Klaidingai neigiamas testas – netiesioginis Kumbso testas. Kumbso testas: tiesioginis ir netiesioginis

Hemolizinė anemija, kurią sukelia autoimuniniai kūnai, nukreipti prieš savo raudonuosius kraujo kūnelius, nėra tiksliai suprantami. Tačiau daroma prielaida, kad kai kurie veiksniai (pavyzdžiui, virusas, nenormalus baltymas) pakeičia raudonuosius kraujo kūnelius taip, kad organizmas juos suvokia „kaip svetimą“ ir kovoja su jais antikūnų pagalba. Remiantis kita teorija, antikūnai, nukreipti prieš raudonuosius kraujo kūnelius, atsiranda beveik atsitiktinai, kai kai kurių ligų atveju susidaro nenormalūs plazmos baltymų kūneliai. Tokie baltymų kūnai taip pat „atsitiktinai“ gali sukelti reakcijas, kurios gali būti naudojamos diagnozei nustatyti (pvz., virusinė pneumonijažinoma, kad duoda teigiama reakcija Wasserman, teigiama Paulo-Bunnell reakcija ir šalta agliutinacijos reakcija).

Yra du Pagrindiniai autoantikūnų tipai hemolizinei anemijai, būtent: šilti antikūnai (reaguoja esant 37°C) ir šalti antikūnai (kurių reaktyvumas didėja temperatūrai artėjant prie nulio). Šilti antikūnai yra labiau paplitę nei šalti antikūnai. Dacie nustatė, kad šilti hemolizinai atsiranda 2 kartus dažniau nei šalti. Hemolizinai ir agliutininai iš esmės nėra skirtingi antikūnai: jie skiriasi tik savo veikimo pobūdžiu. Agliutininai agliutinuoja raudonuosius kraujo kūnelius, o hemolizinai daro juos jautresnius sudėtingam hemolizės procesui (papildyti!). Autoantikūnai, fiksuojantys eritrocitus, sudaro eritrocitų-globino kompleksą. Šis kompleksas aptinkamas naudojant Kumbso antiglobino testą.

Kumbso testas atliekamas su Kumbso serumu, kurio paruošimui triušis įjautrinamas žmogaus serumu, prieš kurį triušio serume susidaro antikūnai. Kai toks įjautrintas serumas veikia žmogaus eritrocitus, įvyksta jų agliutinacija, jei eritrocitų receptoriai yra užimti blokuojančių antikūnų. Kadangi šie blokuojantys antikūnai yra gauti iš žmogaus serumo, jie agliutinuojasi su triušio serumu, jautrintu žmogaus plazmai ir turinčiu nuosėdų. Ši reakcija vadinama Kumbso testu; hemolizinei anemijai dėl autoimuninių kūnų (Lo tit) ji beveik specifinė (plačiau žr. Maier).

Paprastai sergant hemolizine anemija esant pirminiam eritrocitų sutrikimui, Kumbso testas yra neigiamas, o su įgytais – teigiamas. Tačiau yra keletas šios taisyklės išimčių: klaidingai teigiamas Kumbso testas randamas konstitucinės hemolizinės anemijos krizių metu ir silpnai, kartais po splenektomijos, sergant reumatiniu artritu, sarkoidoze, po dažnų kraujo perpylimų ir sistemine vilklige. eritematozė. Natūralu, kad esant įgytai hemolizinei anemijai, nesusiformavus autoimuniniams kūnams, ji yra neigiama.

Hemolizinė anemija autoimuninių kūnų sukeltas ligas galima suskirstyti į:
a) ūminis, poūmis ir lėtinės formos, taip pat toliau
b) idiopatinė, kurios etiologija nežinoma ir c) simptominė [virusinė pneumonija (tik šalčio agliutininai), lėtinė limfinė leukemija, retikulosarkoma, limfosarkoma, sisteminė raudonoji vilkligė (daugiausia šilta, rečiau šalta agliutininai), sifilis (šalti agliutininai), su darbuotojais)).
c) simptominė [virusinė pneumonija (tik šalčio agliutininai), lėtinė limfinė leukemija, retikulosarkoma, limfosarkoma, sisteminė raudonoji vilkligė (daugiausia šilta, rečiau šalta agliutininai), sifilis (šalti agliutininai), kiaušidžių navikai (Miescher ir bendradarbiai)).

Hemolizinės anemijos klinika, kuri vystosi veikiant autoimuniniams kūnams, yra labai įvairi, todėl vargu ar įmanoma nubrėžti jų bendrą klinikinis vaizdas. Įvairaus amžiaus ir abiejų lyčių asmenys yra vienodai paveikti. Vis dėlto idiopatinės formos dažniau pastebimos moterims (Sacks ir Workman).

Klinikinis idiopatinės formos vaizdas skiriasi priklausomai nuo ligos sunkumo. IN lėtiniai atvejai Pradžia laipsniška, liga tęsiasi daugelį metų su dažnais paūmėjimais. Anemijos sunkumas priklauso nuo hemolizės laipsnio. Stebimas hemoglobino sumažėjimas iki 10%, kitais atvejais hemoglobinas ilgą laiką išlieka 50-60%. Retikulocitozės intensyvumas ir odos bei serumo icterinė spalva atitinka hemolizės laipsnį. Bilirubinas labai retai randamas šlapime, nes jis nepraeina per inkstus, tačiau stebima hemoglobinurija. Lėtiniais atvejais blužnis dažnai padidėja ir gali pasiekti net labai didelį dydį, tačiau kitais atvejais ji vis tiek jaučiama. Kepenys retai nepadidėja.

Daugeliu atvejų kraujyje stebima makrocitozė, in ūminės stadijos taip pat daug mikrocitų, normoblastozės ir polichromazijos retai pasitaiko, leukocitozė gali siekti 30 000, trombocitai normalūs. Tačiau kai kuriais atvejais yra sunki trombocitopenija. Evansas paