदंश में 95-100% सकारात्मक परिणाम देता है।

6. संवेदनशीलता और विशिष्टता

इम्यूनोफ्लोरेसेंस रिएक्शन (आरआईएफ) उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता वाले तरीकों का एक समूह है। आरआईएफ संक्रमण के सभी चरणों में संवेदनशील होता है, ऊष्मायन की अवधि से देर से सिफलिस तक। WHO के अनुसार, प्राथमिक सिफलिस में RIF की संवेदनशीलता 70-100%, माध्यमिक और देर से सिफलिस में - 96-100%, विशिष्टता - 94-100% है। TsNIKVI के अनुसार, उपदंश के सभी रूपों में RIF की संवेदनशीलता 99.1% है।

RIF की विशिष्टता को परीक्षण सीरम के पूर्व-उपचार द्वारा एक सॉर्बेंट - अल्ट्रासोनिफाइड ट्रेपोनेमल एंटीजन के साथ बढ़ाया जा सकता है जो समूह एंटीबॉडी (RIF-abs) को बांधता है।

7. विधि का दायरा

आरआईएफ लागू होता है:

• प्रारंभिक, अव्यक्त उपदंश में एक पुष्टिकारक प्रतिक्रिया के रूप में
• पूर्वव्यापी निदान के लिए
• उपदंश के अव्यक्त रूपों और उपदंश पर शोध के गलत-सकारात्मक परिणामों के भेदभाव के लिए।
• neurosyphilis के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में।

आरआईएफ व्यापक रूप से एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में उपयोग किया जाता है, लेकिन यह नियमित उपयोग या स्क्रीनिंग के लिए अभिप्रेत नहीं है क्योंकि इसे स्थापित करना तकनीकी रूप से कठिन है। आरआईएफ करने के लिए, एक मछली पालने का बाड़ा होना या रोगजनक पीला ट्रेपोनेमा का निलंबन खरीदना आवश्यक है, जो प्रतिक्रिया की संभावना को सीमित करता है। हालांकि, हाल के वर्षों में, परीक्षण प्रणालियां घरेलू बाजार में दिखाई देने लगी हैं, जिससे एक मछली पालने का बाड़ा और रोगजनक ट्रेपोनेमा पैलिडम के अपने स्वयं के प्रयोगशाला तनाव की अनुपस्थिति में प्रतिक्रिया की जा सकती है।

8. मंचन त्रुटियों, गलत सकारात्मक और गलत नकारात्मक के स्रोत और कारण

एलपीआर जब आरआईएफ सेट करना दुर्लभ होता है (कोलेजनोज, बोरेलिओसिस के साथ)।

आरआईएफ को अभी भी सिफलिस के लिए सबसे अच्छे परीक्षणों में से एक माना जाता है, जो सेरोडायग्नोसिस का "स्वर्ण मानक" है। आरआईबीटी की तुलना में आरआईएफ को स्थापित करना आसान है,

उच्च नैदानिक ​​मूल्य के बावजूद, लाइव टी. पैलिडम का उपयोग करने की आवश्यकता, उच्च लागत और अध्ययन की अवधि आरआईएफ के रोजमर्रा के अभ्यास में व्यापक परिचय में बाधा डालती है। प्रतिक्रिया की स्थापना श्रमसाध्य है। इसके अलावा, आरआईएफ के परिणामों का मूल्यांकन व्यक्तिपरक है।

आरआईएफ के लाभऔर आरआईबीटी हैं:

1) उच्च संवेदनशीलता (विशेष रूप से आरआईएफ के लिए);

2) उच्च विशिष्टता (विशेष रूप से आरआईबीटी के लिए)।

आरआईएफ के नुकसानऔर आरआईबीटी:

1) तकनीकी जटिलता, विधियों की उच्च लागत।

2) परिणामों का व्यक्तिपरक मूल्यांकन, स्वचालन की कमी;

3) सिफलिस के रोगियों में आरआईएफ और आरआईबीटी पूर्ण उपचार प्राप्त करने के बावजूद कई वर्षों तक (और यहां तक ​​कि जीवन भर) सकारात्मक बने रह सकते हैं। इसलिए, इन प्रतिक्रियाओं का उपयोग इलाज को नियंत्रित करने के लिए नहीं किया जा सकता है।

10. विधि संशोधन

व्यवहार में, सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस के लिए, इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया के कई संशोधनों का उपयोग किया जाता है और इनका उपयोग किया गया है:

• आरआईएफ-एबीएस- सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस का सबसे संवेदनशील तरीका, यह अन्य प्रतिक्रियाओं की तुलना में पहले सकारात्मक हो जाता है (संक्रमण से तीसरे सप्ताह से);
• आरआईएफ-200(रोगी का सीरम प्रस्तुति पर 200 गुना पतला होता है) सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस के लिए एक अत्यधिक विशिष्ट विधि है।
• आरआईएफ-10(परीक्षण सीरम का 10 गुना कमजोर पड़ना) - RIF-200 की तुलना में अधिक संवेदनशील विधि।
• आरआईएफ-टीएसशराब के साथ किया गया।
• आरआईएफ-एब्स-आईजीएम- आईजीएम वर्ग के प्रारंभिक एंटीट्रेपोनेमल एंटीबॉडी का पता लगाना।

1. सबसे व्यापक संशोधन आरआईएफ-एबीएस- अवशोषण के साथ इम्यूनोफ्लोरेसेंस प्रतिक्रिया। प्रतिक्रिया स्थापित करने से पहले, क्रॉस-प्रतिक्रियाओं को बाहर करने के लिए विषय के सीरम को गैर-रोगजनक ट्रेपोनेमा के मिश्रण से समाप्त कर दिया जाता है। समूह एंटीबॉडी को अल्ट्रासाउंड द्वारा नष्ट किए गए सांस्कृतिक ट्रेपोनेमा का उपयोग करके अध्ययन किए गए सीरम से हटा दिया जाता है, जो प्रतिक्रिया की विशिष्टता को काफी बढ़ाता है। चूंकि परीक्षण सीरम का उपयोग 1:5 कमजोर पड़ने पर किया जाता है, RIF-ab अत्यधिक संवेदनशील होता है।

नैदानिक ​​​​अभ्यास में RIF-ab के उपयोग के मुख्य संकेत हैं:

• उपदंश के अव्यक्त और देर से रूपों का निदान,
• सीएसआर और आरएमपी के गलत-सकारात्मक परिणामों का पता लगाना, विशेष रूप से संदिग्ध सिफलिस वाले गर्भवती और दैहिक रोगियों में,
• रोग का पूर्वव्यापी निदान स्थापित करने के लिए।

आरआईएफ-एबीएस उपचार के परिणामों का आकलन करने में बहुत जानकारीपूर्ण नहीं है: 85% रोगियों में जिन्हें पर्याप्त एंटीसेफिलिटिक उपचार प्राप्त हुआ, आरआईएफ के सकारात्मक परिणाम कई वर्षों तक बने रहते हैं।

इस प्रतिक्रिया को सिफलिस सेरोडायग्नोसिस के लिए "स्वर्ण मानक" कहा जाता है। यह मध्यस्थता के मामलों के लिए प्रयोग किया जाता है, लेकिन एक खरगोश में 7-दिन पुराने ऑर्काइटिस से टी। पैलिडम स्ट्रेन निकोल्स का एक ताजा केंद्रित निलंबन एक विश्वसनीय परिणाम के लिए आवश्यक है, जिसे जमे हुए नहीं होना चाहिए।

2. यूएसएसआर में इसे दो संस्करणों में स्थापित किया गया था - आरआईएफ-10तथा आरआईएफ-200, यानी 10 और 200 बार टेस्ट सीरम के कमजोर पड़ने के साथ। RIF-200 - झूठे सकारात्मक परिणामों की संख्या को कम करने के लिए परीक्षण सीरम को 200 बार पतला किया जाता है। यह प्रतिक्रिया की एक उच्च विशिष्टता प्रदान करता है, लेकिन इसकी संवेदनशीलता कुछ हद तक कम हो जाती है। RIF-10 अधिक संवेदनशील है, लेकिन अक्सर RIF-200 की तुलना में गैर-विशिष्ट सकारात्मक परिणाम देता है, जो उच्च विशिष्टता की विशेषता है। RIF-10 अधिक संवेदनशील है, RIF-200 और RIF-ab अधिक विशिष्ट हैं।

RIF-200 और RIF-ab की संवेदनशीलता 84-99% अनुमानित है, और विशिष्टता 97-99% है।

3. आरआईएफ-टीएसशराब के साथ किया गया। विशिष्ट सीएनएस घावों की पहचान करने के लिए पूरे मस्तिष्कमेरु द्रव का उपयोग करके प्रतिक्रिया निर्धारित की जाती है।

4. प्रतिक्रिया आरआईएफ-एब्स-आईजीएमआईजीएम वर्ग के प्रारंभिक एंटीट्रेपोनेमल एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए प्रस्तावित। इस प्रतिक्रिया का उपयोग जन्मजात उपदंश, उपदंश के प्रारंभिक रूपों के निदान के लिए, और पुनर्संक्रमण और सेरोलेप्स के मामलों के बीच अंतर करने के लिए किया जा सकता है।

इस प्रतिक्रिया के दो संशोधन ज्ञात हैं:

- एफटीए-एबीएस-आईजीएम, मानव विरोधी फ्लोरोसेंट ग्लोब्युलिन के बजाय प्रतिक्रिया के दूसरे चरण में एक एंटी-आईजीएम संयुग्म (मानव आईजीएम के लिए फ्लोरेसिन-लेबल एंटीबॉडी) के उपयोग पर आधारित है;

- RIF-abs-IgM का रूसी संस्करण, जिसमें विशेषता है कि परीक्षण रक्त सीरम में एक शर्बत जोड़ा जाता है, IgG एंटीबॉडी को हटाता है, और RIF-ab को शेष IgM एंटीबॉडी के साथ रखा जाता है।

मुख्य संकेतआरआईएफ-एबीएस-आईजीएम के निर्माण के लिए हैं:

- बच्चे में त्वचा और श्लेष्मा झिल्ली पर जन्मजात उपदंश की प्रकट अभिव्यक्तियों की अनुपस्थिति में जन्मजात सिफलिस का सेरोडायग्नोसिस;

- सिफलिस के पुन: संक्रमण और क्लिनिकल-सीरोलॉजिकल या सीरोलॉजिकल पुनरावृत्ति का विभेदक निदान, जिसमें आरआईएफ-एबीएस-आईजीएम नकारात्मक होगा, और आरआईएफ-एब्स - पॉजिटिव;

प्रारंभिक अधिग्रहीत या जन्मजात उपदंश के लिए चिकित्सा की प्रभावशीलता का मूल्यांकन: पर्याप्त उपचार के बाद, अगले 3-6 महीनों के भीतर RIF-abs-IgM नकारात्मक हो जाता है।

इस प्रतिक्रिया का उपयोग जन्मजात सिफलिस का पता लगाने के लिए किया जा सकता है। यह ज्ञात है कि बड़े आईजीएम अणु स्वस्थ प्लेसेंटा से नहीं गुजर सकते। इसलिए, ट्रेपोनिमा पैलिडम के खिलाफ क्लास एम एंटीबॉडी बच्चे के शरीर में या तो प्लेसेंटा के बाधा कार्य के उल्लंघन के कारण दिखाई दे सकते हैं, या वे सिफलिस वाले बच्चे के शरीर द्वारा निर्मित होते हैं। IgM वर्ग के एंटीबॉडी रोग के पहले हफ्तों में पहले से ही सिफलिस वाले रोगी के रक्त में दिखाई देते हैं, और IgG वर्ग के एंटीबॉडी बाद में दिखाई देते हैं। बच्चों में जन्मजात सिफलिस के निदान में दोनों वर्गों के एंटीबॉडी का अलग-अलग निर्धारण अत्यंत उपयोगी है, क्योंकि जीवन के पहले महीने में एक बच्चे में आईजीएम वर्ग के एंटीबॉडी की उपस्थिति से संकेत मिलता है कि वे सिफलिस वाले बच्चे के शरीर द्वारा बनते हैं, जबकि केवल आईजीजी एंटीबॉडी का पता लगाने से बाद की उत्पत्ति का संकेत मिलेगा।

प्रतिक्रिया का कथन 19एस(आईजीएम)-आरआईएफ-एबीएससे बड़े 19S IgM अणुओं के जेल निस्पंदन द्वारा प्रारंभिक पृथक्करण शामिल है

छोटे 7S IgG अणुओं के अंश। केवल 19S IgM अंश वाले रक्त सीरम की RIF-ab प्रतिक्रिया में आगे का अध्ययन,

त्रुटियों के सभी संभावित स्रोतों को समाप्त करता है। लेकिन इस प्रतिक्रिया को स्थापित करने की तकनीक जटिल और समय लेने वाली है, इसके लिए विशेष उपकरण और विशेषज्ञों के प्रशिक्षण की आवश्यकता होती है।

प्रतिरक्षा आसंजन प्रतिक्रिया (RIP, TPIA - ट्रेपोनिमा पैलिडा इम्यूनोएडहेरेंस)।

यह प्रतिक्रिया 1912 में रीकेनबर्ग द्वारा वर्णित घटना के उपयोग पर आधारित है। RIP इस तथ्य पर आधारित है कि सिफलिस के रोगी के सीरम द्वारा संवेदी विषाणुजनित ऊतक ट्रेपोनेमा, पूरक और एरिथ्रोसाइट्स की उपस्थिति में एरिथ्रोसाइट्स की सतह का पालन करता है और, सेंट्रीफ्यूगेशन के दौरान, उनके साथ तलछट में ले जाया जाता है, गायब हो जाता है सतह पर तैरनेवाला।

प्रतिक्रिया को स्थापित करने के लिए निम्नलिखित सामग्रियों का उपयोग किया जाता है: परीक्षण सीरम, एंटीजन, पूरक, दाता एरिथ्रोसाइट्स, आइसोटोनिक सोडियम क्लोराइड समाधान। प्रतिजन के रूप में, निकोल्स स्ट्रेन के पेल ट्रेपोनेमा के निलंबन का उपयोग किया जाता है।

सबसे व्यापक रूप से सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस के संबंध में, इस परीक्षण का 50-60 के दशक में घरेलू और विदेशी लेखकों द्वारा अध्ययन किया गया था। डायग्नोस्टिक टेस्ट के रूप में आरआईपी के मूल्य पर डेटा परस्पर विरोधी रहा है। प्रतिक्रिया के लिए अधिकतम सटीकता की आवश्यकता होती है, क्योंकि तैयारी में परीक्षण सामग्री की अधिकता या कमी के साथ सामग्री को गलत तरीके से डालने से अविश्वसनीय परिणाम प्राप्त होते हैं।

रूस में, एल.वी. द्वारा व्यापक शोध किया गया था। साज़ोनोवा, जिन्होंने निकोल्स स्ट्रेन के रोगजनक पेल ट्रेपोनेमास के ताज़ा तैयार किए गए सस्पेंशन का उपयोग करके RIP और RIT में समान परिणाम प्राप्त किए। हालांकि, फिनोल के साथ गर्म या संरक्षित प्रतिजन के उपयोग ने प्रतिक्रिया के परिणामों को तेजी से विकृत कर दिया और प्रतिजन को अस्थिर बना दिया। RIT L.V को बदलने के लिए इस परीक्षण की सिफारिश करें। सोजोनोवा ने इसे असंभव माना।

जी.पी. Avdeeva, प्रतिजन की तैयारी में अन्य तापमान और समय की व्यवस्था का उपयोग करते हुए, RIP के अध्ययन में अलग-अलग परिणाम प्राप्त किए। उनके अनुसार, इस प्रतिक्रिया की संवेदनशीलता केसीपी और आरआईटी की संवेदनशीलता से अधिक है, लेकिन आरआईएफ से कुछ हीन है, और आरआईपी, आरआईटी और आरआईएफ की विशिष्टता करीब है।

हालांकि, आरआईपी के लिए प्रतिजन के उत्पादन रिलीज की कमी ने इस परीक्षण के व्यापक अध्ययन और अभ्यास में इसकी शुरूआत की अनुमति नहीं दी।

निष्क्रिय रक्तगुल्म की RPHA प्रतिक्रिया

निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया (RPHA)एक सामान्य सीरोलॉजिकल परीक्षण है जो प्रयोगशाला अभ्यास में दृढ़ता से निहित है। अध्ययन में काफी उच्च स्तर की दक्षता है।

1. RPHA पद्धति का इतिहास

पहली बार, G.Blumental और W.Bachman (1932) ने सिफलिस के निदान के लिए RPHA के उपयोग की सूचना दी। 1965 में, उपदंश के निदान के लिए एक अप्रत्यक्ष या निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया प्रस्तावित की गई थी। 1965 - 1967 में टी. रैटलेव द्वारा विभिन्न प्रतिजनों का उपयोग करके प्रतिक्रिया संशोधन की सूचना दी गई थी। आरपीजीए का माइक्रोमोडिफिकेशन सोख आर.एम. द्वारा प्रस्तावित किया गया था। और 1969 में सह-लेखक। पहली व्यावसायिक परीक्षण प्रणाली जापानी वैज्ञानिकों टोमिसवा एट द्वारा विकसित की गई थी। अल। 1969 में

2. आरपीजीए पद्धति का सिद्धांत

एंटीजन के साथ "लोड" एरिथ्रोसाइट्स के तैयार सजातीय निलंबन से, जब एंटीबॉडी युक्त परीक्षण सीरम जोड़ा जाता है, तो गुच्छे के रूप में अवक्षेपित होता है। परिणामी तलछट में एंटीबॉडी द्वारा "चिपके हुए" एरिथ्रोसाइट्स होते हैं, और इसे कहा जाता है "रक्तगुल्म". एरिथ्रोसाइट्स का निलंबन अग्रिम में तैयार किया जाता है और नैदानिक ​​परीक्षण प्रणालियों के हिस्से के रूप में आपूर्ति की जाती है।

लाल रक्त कोशिकाओं को चिपकाने की प्रक्रिया, जिसकी सतह पर एंटीजन मौजूद होते हैं, को "हेमग्लगुटिनेशन" कहा जाता है। बंधन विशिष्ट एंटीबॉडी (एग्लूटीनिन) की क्रिया के तहत होता है। अभिक्रिया कहलाती है "निष्क्रिय", इसलिये एरिथ्रोसाइट्स के स्वयं के प्रतिजन प्रतिक्रिया नहीं करते हैं, और एरिथ्रोसाइट्स स्वयं एक विशेष रूप से सहायक संकेतक कार्य करते हैं।

निष्क्रिय (अप्रत्यक्ष) रक्तगुल्म प्रतिक्रिया एक प्रकार की समूहन प्रतिक्रिया है जिसमें एरिथ्रोसाइट्स (ग्रीक हाइमा - रक्त से) का उपयोग एंटीजन के वाहक के रूप में किया जाता है, न कि अन्य कणों के रूप में। सामान्य तौर पर, एंटीबॉडी, रोगाणुओं या अन्य कोशिकाओं की कार्रवाई के तहत एग्लूटीनेशन प्रतिक्रिया में एक साथ चिपक जाती है और अवक्षेपित हो जाती है - जरूरी नहीं कि एरिथ्रोसाइट्स, लेकिन, उदाहरण के लिए, लेटेक्स कण, बैक्टीरिया या अन्य एंटीजन ले जाने वाले कॉर्पसकुलर कण।

सिफलिस के निदान के लिए निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया में, पीले ट्रेपोनिमा एंटीजन के साथ लेपित राम या पक्षी एरिथ्रोसाइट्स को एंटीजन के रूप में उपयोग किया जाता है। जब विशिष्ट एंटीबॉडी वाले सीरम को जोड़ा जाता है, तो एरिथ्रोसाइट्स एक साथ चिपक जाते हैं (एग्लूटिनेशन)।

आरपीएचए की प्रतिक्रिया को इम्यूनोलॉजिकल तरीकों के रूप में जाना जाता है, क्योंकि। यह एक एंटीबॉडी के साथ रोगजनक ट्रेपोनिमा पैलिडम के एंटीजन की विशिष्ट बातचीत पर आधारित है। "जाली सिद्धांत" के अनुसार एग्लूटिनेशन एंटीबॉडी अणुओं (इम्युनोग्लोबुलिन) के साथ सतह प्रतिजन अणुओं के "क्रॉस-लिंकिंग" का परिणाम है।

3. निष्क्रिय रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया का विवरण

RPHA को प्लास्टिक की गोलियों या परखनली में रोगी के रक्त सीरम के तनुकरण के साथ रखा जाता है, जिसमें एक एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिकम जोड़ा जाता है।

एरिथ्रोसाइट्स के साथ एंटीजन के संयोजन की प्रक्रिया को संवेदीकरण कहा जाता है, और इस तरह से प्राप्त कृत्रिम कॉर्पसकुलर एंटीजन को संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स कहा जाता है। एरिथ्रोसाइट डायग्नोस्टिक्स को एंटीजन द्वारा संवेदनशील एरिथ्रोसाइट्स कहा जाता है।

डायग्नोस्टिकम तैयार करने के लिए, राम या पक्षी एरिथ्रोसाइट्स (आमतौर पर चिकन) को पहले फॉर्मेलिन के साथ और फिर टैनिन के साथ इलाज किया जाता है, जो रोगजनक ट्रेपोनिमा पैलिडम (निकोल्स स्ट्रेन) या पुनः संयोजक ट्रेपोनिमा पैलिडम प्रोटीन (TpN15, TpN17, TpN15, TpN17) के अल्ट्रा-साउंड एंटीजन के साथ संवेदनशील होते हैं। टीपीएन47). सुसंस्कृत ट्रेपोनिमा पैलिडम के अल्ट्रासोनिफाइड एंटीजन के साथ संवेदनशील भेड़ एरिथ्रोसाइट्स का भी उपयोग किया जा सकता है।

केवल सीरम (प्लाज्मा का प्रयोग न करें)। हेमोलाइज्ड और बादल वाले नमूने उपयुक्त नहीं हैं। गैर-संवेदी एरिथ्रोसाइट्स एक नकारात्मक नियंत्रण के रूप में काम करते हैं (एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी की उपस्थिति को बाहर करने के लिए)। प्रस्तुतियों की प्रत्येक श्रृंखला में सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रणों का उपयोग किया जाता है।

अध्ययन किए गए रक्त सीरम और परीक्षण एरिथ्रोसाइट्स के नमूने इम्यूनोलॉजिकल टैबलेट के कुओं (कोशिकाओं) में पेश किए जाते हैं। यदि रोगी के रक्त सीरम में विशिष्ट एंटी-ट्रेपोनेमल एंटीबॉडी होते हैं, तो जब परीक्षण सीरम को एंटीजन के साथ कुएं में जोड़ा जाता है, तो एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनते हैं जो वाहक (एरिथ्रोसाइट्स) की सतह से जुड़े होते हैं। दृष्टिगत रूप से, यह लाल रक्त कोशिकाओं के ग्लूइंग द्वारा प्रकट होता है, अर्थात, रक्तगुल्म, जो नग्न आंखों को दिखाई देता है। इम्यून कॉम्प्लेक्स "एंटीबॉडी-एंटीजन-एरिथ्रोसाइट", जो धीरे-धीरे गुरुत्वाकर्षण के प्रभाव में उतरते हैं, कुएं के तल की पूरी सतह पर वितरित होते हैं और "उल्टे छतरी" की एक विशिष्ट तस्वीर बनाते हैं।

परीक्षण के नमूने में निहित एंटीबॉडी की मात्रा के आधार पर, "उलटा छाता" छवि अधिकतम से भिन्न होती है, कुएं के तल की पूरी सतह पर, मध्य में एक छोटे से क्षेत्र में, इसके सबसे निचले हिस्से में (ज्ञानोदय के साथ) केंद्र और परिधि के साथ बसे हुए एरिथ्रोसाइट्स की अधिक तीव्र अंगूठी का निर्माण)।

यदि नमूने में कोई विशिष्ट एंटीबॉडी नहीं हैं या जब प्रतिक्रिया में नियंत्रण (बरकरार) एरिथ्रोसाइट्स जोड़े जाते हैं तो प्रतिरक्षा परिसरों का निर्माण नहीं होता है। साथ ही, एरिथ्रोसाइट्स धीरे-धीरे अच्छी तरह से नीचे के सबसे निचले बिंदु पर इकट्ठा होते हैं, जो एक कॉम्पैक्ट स्पॉट या "बटन" के रूप में एक आकृति बनाते हैं, कभी-कभी केंद्र में थोड़ी सी रोशनी के साथ।

यदि मानव रक्त सीरम में एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी होते हैं, तो "छतरी" किसी भी मामले में बनेगी - परीक्षण एरिथ्रोसाइट्स और नियंत्रण एरिथ्रोसाइट्स दोनों के साथ प्रतिक्रिया में। इस मामले में, विशिष्ट एंटीट्रेपोनेमल एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए अन्य चिकित्सा तकनीकों की सिफारिश की जाती है।

प्रोज़ोन की घटना (एंटीबॉडी की अधिकता के कारण प्रतिक्रिया की असंभवता) संभव है, जो सीरम के कमजोर पड़ने से समाप्त हो जाती है।

4. निष्क्रिय रक्तगुल्म प्रतिक्रिया के परिणामों के लिए लेखांकन

आरपीजीए के परिणामों को ध्यान में रखते हुए 60-120 मिनट के बाद माइक्रोमेथोड सेट करते समय और 2-4 घंटे या अगले दिन मैक्रोवैरिएंट सेट करते समय ध्यान में रखा जाता है। बड़े (न्यूक्लियेटेड) पक्षी एरिथ्रोसाइट्स का उपयोग करते समय, एक स्पष्ट तस्वीर प्राप्त की जाती है, और परिणाम पहले की तारीख में दर्ज किए जाते हैं।

अनुमापांक (उच्च अनुमापांक TPHA ≥ 1:2 560) निर्धारित करना संभव है।

अध्ययन के परिणामों का मूल्यांकन गठित फिल्म के आकार के अनुसार 4+ प्रणाली ("-" से "++++") के अनुसार किया जाता है। जब एग्लूटिनेशन होता है, तो एरिथ्रोसाइट्स एक "छाता" के रूप में कुएं की सतह पर स्थित होते हैं, और एक नकारात्मक परिणाम के साथ, एरिथ्रोसाइट्स स्वतंत्र रूप से नीचे स्लाइड करते हैं और "बटन" के रूप में कुएं के केंद्र में तल पर जमा होते हैं। "।

RPGA के परिणामों का आम तौर पर स्वीकृत मूल्यांकन:

4+ - सकारात्मक RPHA। एक "छाता" के रूप में एग्लूटिनेटेड एरिथ्रोसाइट्स समान रूप से छेद की पूरी सतह को रेखाबद्ध करते हैं;

3+ - सकारात्मक RPHA। एरिथ्रोसाइट्स छेद की पूरी सतह को रेखाबद्ध करते हैं, लेकिन उनमें से कुछ केंद्र में "फिसल" जाते हैं। उसी समय, जमा की परिधि के साथ एक ध्यान देने योग्य अंगूठी बनती है;

2+ - कमजोर सकारात्मक RPHA। एरिथ्रोसाइट्स कुएं के निचले हिस्से के एक छोटे से क्षेत्र पर एक फिल्म बनाते हैं, जो केंद्र में ध्यान देने योग्य ज्ञान के साथ एरिथ्रोसाइट तलछट की घनी अंगूठी बनाते हैं;

1+ - अनिश्चित RPHA, एरिथ्रोसाइट्स फजी किनारों और केंद्र में एक मामूली लुमेन के साथ कुएं के तल पर एक ढीला तलछट बनाते हैं;

(-) - नकारात्मक आरपीएचए, सभी एरिथ्रोसाइट्स एक साफ आसपास की पृष्ठभूमि (बिना दानेदार अवसादन के) के खिलाफ एक कॉम्पैक्ट तलछट ("बटन" या रिंगलेट्स) के रूप में कुएं के तल पर स्थित हैं।

विदेशी अभ्यास में, आरपीजीए के परिणामों का मूल्यांकन प्रतिक्रियाशील (एग्लूटिनेट गठन के मामले में), कमजोर प्रतिक्रियाशील (यदि संरचनाएं नगण्य हैं) और गैर-प्रतिक्रियाशील (यदि एग्लूटीनेशन नहीं देखा जाता है) के रूप में किया जाता है।

प्रतिक्रिया के परिणामों के लिए लेखांकन स्वचालित रूप से विशेष विश्लेषक का उपयोग करके किया जा सकता है। गुणात्मक अध्ययन के अलावा, सभी परीक्षण प्रणालियां अनुमापांक निर्धारण के साथ मात्रात्मक विश्लेषण प्रदान करती हैं।

5. RPHA का उपयोग करना रोग के किस समय में बेहतर है

RPHA प्राथमिक अवधि के मध्य में सकारात्मक हो जाता है (संक्रमण के क्षण से 7-8 सप्ताह, एक कठिन चांस की उपस्थिति के 3-4 सप्ताह बाद) और उपचार के बाद वर्षों तक सकारात्मक रहता है।

अध्ययन किए गए सीरम (जो माध्यमिक सिफलिस की सबसे विशेषता है) में ट्रेपोनिमा के एंटीबॉडी के बहुत उच्च स्तर के साथ, टीपीएचए का एक गलत-नकारात्मक परिणाम संभव है (तथाकथित "प्रोज़ोन" घटना)।

जिन लोगों को लंबे समय से सिफलिस है, उनके रक्त में विशिष्ट एग्लूटीनिन एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है, इसलिए आरपीजीए को पुनर्संक्रमण के विभेदक निदान या संक्रामक प्रक्रिया की गंभीरता का निर्धारण करने के लिए अनुशंसित नहीं किया जा सकता है।

RPGA इलाज को नियंत्रित करने के लिए प्रयोग नहीं किया जाता है, क्योंकि। ठीक होने के कई वर्षों बाद भी सकारात्मक रह सकता है। साथ ही, एंटीबॉडी टाइटर्स में कमी की गतिशीलता की जांच, उपचार की प्रभावशीलता की निगरानी में इसे एक अतिरिक्त (आरएमपी या आरपीआर) विधि के रूप में इस्तेमाल किया जा सकता है। इसके लिए एक शर्त उसी आरपीजीए परीक्षण प्रणाली का उपयोग है जो रोगी की पहली (उपचार से पहले) परीक्षा के साथ-साथ एक ही प्रयोगशाला में अध्ययन के रूप में होती है।

6. RPHA की संवेदनशीलता और विशिष्टता

RPHA को अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट परीक्षण माना जाता है। यह प्रतिक्रिया सिफलिस के सभी रूपों में एक मूल्यवान नैदानिक ​​परीक्षण है, लेकिन यह रोग के उन्नत रूपों में विशेष रूप से संवेदनशील है। आरपीएचए की संवेदनशीलता रोग के चरण के आधार पर भिन्न होती है। प्राथमिक सिफलिस के साथ, RPHA की संवेदनशीलता 76% (और अधिक) है, द्वितीयक सिफलिस के साथ - 100% तक। अव्यक्त प्रारंभिक के साथ - 97%, देर से उपदंश के साथ - 94%, 98-100% की विशिष्टता के साथ। रोग के ताजा रूपों में कम संवेदनशीलता एग्लूटीनिन के बाद के गठन के कारण होती है।

स्टेट इंस्टीट्यूशन "TsNIKVI Roszdrav" के अनुसार, सिफलिस के विभिन्न रूपों के निदान में RPHA की संवेदनशीलता 99.4% थी। अधिकांश शोधकर्ता RPHA की 98-99% विशिष्टता पर ध्यान देते हैं।

संवेदनशीलता और विशिष्टता के संदर्भ में, RPHA हीन नहीं है, और बाद के रूपों और जन्मजात उपदंश में, यह RIF और RIBT को भी पार कर जाता है।

7. आरपीजीए पद्धति के आवेदन का दायरा

टीपीएचए का उपयोग स्क्रीनिंग और पुष्टिकरण परीक्षण दोनों के रूप में किया जा सकता है; एंटीबॉडी अनुमापांक की गणना के साथ एक अर्ध-मात्रात्मक संस्करण में इस्तेमाल किया जा सकता है। आरपीएचए, एक माइक्रोमेथोड, साथ ही एक स्वचालित माइक्रोहेमग्लुटिनेशन प्रतिक्रिया की स्थापना के लिए एक मात्रात्मक विधि विकसित की गई है।

8. RPHA की विशेषताएँ, लाभ और हानियाँ

साहित्य के अनुसार, आरपीजीए ने दुनिया के अधिकांश देशों में नैदानिक ​​​​अभ्यास में लगातार अग्रणी स्थान प्राप्त किया है। टीपीएचए विदेशों में एसटीआई क्लीनिकों में सबसे व्यापक रूप से इस्तेमाल किया जाने वाला परीक्षण है।

आरपीजीए तकनीक का प्रदर्शन करना आसान है, विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं है: इसे स्थापित करने के लिए केवल एक रक्तगुल्म प्लेट की आवश्यकता होती है। अध्ययन में अधिक समय नहीं लगता है; प्रतिक्रिया अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट है। नैदानिक ​​अभ्यास में विधि के अनुमोदन से पता चला है कि यह अत्यंत सरल, सस्ता और संवेदनशील है। एलिसा की तरह, आरपीएचए प्रदर्शन करने में आसान है, इसके लिए अत्यधिक योग्य कर्मियों और विशेष उपकरणों की आवश्यकता नहीं होती है, और इसका स्वचालन संभव है।

आरपीजीए परीक्षण के लाभ:

• स्थापित करना और व्याख्या करना आसान है,
• विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं है,
• परिणाम प्राप्त करने का समय - 45 मिनट,
• मास स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त (1:20 के कमजोर पड़ने पर सीरम के केवल 25 μl की आवश्यकता होती है),
• मानकीकरण का उच्च स्तर,
• आंतरिक नियंत्रण की उपस्थिति,
• लंबी संग्रहण और उपयोग अवधि
• स्वीकार्य मूल्य
• लेखांकन को स्वचालित करने की संभावना।

आरपीजीए के नुकसान पर भी ध्यान दिया जाना चाहिए:

• एंटी-एरिथ्रोसाइट एंटीबॉडी की उपस्थिति में गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियाओं की संभावना,
• अनुमापांक और उपदंश के चरण के सहसंबंध की कमी,
• उपदंश के प्रारंभिक चरण में बाद में सकारात्मक प्रतिक्रिया,
• शराब, नशीली दवाओं की लत वाले व्यक्तियों में झूठी सकारात्मक प्रतिक्रियाओं की संभावना,
• प्रयोगशाला में कंपन और तापमान के प्रति संवेदनशीलता।

आरआईबीटी और आरआईएफ की तुलना में आरपीजीए के फायदे हैं:

• औद्योगिक परीक्षण प्रणालियों का उपयोग,
• प्रतिक्रिया को स्वचालित करने की संभावना,
• लाइव पेल ट्रेपोनिमा के साथ काम करने की कोई जरूरत नहीं है,
• जीवशाला की आवश्यकता को समाप्त करता है।

9. आरपीएचए की सेटिंग में त्रुटियों के स्रोत और कारण, झूठे सकारात्मक और झूठे नकारात्मक परिणाम

निष्क्रिय रक्तगुल्म की प्रतिक्रिया अपेक्षाकृत सरल अध्ययन है; इसे करते समय, डायग्नोस्टिकम निर्माताओं की सभी सिफारिशों और क्लिनिकल डायग्नोस्टिक प्रयोगशाला में काम के नियमों का पालन करना आवश्यक है। की गई गलतियाँ प्रतिक्रिया के झूठे-नकारात्मक और झूठे-सकारात्मक दोनों परिणामों की उपस्थिति और पंजीकरण का कारण बन सकती हैं। आरपीजीए के झूठे सकारात्मक परिणाम मानव कारक और जैविक कारकों के प्रभाव के कारण हो सकते हैं।

गलत सकारात्मक परिणाम प्राप्त हो सकते हैं

• गैर-वैनेरियल ट्रेपोनामेटोस वाले रोगियों के रक्त सीरम के अध्ययन में,
• रूमेटाइड फैक्टर के कारण
• विभिन्न प्रणालीगत या दवा-प्रेरित और दवा-प्रेरित चयापचय विकारों के दौरान बनने वाले ट्रेपोनेमल एंटीजन के साथ एंटीबॉडी के क्रॉस-रिएक्शन के कारण,
• इम्युनोग्लोबुलिन के असामान्य स्तर के कारण;
• नवजात शिशुओं में - मां के आईजीजी के लिए आईजीएम एंटीबॉडी के भ्रूण या बच्चे के शरीर में गठन के कारण, जो परिणामों की व्याख्या और जन्मजात सिफलिस के निदान को जटिल बनाता है।

अध्ययन पर मानव भागीदारी के कारक के प्रभाव के कारण होने वाली त्रुटियां:

• दूषित माइक्रोप्लेट
• गलत पाइपिंग
• प्रयोगशाला में कंपन
• प्रयोगशाला में हवा का तापमान तापमान सीमा के बाहर है: 18-25 डिग्री

आरपीजीए की सेटिंग में सबसे आम तकनीकी त्रुटियां, जिसके कारण अविश्वसनीय परिणाम सामने आते हैं, उनमें शामिल हैं:

• सामग्री का गलत पतलापन,
• तापमान उल्लंघन,
• अभिकर्मकों के ऊष्मायन के समय का उल्लंघन,
• टेबलेट पर अभिकर्मक लगाने की शर्तों का उल्लंघन,
• आवश्यक के साथ समाधान के पीएच की असंगति,
• प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ का संदूषण।

आरपीजीए की स्थापना करते समय निम्नलिखित तकनीकी बिंदु भी त्रुटियों का स्रोत हो सकते हैं:

• नियंत्रण रक्त सीरा की प्रतिक्रिया के निर्माण से बहिष्करण;
• उपयोग से पहले अपर्याप्त मिश्रण के कारण डायग्नोस्टिकम में एरिथ्रोसाइट्स की असमान एकाग्रता;
• निदान और नियंत्रण एरिथ्रोसाइट्स के भंडारण के नियमों और शर्तों का उल्लंघन; एक्सपायर्ड किट का उपयोग;
• प्रतिक्रियाओं को स्थापित करते समय दूषित टेस्ट ट्यूब, पिपेट टिप्स, पिपेट, इम्यूनोलॉजिकल प्लेट्स, समाधान का उपयोग;
• रक्त सीरम के नमूने के प्रारंभिक कमजोर पड़ने में गलतियाँ;
• लगातार दोहरा तनुकरण करने में अपर्याप्त संपूर्णता;
• तापमान शासन और ऊष्मायन समय का पालन न करना;
• ऊष्मायन के दौरान बाहरी कंपन और इम्यूनोलॉजिकल प्लेट के हिलने की उपस्थिति;
• आरपीजीए की स्थापना की विधि का उल्लंघन, नियंत्रण एरिथ्रोसाइट्स के साथ अध्ययन करने से इनकार करने में व्यक्त किया गया।

गैर-विशिष्ट एरिथ्रोसाइट एग्लूटिनेशन (RPHA) पैदा करने में सक्षम थक्कारोधी वाले रक्त प्लाज्मा के उपयोग से ऐसे परिणाम हो सकते हैं जिनकी व्याख्या नहीं की जा सकती है।

झूठे सकारात्मक और झूठे नकारात्मक परिणामों की संख्या अन्य सीरोलॉजिकल परीक्षणों की तुलना में कम है। RPHA की सेटिंग में LPR दुर्लभ हैं और ट्रेपोनमैटोस (यॉ, बेजेल, पिंट) के साथ संभव है। इसके अलावा, संक्रामक मोनोन्यूक्लिओसिस, बोरेलीओसिस, कुष्ठ रोग, कोलेजनोज, लीवर सिरोसिस, लिम्फोसारकोमा और गर्भवती महिलाओं में भी मादक पदार्थों की लत में झूठे-सकारात्मक परिणाम दर्ज किए गए (कुल 1% से कम)।

प्रतिक्रिया के गलत-नकारात्मक परिणाम IgM और IgG एंटीबॉडी के बीच प्रतिस्पर्धा के कारण हो सकते हैं। एचआईवी संक्रमित रोगियों में गलत-नकारात्मक परिणाम भी संभव हैं।

10. आरपीएचए पद्धति में संशोधन

आरपीजीए सेटिंग के सूक्ष्म और स्थूल संशोधन हैं, अर्थव्यवस्था, सेटिंग की गति और परिणामों को ध्यान में रखते हुए पहले वाले का अधिक बार उपयोग किया जाता है।

इसके अलावा, छवि विश्लेषण के लिए एक स्वचालित नैदानिक ​​​​जटिल विकसित किया गया था, जिसने परिणामों का मात्रात्मक स्वचालित मूल्यांकन करना और प्राप्त आंकड़ों की व्याख्या में व्यक्तिपरकता को समाप्त करना संभव बना दिया। हार्डवेयर-सॉफ्टवेयर कॉम्प्लेक्स छवि को पहचानता है, डेटा को प्रोसेस करता है और सापेक्ष इकाइयों में उत्तर देता है।

आरपीजीए परिणामों की रिकॉर्डिंग को स्वचालित करने के लिए पाठकों और स्वचालित विश्लेषक का भी उपयोग किया जाता है।

टीपीपीए (ट्रेपोनिमा पैलिडम पार्टिकल एग्लूटिनेशन) - ट्रेपोनिमा पैलिडम के प्रति एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए कृत्रिम कणों का समूहन परीक्षण

टीपीपीए परीक्षण का संक्षिप्त विवरण

वर्तमान में, निष्क्रिय रक्तगुल्म विधि का एक संशोधन - TPRA (ट्रेपोनिमा पैलिडम कण समूहन) का उपयोग सिफिलिस के निदान के लिए भी किया जाता है, जिसमें जिलेटिन कणों पर पीला ट्रेपोनिमा एंटीजन तय होता है। चूंकि कृत्रिम बहुलक कणों में अपने स्वयं के एंटीजन नहीं होते हैं जो जैविक गतिविधि का निर्धारण करते हैं, इसलिए उनके आधार पर सिफलिस सेरोडायग्नोसिस किट को अधिक उन्नत माना जाता है। जैविक रूप से निष्क्रिय कृत्रिम कणों का उपयोग आमतौर पर अन्य वाहकों के साथ देखे जाने वाले गैर-विशिष्ट समूहन को कम करता है।

टीपीपीए का उपयोग रोगजनक ट्रेपोनेमा के विभिन्न प्रकारों और उप-प्रजातियों के एंटीबॉडी के सीरोलॉजिकल निदान के लिए किया जाता है। इस परीक्षण का उपयोग सिफलिस, पिंट, बेजेल और यॉज़ के प्रेरक एजेंटों के एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए किया जा सकता है।

अध्ययन प्रक्रिया बहुत सरल है और विशेष उपकरण की आवश्यकता नहीं है - मानक "यू" आकार के माइक्रोप्लेट का उपयोग किया जाता है। यह परीक्षण रोगी के रक्त सीरम में पाए जाने वाले टी. पैलिडम एंटीजन, एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील जिलेटिन कणों के एकत्रीकरण पर आधारित है।

टीपीपीए एक पुष्टिकारक ट्रेपोनेमल परीक्षण है जिसका उपयोग कम संख्या में नमूनों और बड़े पैमाने पर स्क्रीनिंग दोनों के लिए आसानी से किया जा सकता है। विदेश में TPPA का उपयोग एक पुष्टिकारक परीक्षण के रूप में किया जाता है और microhemagglutination test MHA-TP (T. पैलिडम के एंटीबॉडी के लिए microhemagglutination परख) को बदलने के लिए किया जाता है।

TPPA परीक्षण की संवेदनशीलता 85% और 100% के बीच है, जबकि विशिष्टता 98% और 100% के बीच है। प्राथमिक सिफलिस के लिए TPPA की संवेदनशीलता 88% है, माध्यमिक और देर से गुप्त सिफलिस के लिए 98% -100%।

यदि टीपीपीए का उपयोग सिफलिस के निदान के लिए किया जाता है, तो अन्य प्रकार के ट्रेपोनिमा (जैसे टी। पैलिडम एंडेमिकम, परटेन्यू, या कैरेटियम) के प्रति एंटीबॉडी गलत सकारात्मक परिणाम दे सकते हैं। परीक्षण शुरू करने से पहले इन एंटीबॉडी को सीरम के नमूनों से निकालने के कई तरीके हैं।

टीपीपीए परीक्षण का सिद्धांत

TPPA मानव सीरम या प्लाज्मा में जिलेटिन कणों के लिए एक निष्क्रिय समूहन विधि है। रोगजनक ट्रेपोनिमा के लिए एंटीबॉडी युक्त सीरम अल्ट्रासाउंड के अधीन निकोल्स स्ट्रेन के पेल ट्रेपोनेमा के प्रतिजन के साथ संवेदनशील जिलेटिन कणों के साथ प्रतिक्रिया करता है। प्रतिक्रिया के परिणामस्वरूप, माइक्रोटिटर प्लेट के कुएं में एग्लूटिनेटेड जिलेटिन कणों की एक चिकनी फिल्म बनती है।

यदि एंटीबॉडी मौजूद नहीं हैं, तो कण प्लेट के कुएं के नीचे जमा हो जाते हैं, जिससे गैर-एग्लुटिनेटेड कणों का एक कॉम्पैक्ट "बटन" बनता है। गैर-संवेदीकृत जिलेटिन कणों वाले नियंत्रण कुओं को भी प्रत्येक सीरम के लिए ऐसा कॉम्पैक्ट "बटन" दिखाना चाहिए, यानी कोई समूहन नहीं।

टीपीपीए परीक्षण का आवेदन

टीपीआरए एक सार्वभौमिक परीक्षण है जिसे उपदंश (स्क्रीनिंग) के लिए जनसंख्या समूहों की अनिवार्य निवारक परीक्षा और विशेष त्वचाविज्ञान संस्थानों में समान रूप से सफलतापूर्वक उपयोग किया जा सकता है। TPPA परीक्षण का लाभ इसकी उच्च संवेदनशीलता है, जो शास्त्रीय परीक्षणों से कम नहीं है, जो हाल ही में सिफलिस सेरोडायग्नोसिस के लिए "स्वर्ण मानक" थे। परीक्षण के अन्य लाभों में उच्च प्रजनन क्षमता, साथ ही प्रतिक्रिया को स्थापित करने की सरलता और गति शामिल है।

TPPA परीक्षण का उपयोग सिफलिस के लिए गैर-ट्रेपोनेमल स्क्रीनिंग परीक्षणों के सकारात्मक परिणामों की पुष्टि करने के लिए किया जाता है, जैसे कि VDRL परीक्षण, और नकारात्मक गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षणों वाले रोगियों का मूल्यांकन करने के लिए, जिनमें देर से उपदंश के लक्षण या लक्षण दिखाई देते हैं। उपदंश के लिए एकमात्र जांच परीक्षण के रूप में TPPA के उपयोग की अनुशंसा नहीं की जाती है।

इसके अलावा, न्यूरोसाइफिलिस के निदान में मस्तिष्कमेरु द्रव के नमूनों की जांच के लिए TPPA समूहन परीक्षण का उपयोग किया जा सकता है। इस मामले में, अन्य सीरोलॉजिकल परीक्षणों की तरह, परिणामों की व्याख्या रोग के अन्य संकेतकों और लक्षणों के साथ अनिवार्य संयोजन के साथ की जानी चाहिए।

टीपीपीए परीक्षा परिणाम

परिणाम का मूल्यांकन "प्लसस" की प्रणाली के अनुसार किया जाता है - (-) से (2+) तक। परीक्षण के परिणाम नग्न आंखों को दिखाई देते हैं और निम्नानुसार व्याख्या की जाती है:

एग्लूटिनेशन की डिग्री	परीक्षा अंक	व्याख्या
एग्लूटिनेटेड कण समान रूप से प्लेट के निचले हिस्से को अच्छी तरह से लाइन करते हैं	2+	सकारात्मक
असमान बाहरी मार्जिन और परिधीय समूहन के साथ महत्वपूर्ण बड़ी अंगूठी	1+	सकारात्मक
कण केंद्र में एक अंतराल और चिकनी चिकनी के साथ एक कॉम्पैक्ट रिंग बनाते हैं बाहरी सीमाएँ	±	कमजोर सकारात्मक
कण केंद्र में एक मामूली अंतर और एक चिकनी बाहरी सीमा के साथ कुएं के केंद्र में एक कॉम्पैक्ट रिंग बनाते हैं।	–	नकारात्मक
कण एक चिकनी बाहरी सीमा के साथ छेद के केंद्र में एक "बटन" बनाते हैं	–	नकारात्मक

उपरोक्त विवरण के अनुपालन का निर्धारण करने के लिए परिणाम रिकॉर्ड किए जाते हैं। एक अनिश्चित परिणाम (±) दिखाने वाले नमूनों का पुन: परीक्षण किया जाना चाहिए। इस घटना में कि एक नमूना कई TPPA परीक्षणों में एक अनिश्चित परिणाम दिखाता है, अन्य तरीकों का उपयोग करके एक अध्ययन करने की सिफारिश की जाती है।

विश्लेषण के परिणामों को अलग-अलग नहीं माना जाना चाहिए। उदाहरण के लिए, संक्रमण के प्रारंभिक चरण में एंटीबॉडी की संख्या अभी भी बहुत कम है, जिसके परिणामस्वरूप TPPA और कई अन्य तरीकों में संवेदनशीलता की कमी होती है। इसलिए, यदि सिफलिस का संदेह है, भले ही परीक्षण के परिणाम नकारात्मक हों, तो नमूनों की फिर से जांच की जानी चाहिए। निदान करने के लिए, रोगी के नैदानिक ​​​​लक्षणों, नैदानिक ​​​​इतिहास और अन्य डेटा को ध्यान में रखना आवश्यक है।

जैसा कि TPHA परीक्षण में होता है, यदि सीरम के नमूने में बहुत अधिक एंटीबॉडी टिटर होता है, तो TPPA के लिए प्रोज़ोन घटना और एक गलत नकारात्मक परिणाम देखा जा सकता है।

एलिसा - एलिसा

एंजाइम इम्यूनोएसे (एलिसा; एंजाइम लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट एसे, एलिसा) संक्रामक रोगों के सीरोलॉजिकल डायग्नोसिस के लिए कई तरीकों में से एक है। सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस में एंजाइम इम्यूनोएसे (एलिसा) वर्ग एम, जी और ए (आईजीएम, आईजीजी, आईजीए) के एंटीबॉडी के लिए पेल ट्रेपोनिमा के एंटीजन के खिलाफ एक परीक्षण है। मस्तिष्कमेरु द्रव के साथ एलिसा करना संभव है।

वासरमैन प्रतिक्रिया और अन्य कार्डियोलिपिन परीक्षणों के बजाय व्यवहार में एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) की शुरूआत ने उपदंश के प्रयोगशाला निदान की गुणवत्ता में काफी सुधार किया है। इस पद्धति का एक महत्वपूर्ण लाभ अनुसंधान प्रक्रिया को स्वचालित करने की संभावना है, जो मानव कारक के प्रभाव को कम करता है।

1. एलिसा पद्धति का इतिहास

एक ठोस-चरण वाहक की सतह पर एंजाइम इम्यूनोएसे के मूल सिद्धांत ई. एंग्वार एट अल द्वारा विकसित किए गए थे। (1971), बी. वैन वेमन और ए. शूर्स (1971)। उनके द्वारा विकसित एंजाइम इम्यूनोएसे को पहली बार 1975 में जे. वेल्डकैंप और ए. विसेर द्वारा उपदंश के निदान के लिए प्रस्तावित किया गया था, जिन्होंने इस स्वचालित परीक्षण की क्षमता की सराहना की थी। 1980 के दशक में सिफलिस के निदान में एलिसा का व्यापक रूप से उपयोग किया जाने लगा, जब नैदानिक ​​परीक्षण विकसित किए गए और प्रमाणित किए गए और परीक्षण विधियों को मानकीकृत किया गया। यूएसएसआर में, सिफलिस के निदान के लिए एलिसा की तकनीक वीएन बेदनोवा, एवी बाबी और एवी कोत्रोव्स्की (1982, 1983) द्वारा विकसित की गई थी।

2. एलिसा पद्धति का सिद्धांत

एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) प्रतिक्रिया तंत्र के अनुसार आरआईएफ के करीब है (समान एंटीबॉडी का पता लगाया जाता है)। एंजाइम इम्यूनोएसे प्रतिक्रिया को सिफिलिस वाले रोगी के एंटीबॉडी के साथ ट्रेपेनेमा पैलिडम एंटीजन की अत्यधिक विशिष्ट बातचीत के आधार पर एक इम्यूनोलॉजिकल प्रतिक्रिया के रूप में वर्गीकृत किया जाता है।

सिफिलिडोलॉजिकल अभ्यास में, एलिसा का अप्रत्यक्ष रूप मुख्य रूप से उपयोग किया जाता है। सबसे अधिक उपयोग किए जाने वाले अप्रत्यक्ष प्रतिक्रिया संस्करण का सिद्धांत इस प्रकार है। एक पॉलीस्टायरीन प्लेट के कुओं की सतह पर, प्रतिरक्षा परिसरों को तय किया जाता है, जो एक रोगी के एंटीबॉडी के साथ सिफिलिस के साथ पेल ट्रेपोनिमा के एंटीजन के साथ बातचीत के दौरान बनते हैं। उसके बाद, विशिष्ट संयुग्मों और उपयुक्त सब्सट्रेट-क्रोमोजेनिक एडिटिव्स का उपयोग करके एक रंग प्रतिक्रिया में उनका पता लगाया जाता है।

परीक्षण करने की प्रक्रिया इस प्रकार है: रोगी के सीरम को एक ठोस-चरण वाहक पर रखा जाता है, जिसमें एंटीजन जुड़ा होता है। इसमें एंटीबॉडी की उपस्थिति में वाहक की सतह पर एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स बनता है। प्रतिक्रिया के परिणामों को "प्रकट" करने के लिए, एंजाइम मार्करों के साथ मानव आईजी संयुग्मित एंटी-प्रजाति एंटीबॉडी का उपयोग किया जाता है। एक सकारात्मक प्रतिक्रिया के मामले में, एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स से जुड़ा एंजाइम सिस्टम में जोड़े गए सब्सट्रेट को विघटित कर देता है, जिसके परिणामस्वरूप अलग-अलग तीव्रता के रंग के धुंधलापन का विकास होता है।

प्रतिक्रिया में, सब्सट्रेट के साथ एंजाइम की रंग प्रतिक्रिया के अनुसार, ठोस चरण पर एजी और एटी के परिसर का निर्धारण एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी का उपयोग करके किया जाता है।

प्रतिक्रिया में, एंजाइम-लेबल एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी का उपयोग करके ठोस चरण पर लगाए गए एंटीजन और एंटीबॉडी के परिसर का निर्धारण किया जाता है।

एलिसा विभिन्न वर्गों के सीरम आईजी का पता लगाने की संभावना प्रस्तुत करता है। बाजार में ऐसे सिस्टम हैं जो आपको अलग-अलग आईजीएम और आईजीजी और कुल एंटीबॉडी निर्धारित करने की अनुमति देते हैं।

एलिसा के लिए उपयोग किए जाने वाले विशिष्ट प्रतिजनों का एक अलग मूल हो सकता है:

अल्ट्रा आवाज- वे अल्ट्रासाउंड या अन्य विधि द्वारा जीवाणु कोशिका टी. पैलिडम के विनाश के परिणामस्वरूप प्राप्त होते हैं;

पुनः संयोजक- वे आनुवंशिक इंजीनियरिंग प्रौद्योगिकियों द्वारा एक जीवाणु कोशिका (उदाहरण के लिए, एस्चेरिचिया कोलाई ई. कोली) के जीनोम में एक निश्चित टी.पैलिडम एंटीजन के संश्लेषण के लिए जिम्मेदार जीन को पेश करके प्राप्त किए जाते हैं, जिसके बाद जीवाणु द्रव्यमान की वृद्धि होती है। उत्पादक सूक्ष्मजीव, इन कोशिकाओं का विनाश, प्रतिजन का अलगाव और शुद्धिकरण;

पेप्टाइड- टी.पैलिडम प्रोटीन के एंटीजेनिक एपिटोप्स के अनुक्रमिक रासायनिक संश्लेषण के परिणामस्वरूप प्राप्त किया गया।

शरीर प्रतिजन अणु के लगभग किसी भी हिस्से में एंटीबॉडी बनाने में सक्षम है। एक सामान्य प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया में, यह आमतौर पर नहीं होता है। एक प्रोटीन प्रतिजन से अलग किए गए एक या एक से अधिक इम्युनोजेनिक पेप्टाइड्स में एक विशेष प्रतिजनता होती है, और अधिकांश एंटीबॉडी विशेष रूप से उनके लिए बनते हैं। वे सबसे तीव्र प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया विकसित करते हैं। एलिसा में सबसे अधिक जानकारीपूर्ण ने 15 kD, 17 kD और 47 kD के आणविक भार के साथ पेल ट्रेपोनिमा के प्रोटीन के प्रतिरक्षी क्षेत्रों को दिखाया। निकोलस स्ट्रेन के रोगजनक ट्रेपोनेमा के डिटर्जेंट एक्सट्रैक्ट या सोनिकेट को एंटीजन के रूप में इस्तेमाल किया गया था।

3. विधि द्वारा अनुसंधान करने की विधि

विधि का सिद्धांत एक सब्सट्रेट के साथ रंग प्रतिक्रिया का उपयोग करके एक एंजाइम (पेरोक्सीडेज) के साथ लेबल किए गए एंटीग्लोबुलिन एंटीबॉडी के साथ ठोस चरण (एक प्लास्टिक प्लेट के कुओं की सतह) पर adsorbed एक विशिष्ट एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स की पहचान करना है। स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिक रूप से परिमाणित।

पॉलीस्टायरीन प्लेट के कुओं को संवेदनशील बनाने के लिए इस्तेमाल किए जाने वाले एंटीजन हो सकते हैं:

• लाइसेट- अल्ट्रासाउंड द्वारा पेल ट्रेपोनिमा के विनाश के परिणामस्वरूप प्राप्त;
• पेप्टाइड- पेल ट्रेपोनेमा के प्रोटीन के टुकड़ों के रासायनिक संश्लेषण के परिणामस्वरूप प्राप्त हुआ और रोगज़नक़ के मूल प्रोटीन के समान एंटीजेनिक प्रतिक्रिया हुई;
• पुनः संयोजक- जेनेटिक इंजीनियरिंग विधियों का उपयोग करके प्राप्त किया गया, जिसमें पेल ट्रेपोनिमा के समान एंटीजेनिक निर्धारक होते हैं।

सिफिलिडोलॉजिकल अभ्यास में, एलिसा का एक अप्रत्यक्ष रूप आमतौर पर उपयोग किया जाता है।

4. परिणामों के लिए लेखांकन

एलिसा में, एंटीजन-एंटीबॉडी प्रतिक्रिया की कल्पना करने के लिए, एक सब्सट्रेट के साथ एक एंजाइम प्रतिक्रिया (क्षारीय फॉस्फेट या हॉर्सरैडिश पेरोक्सीडेज) का उपयोग किया जाता है, जो इसका रंग बदलता है। रंग की तीव्रता प्रतिक्रिया की सकारात्मकता ("-" से "++++") निर्धारित करती है। एलिसा के परिणामों का मूल्यांकन 4-बिंदु प्रणाली पर या 492 एनएम के तरंग दैर्ध्य पर विशेष पाठकों (जैसे मल्टीस्कैन) पर प्राप्त ऑप्टिकल घनत्व के डिजिटल संकेतकों के रूप में किया जा सकता है। इसलिये परिणामों का मूल्यांकन स्पेक्ट्रोफोटोमेट्रिकल रूप से किया जाता है, इसमें व्यक्तिपरक व्याख्या शामिल नहीं है।

5. रोग की किस अवधि में इसका उपयोग करना बेहतर होता है

एलिसा सकारात्मकता की शर्तें - संक्रमण के चौथे सप्ताह से। एलिसा (साथ ही आरआईएफ) के परिणाम प्राथमिक अवधि के पहले दिनों में या ऊष्मायन के अंत में सकारात्मक हो जाते हैं और सभी अवधियों में सकारात्मक बने रहते हैं। सिफलिस के शुरुआती निदान में एलिसा विशेष रूप से मूल्यवान है - रोग के ऊष्मायन अवधि के अंत में पहले से ही सकारात्मक एंटीबॉडी परिणाम प्राप्त किए जा सकते हैं (यानी, संक्रमण के 4-6 सप्ताह बाद)।

6. संवेदनशीलता और विशिष्टता

एलिसा एक अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट परीक्षण है, जो इसका लाभ है। प्रतिक्रिया तंत्र, संवेदनशीलता और विशिष्टता के संदर्भ में एलिसा RIF, tk के करीब है। दोनों प्रतिक्रियाओं में समान एंटीबॉडी भाग लेते हैं। अधिकांश शोधकर्ता रोग के सभी चरणों में उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता पर ध्यान देते हैं। G. A. Dmitriev के अनुसार, एलिसा के विभिन्न रूपों की संवेदनशीलता 98-100% तक पहुंच जाती है, और विशिष्टता 96-100% है। TsNIKVI के अनुसार, सिफलिस के लिए एलिसा की संवेदनशीलता 99.1% है (रूसी संघ के आदेश संख्या 87 एम 3)।

ठोस-चरण एलिसा (एंजाइम-लिंक्ड इम्यूनोसॉर्बेंट परख, एलिसा) संस्करण सबसे संवेदनशील सीरोलॉजिकल परीक्षणों में से एक है, जो एंटीबॉडी के 0.0005 μg/ml और एंटीजन के 0.000005 μg/ml का पता लगाने की अनुमति देता है।

7. विधि का दायरा

गर्भवती महिलाओं, संपर्क व्यक्तियों, दाताओं और जोखिम समूहों के प्रतिनिधियों की जांच करते समय विधि का उपयोग करने की सिफारिश की जाती है। एलिसा का उपयोग स्क्रीनिंग और पुष्टिकरण परीक्षण दोनों के रूप में किया जा सकता है। अपने इतिहास के अपेक्षाकृत कम समय में, एलिसा एक सांकेतिक परीक्षण से एक पुष्टिकारक परीक्षण में विकसित हुआ है। सिफलिस के निदान में, परीक्षण का उपयोग विभिन्न गैर-ट्रेपोनेमल परीक्षणों और टीपीएचए का उपयोग करके सकारात्मक परिणाम दिखाने वाले नमूनों के लिए एक पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में भी किया जाता है।

एलिसा पद्धति का उपयोग मात्रात्मक रूप से सकारात्मकता, या प्रतिक्रियाशीलता के सूचकांक की गणना के साथ किया जा सकता है, जो आपको नमूने में एंटीबॉडी के स्तर का मूल्यांकन करने की अनुमति देता है।

वर्तमान में, रूस में, सिफलिस के निदान के लिए एंजाइम इम्युनोसे का उपयोग 26 मार्च, 2001 को रूसी संघ के स्वास्थ्य मंत्रालय के आदेश संख्या 87 के आदेश द्वारा नियंत्रित किया जाता है, "सिफलिस के सीरोलॉजिकल निदान में सुधार पर" (परिशिष्ट संख्या। 1 "सिफलिस के लिए स्क्रीनिंग और डायग्नोस्टिक टेस्ट सेट करना")। आदेश में, आरएसके को एलिसा और आरपीएचए के साथ सेरोरिएक्शन्स (एसएसआर) के परिसर में बदलने की योजना है।

8. मंचन त्रुटियों, गलत सकारात्मक और गलत नकारात्मक के स्रोत और कारण

एंजाइम इम्यूनोएसे एक जटिल बहु-चरण अध्ययन है, जिसमें डायग्नोस्टिक किट के निर्माताओं की सभी सिफारिशों, अध्ययन में उपयोग किए जाने वाले उपकरणों को समायोजित करने और कॉन्फ़िगर करने के नियमों का सख्ती से पालन करना आवश्यक है।

एलिसा की स्थापना करते समय निम्नलिखित बिंदु त्रुटियों का स्रोत हो सकते हैं:

हाइपरलिपिडेमिक, हेमोलाइज्ड रक्त सीरम या बैक्टीरिया के विकास के संकेतों के साथ नमूनों की प्रतिक्रिया में एक अध्ययन;

जैविक सामग्री के नमूने के दो बार या अधिक ठंड का अभ्यास न करें, यदि आवश्यक हो, पुन: परीक्षा, डुप्लिकेट ट्यूब से सीरम का उपयोग करें;

इम्युनोसॉरबेंट और धुलाई समाधान के भंडारण के नियमों और शर्तों का उल्लंघन; एक्सपायर्ड टेस्ट किट का इस्तेमाल;

अन्य डायग्नोस्टिक किट से प्रतिक्रिया घटकों का अनुप्रयोग;

प्रतिक्रिया चरणों के समय का उल्लंघन;

प्रतिक्रिया चरणों के दौरान इम्यूनोलॉजिकल प्लेट के कुओं को सुखाना;

क्रोमोजेन और सब्सट्रेट के मिश्रण की तैयारी के लिए प्लास्टिक व्यंजन (प्लास्टिक ट्रे) का पुन: उपयोग;

उपयोग किए गए उपकरणों (वॉशर और स्पेक्ट्रोफोटोमीटर) के संचालन मापदंडों के मेट्रोलॉजिकल नियंत्रण की आवृत्ति का अनुपालन नहीं करना;

प्रतिक्रियाओं की स्थापना करते समय दूषित प्रयोगशाला कांच के बने पदार्थ का उपयोग: फ्लास्क, मापने वाले सिलेंडर, टेस्ट ट्यूब, पिपेट, पिपेट टिप्स;

जैविक सामग्री के नमूनों के कमजोर पड़ने के प्रदर्शन में अपर्याप्त संपूर्णता;

टैबलेट के संबंधित कुएं में जैविक सामग्री का एक नमूना पेश करते समय त्रुटियां;

अध्ययन परिणामों को पंजीकरण लॉग, अध्ययन प्रोटोकॉल या उत्तर प्रपत्र में स्थानांतरित करते समय त्रुटियां।

डायग्नोस्टिक टेस्ट किट के उपयोग के लिए निर्देशों की सिफारिशों का सावधानीपूर्वक कार्यान्वयन, पिपेट डिस्पेंसर और स्वचालित उपकरणों की सटीकता का नियमित सत्यापन, आंतरिक सकारात्मक और नकारात्मक नियंत्रणों का उपयोग अत्यधिक प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य एलिसा परिणाम प्राप्त करने की अनुमति देता है।

9. विशेषताएं, फायदे और नुकसान

एलिसा अपनी सादगी, प्रजनन क्षमता और उपलब्धता के कारण सिफलिस सेरोडायग्नोसिस के आधुनिक, आशाजनक तरीकों को संदर्भित करता है। एलिसा द्वारा एंटीबॉडी का पता लगाना एक आदर्श निदान पद्धति है जो बड़ी संख्या में नमूनों की एक साथ जांच के लिए उपयुक्त है। इसके फायदों के कारण इसने सभी देशों में लोकप्रियता हासिल की है।

एलिसा अनुसंधान की तकनीक वाणिज्यिक नैदानिक ​​परीक्षण किट के निर्माताओं की सभी सिफारिशों और अनुसंधान प्रक्रिया की संपूर्णता के अनुपालन के लिए प्रदान करती है। एलिसा में अनुसंधान करने के लिए अतिरिक्त विशेष उपकरण खरीदना आवश्यक है। आरएमपी, आरपीआर और आरपीजीए की तुलना में सेटिंग तकनीक में अधिक समय लगता है।

कई चरणों या संपूर्ण प्रक्रिया के स्वचालन की उपस्थिति आपको एक साथ अध्ययन के मानकीकरण के उच्च स्तर के साथ जैविक सामग्री के नमूनों की एक बड़ी संख्या की जांच करने की अनुमति देती है, परिणामों के मूल्यांकन में व्यक्तिपरक तत्व को कम करती है, निश्चित अध्ययन प्रोटोकॉल को संग्रहीत करने की संभावना, जो अध्ययन डेटा को संग्रहीत करना और पूर्वव्यापी विश्लेषण के लिए उन्हें फिर से संदर्भित करना संभव बनाता है।

लाभ:

• सिफलिस के प्रेरक एजेंट के लिए आईजीएम और आईजीजी एंटीबॉडी के विभेदित और कुल निर्धारण को सक्षम करता है।
• उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता 100% तक पहुंच रही है,
• reproducibility
• स्वचालन की संभावनाएं

एलिसा के लाभों में अधिकांश शोधकर्ताओं द्वारा उल्लेखित उच्च विशिष्टता (96-100%) और संवेदनशीलता (98-100%) शामिल हैं।

कई चरणों या संपूर्ण प्रक्रिया के स्वचालन की उपस्थिति आपको एक साथ अध्ययन के मानकीकरण के उच्च स्तर के साथ जैविक सामग्री के नमूनों की एक बड़ी संख्या के साथ प्रवाह की जांच करने की अनुमति देती है, मूल्यांकन में व्यक्तिपरक तत्व को कम करती है परिणाम, निश्चित अध्ययन प्रोटोकॉल को संग्रहीत करने की संभावना जो आपको अध्ययन डेटा को संग्रहीत करने और पूर्वव्यापी विश्लेषण के लिए उन्हें फिर से संदर्भित करने की अनुमति देती है।

एलिसा द्वारा टी. पैलिडम एंटीजन के एंटीबॉडी के निर्धारण सहित मैनुअल विधियों के महत्वपूर्ण नुकसान हैं:

~ अध्ययन के दौरान कर्मियों की संभावित त्रुटियां (निरीक्षण, लापरवाही, प्रौद्योगिकी का उल्लंघन);

~ एलिसा के एक मैनुअल संस्करण के साथ अनुसंधान प्रक्रिया के पूर्ण मानकीकरण की असंभवता;

~ कर्मियों के संक्रमण का खतरा बढ़ गया।

10. विधि संशोधन

शास्त्रीय अप्रत्यक्ष एलिसा के साथ-साथ विधि भी जानी जाती है। एलिसा को फँसाना. यह 1989 में O.E. Ijsselmudien et al द्वारा प्रस्तावित किया गया था। Tr एंटीजन के लिए IgM वर्ग के एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए। पैलिडम। विधि में उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता है।

वर्ग एम मानव इम्युनोग्लोबुलिन के लिए शुद्ध एंटीबॉडी को टैबलेट के कुओं की सतह पर सोख लिया जाता है, और परीक्षण सीरम के ऊष्मायन के बाद, सभी आईजीएम वाहक को बांधते हैं। एंटीजन Tr के लिए विशिष्ट संबंधित IgM के बीच उपस्थिति। Tr एंटीजन का उपयोग करके पैलिडम का पता लगाया जाता है। पैलिडम एक एंजाइम के साथ संयुग्मित।

यह विधि आपको न केवल IgM वर्ग, बल्कि IgG, IgA वर्गों के एंटीबॉडी का पता लगाने की अनुमति देती है। ऐसा करने के लिए, प्लेटों के कुओं को मानव इम्युनोग्लोबुलिन के खिलाफ एक निश्चित वर्ग के आत्मीयता शुद्ध एंटीबॉडी के साथ संवेदनशील किया जाता है। इस मामले में, इस वर्ग के एंटीबॉडी सीरम से पकड़े जाते हैं, और ट्रेपोनेमल-विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए उन्हें एक संयुग्म के साथ जोड़कर किया जाता है, जो एक एंजाइम के साथ ट्रेपोनेमल एंटीजन का संयोजन होता है।

फंसी हुई एलिसा का उपयोग रुमेटी रक्त कारक द्वारा मध्यस्थता वाली झूठी सकारात्मक प्रतिक्रियाओं के जोखिम को कम करता है, वर्ग एम और जी के इम्युनोग्लोबुलिन के बीच क्रॉस-प्रतिक्रिया। मातृ एंटीट्रेपोनेमल आईजीजी को भी बाहर रखा गया है।

विदेशों में एलिसा वेरिएंट का व्यापक रूप से उपयोग किया जाता है एंजाइम प्रतिरक्षा परख (ईआईए)और प्रणाली आईसीई सिफलिस. उत्तरार्द्ध में, आईजीएम और आईजीजी के एंटीबॉडी का मिश्रण, साथ ही साथ तीन पुनः संयोजक टी। पैलिडम प्रोटीन, प्लेट के कुओं में सोख लिए गए थे। अंतिम परिणाम देने के लिए दो पुनरावृत्तियों में एक ही परीक्षा प्रणाली में सकारात्मक परिणामों का परीक्षण किया जाता है।

रूस में, घरेलू अभिकर्मकों के साथ एलिसा द्वारा सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस के लिए कई परीक्षण प्रणालियां विकसित की गई हैं। इन प्रणालियों में उच्च विशिष्टता और संवेदनशीलता है।

उपरोक्त के अलावा, अन्य एलिसा विकल्प भी हैं, जिनमें वे भी शामिल हैं जो रक्त में रोगज़नक़ का प्रत्यक्ष पता लगाने की अनुमति देते हैं (प्रत्यक्ष एलिसा), नाइट्रोसेल्यूलोज स्ट्रिप्स पर प्रतिक्रिया के साथ डॉट-एलिसा, केशिका रक्त के साथ एलिसा, साथ ही इम्युनोब्लॉटिंग, या वेस्टर्न ब्लॉट, रोगज़नक़ के विभिन्न घटकों के एंटीबॉडी का एक साथ पता लगाने के साथ।

एलिसा का एक आधुनिक उन्नत संशोधन इम्युनोब्लॉटिंग है।

आईसीए (इम्यूनोकेमिल्यूमिनेसेंट विश्लेषण), आईसीएल (इम्यूनोकेमिल्यूमिनिसेंस)

रूसी संघ में स्वास्थ्य सेवा के आधुनिकीकरण के संदर्भ में प्रयोगशाला निदान के विकास के साथ, प्रयोगशाला अनुसंधान के स्वचालन ने प्रयोगशालाओं के अभ्यास में प्रवेश किया है, जो अनुसंधान के विश्लेषणात्मक चरणों को मानकीकृत करना संभव बनाता है। यह निदान की गुणवत्ता में सुधार करता है। स्वचालन की शुरुआत के साथ, उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता वाले नए उच्च-तकनीकी तरीकों को लागू किया जाने लगा, जैसे कि केमिलुमिनेसेंस इम्यूनोएसे (सीएलआईए)

प्रारंभिक ऊर्जा अवस्था में ऑक्सीडेटिव रासायनिक प्रतिक्रियाओं के इलेक्ट्रॉनिक रूप से उत्तेजित उत्पादों के संक्रमण के दौरान केमिलुमिनेसेंस फोटॉन उत्सर्जन की प्रक्रिया है। रासायनिक संदीप्ति प्रतिक्रिया के दौरान, ऊर्जा की एक महत्वपूर्ण मात्रा जारी की जाती है, और उत्सर्जित प्रकाश की क्वांटम उपज काफी अधिक होती है। सभी गैर-समस्थानिक विधियों में से, रासायनिक संदीप्ति उच्चतम संवेदनशीलता प्रदान करती है। इम्युनोमेट्रिक तरीकों के लिए, केमिलुमिनेसेंस की संवेदनशीलता रेडियोइम्यूनोसे की तुलना में अधिक परिमाण का आदेश है।

Immunochemiluminescence (ICL) की विधि ने अब ट्यूमर मार्कर, ऑटोइम्यून रोग, मधुमेह, कार्डियक मार्कर, हार्मोन (थायराइड, अधिवृक्क, महिला और पुरुष सेक्स हार्मोन), मशाल संक्रमण, वायरल हेपेटाइटिस, दाद समूह वायरस के निदान में अपना आवेदन पाया है।

इम्युनोकेमिलुमिनेसिसेंस की विधि के आधार पर, सिफलिस के निदान के लिए कई अत्यधिक संवेदनशील और विशिष्ट (98-100%) परीक्षण प्रणालियां विकसित की गई हैं, जो मुख्य रूप से विदेशों में उपयोग की जाती हैं।

विधि में, जेनेटिक इंजीनियरिंग विधियों द्वारा प्राप्त पुनः संयोजक लिपोप्रोटीन का उपयोग एंटीजन के रूप में किया जाता है, जो टी. पैलिडम एंटीजन के पूर्ण अनुरूप हैं।

एक नैदानिक ​​अध्ययन के परिणामों के आधार पर, आईसीए विधि को मान्यता दी गई है और रूसी संघ में सिफलिस के प्रयोगशाला निदान में स्क्रीनिंग और पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में उपयोग करने की सिफारिश की गई है यदि प्रयोगशालाओं में उपयुक्त उपकरण हैं। 2012 में, ICA को यौन संचारित संक्रमणों और मूत्रजननांगी संक्रमणों वाले रोगियों के प्रबंधन के लिए नैदानिक ​​दिशानिर्देशों में उपदंश के निदान के लिए एक स्क्रीनिंग और पुष्टिकरण परीक्षण के रूप में शामिल किया गया था।

इस प्रकार, उच्च तकनीक आईसीए का उपयोग, जिसने स्वचालन की शुरूआत के साथ विश्व और घरेलू प्रयोगशाला निदान दोनों के अभ्यास में प्रवेश किया है, निम्नलिखित लाभ प्रदान करता है:

• अध्ययन के विश्लेषणात्मक चरण में व्यक्तिपरक कारकों के प्रभाव का बहिष्करण
• संभावित रूप से संक्रमित जैविक सामग्री का अध्ययन करते समय कर्मियों की सुरक्षा
• रोगी द्वारा परिणाम प्राप्त करने की गति में वृद्धि
• अनुसंधान मानकीकरण और अनुसंधान गुणवत्ता नियंत्रण
• रोगियों को विश्वसनीय विश्वसनीय परिणाम प्रदान करना
• उच्च गुणवत्ता नैदानिक ​​प्रयोगशाला अनुसंधान.

संवेदनशीलता के संदर्भ में, आईसीए विधि रेडियोइम्यूनोएसे की विधि के बराबर है, और निष्पादन में आसानी, कर्मियों के लिए सुरक्षा और कई अन्य मापदंडों के मामले में यह इसे पार करती है।

आईसीए विधि, जिसमें उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता (98-100%) है, यह सिफिलिस के प्रेरक एजेंट को एंटीबॉडी के स्तर को मापना संभव बनाता है, और इसका उपयोग सिफिलिटिक संक्रमण और स्क्रीनिंग की पुष्टि के लिए किया जा सकता है। उपयोग की सीमाएं: चिकित्सा की प्रभावशीलता की निगरानी के लिए उपयोग नहीं किया जा सकता है, गलत सकारात्मक परिणाम दे सकता है।

इम्यूनोक्रोमैटोग्राफी (ICH)।

रूसी संघ में उपयोग के लिए अपेक्षाकृत नए इम्युनोक्रोमैटोग्राफी (ICH) विधियों के आधार पर ट्रेपोनिमा-विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगाने के तरीके हैं। जैसा कि ICA विधि में, जेनेटिक इंजीनियरिंग विधियों द्वारा प्राप्त पुनः संयोजक लिपोप्रोटीन (उदाहरण के लिए: Tp15, Tp17, Tp47 एंटीजन) और बायोसिंथेटिक TmpA पेप्टाइड एंटीजन के रूप में उपयोग किए जाते हैं। एलिसा और इम्युनोब्लॉटिंग में इम्युनोसॉरबेंट्स के हिस्से के रूप में सूचीबद्ध एंटीजन का उपयोग विभिन्न संयोजनों में भी किया जाता है।

ICG विधि आपको विशेष प्रयोगशाला उपकरणों के उपयोग के बिना सीरम और पूरे रक्त के नमूनों में उपदंश के प्रेरक एजेंट के लिए ट्रेपोनिमा-विशिष्ट एंटीबॉडी की सामग्री को जल्दी से निर्धारित करने की अनुमति देती है और महामारी विज्ञान के संकेत सहित प्राथमिक स्वास्थ्य देखभाल के प्रावधान में उपयोग की जाती है।

उपयोग की सीमाएं: चिकित्सा की प्रभावशीलता की निगरानी के लिए उपयोग नहीं किया जा सकता है, गलत सकारात्मक परिणाम दे सकता है।

पीबीटी (बिस्तर पर सरल रैपिड परीक्षण)

अपेक्षाकृत हाल ही में, सिफलिस के सेरोडायग्नोसिस में, तथाकथित सरल रैपिड टेस्ट (पीबीटी), या रोगी के बिस्तर के पास परीक्षण (प्वाइंट-ऑफ-केयर - आरओसी) के विकास के लिए एक दिशा विकसित होने लगी। सरल रैपिड बेडसाइड परीक्षण, या इम्यूनोक्रोमैटोग्राफिक परीक्षण, विशेष प्रयोगशाला उपकरणों के उपयोग के बिना सीरम और पूरे रक्त के नमूनों में उपदंश के प्रेरक एजेंट के लिए ट्रेपोनिमा-विशिष्ट एंटीबॉडी की सामग्री को जल्दी से निर्धारित करना संभव बनाते हैं और प्राथमिक स्वास्थ्य देखभाल में उपयोग किए जाते हैं, जिसमें शामिल हैं महामारी विज्ञान संकेत। उपयोग की सीमाएं: चिकित्सा की प्रभावशीलता की निगरानी के लिए उपयोग नहीं किया जा सकता है, गलत सकारात्मक परिणाम दे सकता है।

ये परीक्षण पेल ट्रेपोनिमा के ट्रेपोनेमल एंटीजन के एंटीबॉडी के इम्यूनोक्रोमैटोग्राफिक डिटेक्शन पर आधारित होते हैं और स्ट्रिप्स पर किए जाते हैं; इस मामले में, संपूर्ण रक्त और सीरम दोनों का उपयोग किया जा सकता है (हेरिंग ए., बलार्ड आर. एट अल, 2006)। परीक्षणों का प्रारूप आपको विशेष उपकरणों की अनुपस्थिति में और बिजली के उपयोग के बिना अनुसंधान करने की अनुमति देता है। हालांकि, अपेक्षाकृत कम संवेदनशीलता और विशिष्टता के कारण, इन परीक्षणों को अभी तक अभ्यास में व्यापक आवेदन नहीं मिला है।

इम्यूनोब्लोटिंग (वेस्टर्न ब्लॉट)

हाल के वर्षों में, एंटीबॉडी की सामग्री का पता लगाने और उसका विश्लेषण करने के उद्देश्य से अनुसंधान के तरीके सामने आए हैं। प्रत्येक प्रतिजन के लिएपीला ट्रेपोनिमा अलग से। ऐसा ही एक तरीका है इम्यून ब्लॉटिंग (या ब्लोटिंग, इम्युनोब्लॉटिंग, वेस्टर्न ब्लॉट) की विधि, जिसका उपयोग आईजीजी या आईजीएम एंटीबॉडी को पीला ट्रेपोनिमा निर्धारित करने के लिए किया जाता है। इम्युनोब्लॉटिंग की विधि एंजाइम इम्यूनोएसे का एक संशोधन है - एलिसा का एक प्रकार।

इम्युनोब्लोटिंग सिफलिस सेरोडायग्नोसिस के सबसे आधुनिक तरीकों में से एक है और विदेशों में सक्रिय रूप से उपयोग किया जाता है। इसका नाम ("वेस्टर्न ब्लॉटिंग") डीएनए डिटेक्शन तकनीकों ("सदर्न ब्लॉटिंग") और आरएनए ("नॉर्दर्न ब्लॉटिंग") के नामों के लिए एक विनोदी प्रतिक्रिया के रूप में मिला।

1. विधि का इतिहास

इम्युनोब्लॉटिंग (वेस्टर्न ब्लॉट) का उपयोग आईजीजी या आईजीएम एंटीबॉडी को पेल ट्रेपोनिमा एंटीजन (हेरेमन्स एम। एट अल।, 2007) के लिए निर्धारित करने के लिए किया जाता है।

2. क्लासिक इम्युनोब्लॉट

क्लासिक इम्युनोब्लॉट(वेस्टर्न ब्लाट एनालिसिस) एंजाइम इम्यूनोएसे और एक इलेक्ट्रोफोरेटिक विधि के उपयोग को जोड़ती है। उपदंश के प्रेरक एजेंट के प्रोटीन एंटीजन को पहले वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया जाता है और एक वाहक - एक नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली (पट्टी) में स्थानांतरित किया जाता है। इस स्थानांतरण को सोख्ता कहा जाता है। फिर अलग-अलग बिंदुओं (धब्बा) वाले इस वाहक का परीक्षण सीरम और एंटीबॉडी के साथ आईजीजी या आईजीएम को एंजाइम या रेडियोधर्मी पदार्थों के साथ लेबल किया जाता है। विधि में प्राकृतिक या पुनः संयोजक ट्रेपोनिमा प्रोटीन का उपयोग शामिल है।

वैद्युतकणसंचलनएक वैद्युतकणसंचलन क्षेत्र में उनकी गतिशीलता के आधार पर आवेशित यौगिकों का पृथक्करण है। जब किसी माध्यम में एक संभावित अंतर लगाया जाता है, तो सकारात्मक रूप से आवेशित अणु ऋणात्मक रूप से आवेशित इलेक्ट्रोड की ओर बढ़ते हैं, और ऋणात्मक रूप से आवेशित अणु धनात्मक इलेक्ट्रोड की ओर बढ़ते हैं।

अधिकांश गोलाकार प्रोटीन इस तरह से इकट्ठे होते हैं कि अधिकांश आवेशित समूह, अर्थात् हाइड्रोफिलिक वाले, प्रोटीन की सतह पर स्थित होते हैं, जबकि अपरिवर्तित, हाइड्रोफोबिक अवशेष ग्लोब्यूल के अंदर डूब जाते हैं। एक विद्युत क्षेत्र में, उनके आवेश के अनुसार, प्रोटीन एक विपरीत आवेशित इलेक्ट्रोड की ओर पलायन करते हैं।

पॉलीएक्रिलामाइड पर आधारित सिंथेटिक जेल माध्यम में प्रोटीन का इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण किया जाता है। प्रोटीन को उनके आणविक भार के अनुसार अलग करने के लिए, वैद्युतकणसंचलन से पहले, सोडियम डोडेसिल सल्फेट (एसडीएस) की उपस्थिति में प्रोटीन मिश्रण को फिर से डाला जाता है।

विदेशी वैज्ञानिकों वेबर और ओसबोर्न (1969) द्वारा विस्तृत अध्ययन से पता चला है कि इस तरह के उपचार के बाद, एकमात्र कारक जो पॉलीएक्रिलामाइड जेल (PAAG) में प्रोटीन की गतिशीलता को प्रभावित कर सकता है, वह प्रोटीन का आकार है, या बल्कि इसका आणविक भार है। इसने प्रोटीन और पेप्टाइड्स के आणविक भार के काफी सटीक निर्धारण के लिए एसडीएस-पेज में वैद्युतकणसंचलन की विधि को एसडीएस की उपस्थिति में लागू करना संभव बना दिया। विदेशी साहित्य में, इस विधि को एसडीएस-पेज (सोडियम डोडेसिल सल्फेट-पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन) कहा जाता था।

प्राकृतिक एंटीजन (सोडियम डोडेसिल सल्फेट के साथ पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन विधि) के साथ शास्त्रीय डब्ल्यूबी परीक्षण में प्रतिक्रियाशीलता प्रोफ़ाइल। (1) - सकारात्मक परिणाम को नियंत्रित करें, (2) - नकारात्मक परिणाम को नियंत्रित करें, (3-6) - नैदानिक ​​नमूने।

इस पद्धति का उपयोग करते हुए सिफलिस के परीक्षणों में, पहले से शुद्ध और इसके घटक घटकों को नष्ट कर दिया जाता है, पेल ट्रेपोनिमा को पॉलीएक्रिलामाइड या एग्रोस जेल में वैद्युतकणसंचलन के अधीन किया जाता है। इसी समय, इसकी संरचना में शामिल एंटीजन को आणविक भार द्वारा अलग किया जाता है।

फिर, ऊर्ध्वाधर वैद्युतकणसंचलन द्वारा, एंटीजन को नाइट्रोसेल्युलोज की एक पट्टी में स्थानांतरित किया जाता है, जिसमें अब एंटीजेनिक बैंड का एक अदृश्य स्पेक्ट्रम होता है, जो पेल ट्रेपोनेमा की विशेषता है।

विश्लेषण के दौरान, परीक्षण सामग्री (सीरम, रोगी के रक्त प्लाज्मा, आदि) को नाइट्रोसेल्यूलोज पट्टी (पट्टी) पर लगाया जाता है। यदि नमूने में विशिष्ट एंटीबॉडी हैं, तो ऊष्मायन की प्रक्रिया में वे दृढ़ता से एंटीजेनिक बैंड से बंधते हैं जो उनके साथ सख्ती से मेल खाते हैं और एक "एंटीजन-एंटीबॉडी" कॉम्प्लेक्स बनाते हैं।

पट्टी की धुलाई के दौरान अनबाउंड इम्युनोग्लोबुलिन को हटाने के बाद, संयुग्म के साथ ऊष्मायन - मानव इम्युनोग्लोबुलिन के लिए एंजाइम-लेबल एंटीबॉडी (मानव आईजीजी या आईजीएम के एंटीबॉडी) का पालन होता है, जिसके दौरान एंजाइम के साथ लेबल किए गए एंटीबॉडी मौजूदा एंटीजन-एंटीबॉडी से जुड़े होते हैं। झिल्ली की सतह पर जटिल।

सब्सट्रेट समाधान के साथ ऊष्मायन के दौरान अनबाउंड संयुग्म को हटाने के बाद, एंजाइम सब्सट्रेट के साथ बातचीत करता है, जिसके परिणामस्वरूप एक रंग प्रतिक्रिया होती है - झिल्ली वर्गों का धुंधला हो जाना (बैंड के रूप में) जहां पेल ट्रेपोनिमा के अलग-अलग एंटीजन स्थित होते हैं, एंटीबॉडी जो टेस्ट सीरम में थे। धुंधला होने की तीव्रता सीरम से बाध्य एंटीबॉडी की मात्रा पर निर्भर करती है। प्रतिक्रिया के परिणाम का मूल्यांकन दृष्टिगत रूप से किया जाता है।

नाइट्रोसेल्युलोज प्लेट के कुछ क्षेत्रों में बैंड की उपस्थिति अध्ययन किए गए सीरम में पेल ट्रेपोनिमा के कड़ाई से परिभाषित एंटीजन के एंटीबॉडी की उपस्थिति की पुष्टि करती है।

इस पद्धति का उपयोग करके निर्धारित किए गए 15, 5, 17, 44.5, 47 केडी प्रतिरक्षी सिफलिस में नैदानिक ​​​​महत्व रखते हैं। Ig G इम्युनोब्लॉटिंग अवशोषण (RIF ABS) के साथ RIF की संवेदनशीलता और विशिष्टता के समान है। आईजी एम-इम्युनोब्लॉटिंग जन्मजात उपदंश के लिए नैदानिक ​​परीक्षण के रूप में काम कर सकता है।

3. रेखीय इम्यूनोएसे प्रारूप में इम्यूनोब्लॉट

रैखिक इम्यूनोएसे (लाइन इम्यूनोएसे, एलआईए) आपको एक साथ मानव सीरम या प्लाज्मा में पेल ट्रेपोनिमा एंटीजन के लिए एंटीबॉडी निर्धारित करने की अनुमति देता है। एंटीजन टेस्ट स्ट्रिप्स (स्ट्रिप्स) पर पहले से लगाए जाते हैं, जिन्हें व्यावसायिक डायग्नोस्टिक किट के हिस्से के रूप में आपूर्ति की जाती है।

स्ट्रिप्स नाइट्रोसेल्यूलोज झिल्ली, प्लास्टिक बैकिंग के साथ पॉलियामाइड झिल्ली या प्लास्टिक बैकिंग के साथ नायलॉन झिल्ली से बने होते हैं। निर्माण के दौरान, कई असतत एंटीजन अलग-अलग एंटीजेनिक लाइनों के रूप में टेस्ट स्ट्रिप पर रखे जाते हैं। इन सिफलिस प्रतिजनों के अलावा, प्रत्येक लेन पर चार और नियंत्रण रेखाएँ लागू की जाती हैं: स्ट्रेप्टाविडिन और नियंत्रण (3+, 1+ और ± कट लाइन)।

स्ट्रिप्स के लिए, जेनेटिक इंजीनियरिंग द्वारा प्राप्त कृत्रिम एंटीजन का उपयोग किया जाता है - पुनः संयोजक प्रोटीन या सिंथेटिक पॉलीपेप्टाइड निर्माण। ये पेल ट्रेपोनिमा के सतह एंटीजन के अनुरूप हैं - TpN15, TpN17, TpN47 और TmpA 15, 17, 47 kDa और 44.5 (TmpA) के आणविक भार के साथ, जहाँ kDa=kiloDaltons। उनकी मदद से, रोगज़नक़ के विभिन्न इम्युनोडोमिनेंट घटकों के सीरम एंटीबॉडी निर्धारित किए जाते हैं।

परीक्षण नमूने का ऊष्मायन क्युवेट में होता है, जहां संकेतक पट्टी भी रखी जाती है। टी. पैलिडम के प्रतिपिंडों का निर्धारण परीक्षण पट्टियों पर छपे प्रतिजनों से बंध कर किया जाता है। यदि नमूने में टी. पैलिडम-विशिष्ट एंटीबॉडी हैं, तो वे अलग-अलग एंटीजन लाइनों के साथ बंधन बनाते हैं। जब परीक्षण सीरम में निहित एंटीबॉडी परीक्षण पट्टी पर रखे असतत टी। पैलिडम एंटीजन के साथ बातचीत करते हैं, तो एक एंटीजन-एंटीबॉडी कॉम्प्लेक्स नेत्रहीन पता लगाने योग्य रंग बैंड के रूप में बनता है।

इम्युनोब्लॉटिंग के परिणामों को ध्यान में रखते हुए, प्रत्येक एंटीजन के लिए सीरम की प्रतिक्रियाशीलता का अलग से मूल्यांकन किया जाता है। प्रस्तुत प्रतिजनों में से दो या तीन के साथ एक साथ परिणाम प्राप्त होने पर कुल सकारात्मक प्रतिक्रिया जारी की जाती है।

संक्रामक रोगों के लिए एक विशेष कंप्यूटर प्रोग्राम का उपयोग करके परिणामों की व्याख्या के साथ, अनुसंधान प्रक्रियाओं को मैन्युअल रूप से या एक विशेष विश्लेषक पर किया जाता है।

पुनः संयोजक प्रतिजनों के शुद्धिकरण की उच्च डिग्री और उपदंश के प्रेरक एजेंट के सबसे इम्युनोजेनिक निर्धारकों के साथ-साथ एंटीबॉडी का पता लगाने के कारण, विधि में उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता है।

4. परिणामों के लिए लेखांकन

स्ट्रिप्स पर एंटीजेनिक बैंड के धुंधला होने की तीव्रता को पढ़ने के लिए, फोटोमीटर विकसित किए गए हैं, जिसका संचालन सिग्नल रिफ्लेक्शन पर आधारित है, जो व्यक्तिपरक मूल्यांकन को समाप्त करता है और स्वचालन के लिए एक संभावित अवसर प्रदान करता है।

5. रोग की किस अवधि में इसका उपयोग करना बेहतर होता है

वेस्टर्न ब्लॉट पद्धति का उपयोग करने वाले टेस्ट रोग के बहुत प्रारंभिक चरण में ट्रेपोनिमा पैलिडम एंटीजन के लिए विशिष्ट एंटीबॉडी का पता लगा सकते हैं। सिफलिस के निदान में सबसे महत्वपूर्ण पेल ट्रेपोनिमा TpN15, TpN17, TmpA और TpN47 के एंटीजन के प्रति एंटीबॉडी हैं। ये प्रतिजन क्रमशः 15, 17, 44.5 और 47 kDa के आणविक भार वाले झिल्लीदार प्रोटीन होते हैं।

जब ट्रेपोनिमा पैलिडम को मानव शरीर में पेश किया जाता है, तो एंटीसेफिलिटिक एंटीबॉडी इस क्रम में दिखाई देते हैं: सबसे पहले, TpN17 एंटीजन के लिए एक प्रतिरक्षा प्रतिक्रिया विकसित होती है, फिर TpN47, TpN15 के बाद और बाद में सभी TmpA से। परीक्षण के परिणामों को ध्यान में रखते हुए, उनमें से प्रत्येक के लिए अलग से सीरम की प्रतिक्रियाशीलता का मूल्यांकन किया जाता है। उदाहरण के लिए, जब एक रेखीय धब्बा में केवल TpN17 और TpN47 एंटीजेनिक लाइन के लिए प्रतिक्रियाशीलता होती है, तो इसका मतलब है कि रोग प्रारंभिक अवस्था में है। जितनी अधिक एंटीजेनिक लाइनें प्रतिक्रियाशील होती हैं, संक्रमण उतना ही आगे बढ़ता है। सिफलिस के इलाज में इस टेस्ट में प्रतिक्रियाशीलता का पैटर्न बदल जाता है।

15.17, 41, 47 kDa के आणविक भार वाले प्रोटीन के लिए IgM का निर्धारण माध्यमिक सिफलिस वाले 29.2% रोगियों की पहचान करना संभव बनाता है, प्रारंभिक अव्यक्त उपदंश के साथ 12.5% ​​​​और सेरोरेसिस्टेंट के साथ 8.0%। समान अणुओं के लिए आईजीजी की खोज सेरोरेसिस्टेंट के लिए 61.6% की संवेदनशीलता और द्वितीयक और प्रारंभिक अव्यक्त उपदंश के लिए 100% की विशेषता है।

6. संवेदनशीलता और विशिष्टता

साहित्य के अनुसार, परीक्षण की संवेदनशीलता और विशिष्टता क्रमशः 99.6-100% और 99.3-99.5% बहुत अधिक है। शास्त्रीय विधि में, यह प्रोटीन, ग्लाइको- और लिपोप्रोटीन के इलेक्ट्रोफोरेटिक पृथक्करण और प्रतिरक्षा सीरा या मोनोक्लोनल एंटीबॉडी का पता लगाने की अधिकतम विशिष्टता के माध्यम से प्राप्त किया जाता है। इष्टतम स्थितियों के तहत, इम्युनोब्लॉटिंग परीक्षण मात्रा में 1 एनजी से कम मात्रा में एंटीजन का पता लगा सकता है।

रैखिक धब्बा की संवेदनशीलता भी 99.6% है और विशिष्टता 99.3% और 99.5% के बीच है।

विशेषज्ञों के अनुसार, पुनः संयोजक अत्यधिक विशिष्ट एंटीजन के साथ इम्युनोब्लॉटिंग RIF एब्स की संवेदनशीलता और विशिष्टता के समान है।

विदेशी साहित्य के आंकड़ों और TsNIKVI में एक अध्ययन के परिणामों के अनुसार, सिफिलिस के निदान में इम्युनोब्लॉटिंग विधि में उच्च संवेदनशीलता (98.8-100%) और विशिष्टता (97.1-100%) है।

7. विधि का दायरा

इम्यूनोब्लोटिंग (इम्युनोब्लॉट) एक अत्यधिक विशिष्ट और अत्यधिक संवेदनशील संदर्भ विधि है। उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता इस पद्धति को उपदंश के लिए एक पुष्टिकारक परीक्षण के रूप में माना जाता है। विधि का उपयोग निदान की पुष्टि करने के लिए किया जा सकता है, साथ ही साथ यदि अन्य ट्रेपोनेमल परीक्षण संदिग्ध और परस्पर विरोधी परिणाम देते हैं। पश्चिमी सोख्ता सकारात्मक या अनिश्चित परीक्षण परिणामों वाले रोगियों में निदान की पुष्टि कर सकता है, जिसमें टीपीएचए या एलिसा का उपयोग करने वाले परीक्षण भी शामिल हैं।

8. मंचन त्रुटियों, गलत सकारात्मक और गलत नकारात्मक के स्रोत और कारण

गलत सकारात्मक परिणाम अत्यंत दुर्लभ हैं। गलत-नकारात्मक परिणाम भी काफी दुर्लभ होते हैं और प्रतिरक्षाविहीनता वाले रोगियों में देखे जाते हैं - अधिक बार एचआईवी संक्रमित लोगों में और एंटीबॉडी संश्लेषण में देरी के कारण निदान "खिड़की" के प्रभाव के साथ-साथ स्टेजिंग चरण में त्रुटियां भी होती हैं।

आधुनिक परीक्षण प्रणालियों का उपयोग सामग्री और प्रतिक्रिया के प्रदर्शन दोनों के लिए सभी आवश्यकताओं के सटीक पालन को निर्धारित करता है। मूल रूप से, त्रुटियों का स्रोत अध्ययन के आदेश और तकनीक का उल्लंघन है (विशेष रूप से क्लासिक पश्चिमी धब्बा के लिए), परीक्षण किट निर्माताओं की सिफारिशों का पालन न करना। . रक्त सीरम के नमूनों के संग्रह, वितरण, भंडारण के साथ-साथ परीक्षणों के प्रदर्शन में भी त्रुटियां हो सकती हैं। दूषित नमूनों के अलावा, अन्य संभावित कारणों में समाप्त परीक्षण किट का उपयोग और परीक्षण परिणामों के विश्लेषण में त्रुटियां शामिल हैं।

9. विशेषताएं, फायदे और नुकसान

इम्युनोब्लॉट की विशिष्टता इसकी उच्च सूचना सामग्री और परिणामों की विश्वसनीयता में निहित है।

परीक्षण के लिए अत्यधिक शुद्ध एंटीजन, संदर्भ और नियंत्रण सीरा की आवश्यकता नहीं होती है। एक एंटीबॉडी लक्ष्य की पहचान प्रोटीन के आणविक भार पर आधारित होती है जिसके साथ रोगी के सीरम के एंटीबॉडी प्रतिक्रिया करते हैं। एक प्रतिक्रिया में, कई प्रतिजनों के लिए एंटीबॉडी के बंधन का पता लगाया जा सकता है, जिनमें से प्रत्येक को सटीक रूप से चित्रित किया जा सकता है। इसके कारण, एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए अन्य तरीकों की तुलना में इम्युनोब्लॉटिंग के कई फायदे हैं, जिसके परिणाम मानकीकरण, संवेदनशीलता, सब्सट्रेट की गुणवत्ता, कुछ एंटीजन की अस्थिरता या अघुलनशीलता पर निर्भर करते हैं।

विधि आसानी से प्रतिलिपि प्रस्तुत करने योग्य है, प्रदर्शन करने और परिणामों की व्याख्या करने में अपेक्षाकृत आसान है, एक बार में कई टी। पैलिडम एंटीजन के एंटीबॉडी के स्पेक्ट्रम को निर्धारित करना और समग्र प्रतिक्रिया के लिए विभिन्न विशिष्टता के एंटीबॉडी के योगदान का मूल्यांकन करना संभव बनाता है।

अत्यधिक शुद्ध पुनः संयोजक और पेप्टाइड प्रतिजनों का उपयोग सीरा की गैर-विशिष्ट प्रतिक्रियाशीलता को कम करता है। विधि का उपयोग श्रम-गहन और व्यक्तिपरक तरीकों से बचना संभव बनाता है जो शोधकर्ता के लिए खतरनाक हैं (प्रतिक्रिया स्थापित करते समय रोगजनक टी। पैलिडम के साथ काम करते हुए जी। पैलिडम के उपभेदों का प्रत्यारोपण)। यह सिफलिस के निदान के लिए अन्य ट्रेपोनेमल परीक्षणों (आरआईएफ और विशेष रूप से आरआईबीटी) पर इम्युनोब्लॉटिंग की विधि के लिए वरीयता निर्धारित करता है।

10. विधि संशोधन

इस पद्धति पर आधारित कई व्यावसायिक परीक्षण प्रणालियाँ हैं। उनमें से कुछ प्रारूप में हैं पश्चिमी धब्बा, स्ट्रिप्स से मिलकर बनता है, जिस पर टी। पैलिडम के प्रोटीन घटकों को स्थानांतरित किया जाता है, जिसे पहले पॉलीएक्रिलामाइड जेल वैद्युतकणसंचलन द्वारा अलग किया जाता है।

अन्य प्रारूप में हैं रैखिक धब्बा, स्ट्रिप्स से मिलकर बनता है, जिस पर पुनः संयोजक और सिंथेटिक पॉलीपेप्टाइड असतत रेखाओं के रूप में सोख लिए जाते हैं - टी। पैलिडम, TpN15, TpN17, TpN47 और TmpA के सतह प्रतिजनों के अनुरूप।

वेस्टर्न ब्लॉट के परिणामों की व्याख्या करना अधिक कठिन होता है क्योंकि स्ट्रिप्स एंटीबॉडी की एक विस्तृत विविधता दिखाती हैं, जिनमें से कई समूह विशिष्ट हैं। इसके विपरीत, रेखीय धब्बा परिणामों की व्याख्या सीधी है; इसके अलावा, पट्टी पर मुद्रित अतिरिक्त नियंत्रण रेखाएं टी. पैलिडम के चार प्रतिजनों के एंटीबॉडी के स्तर के अर्ध-मात्रात्मक मूल्यांकन की अनुमति देती हैं।

एक्सएमएपी तकनीक

एक्सएमएपी एक अत्याधुनिक तकनीक है जो एक ही जैविक नमूने में एक साथ कई विश्लेषणों का पता लगाकर मल्टीपैरामेट्रिक अध्ययन करना संभव बनाती है। कैप्चर अभिकर्मकों (ऑलिगोन्यूक्लियोटाइड्स, एंटीबॉडी, एंटीजन) के साथ लेपित रंगीन माइक्रोस्फीयर को ठोस चरण के रूप में उपयोग किया जाता है।

परीक्षण के नमूने को माइक्रोस्फीयर युक्त समाधान में जोड़ा जाता है। नमूने में पाए गए एनालिटिक्स संबंधित माइक्रोस्फीयर से बंधे होते हैं, जिसके बाद एक डिटेक्टिंग एजेंट (एंटीबॉडी का पता लगाने, फ्लोरोसेंट लेबल) को समाधान में जोड़ा जाता है। निर्धारित किए जाने वाले विश्लेषण का पता लगाने के लिए, दो लेज़रों की एक प्रणाली का उपयोग किया जाता है, जो एक नमूने में एक विश्लेषण की उपस्थिति के गुणात्मक मूल्यांकन दोनों की अनुमति देता है (इसके लिए, एक लाल लेजर का उपयोग किया जाता है जो रंग द्वारा माइक्रोस्फीयर को वर्गीकृत करता है) और एक मात्रात्मक मूल्यांकन एक नमूने में विश्लेषण सामग्री (इसके लिए, एक हरे रंग की लेजर का उपयोग किया जाता है)।

सॉफ्टवेयर से लैस Bio-Plex 200 (बायो-रेड), Bio-Plex2200 (बायो-रेड), Luminex100 (ल्यूमिनेक्स), Luminex200 (ल्यूमिनेक्स) जैसे एनालाइजर पर अध्ययन स्वचालित रूप से किया जाता है।

एक्सएमएपी तकनीक का प्रदर्शन क्लासिकल एंजाइम-लिंक्ड इम्युनोसॉरबेंट परख (एलिसा) के प्रदर्शन से काफी कम मात्रा में बायोमैटेरियल से अधिक है।

xMAP तकनीक, जिसमें उच्च विश्लेषणात्मक संवेदनशीलता है, वर्तमान में नैदानिक ​​समस्याओं की एक विस्तृत श्रृंखला को हल करने के लिए उपयोग की जाती है। इसकी मदद से, जैविक सामग्री के एक नमूने में, ज्ञात ऑन्कोमार्कर, कार्डियक मार्कर, तीव्र चरण के मार्कर और मधुमेह मेलेटस, साइटोकिन्स, केमोकाइन और विकास कारकों की एक विस्तृत श्रृंखला का एक साथ पता लगाया जाता है। एक जैविक नमूने में एक साथ कई विश्लेषणों का पता लगाने से रोगी की परीक्षा के समय में काफी कमी आ सकती है। तिथि करने के लिए, एक्सएमएपी विधि का उपयोग करके, विशेष रूप से सिफिलिटिक संक्रमण में एसटीआई रोगजनकों के एंटीबॉडी का पता लगाने के लिए कई परीक्षण प्रणालियां विकसित की गई हैं।

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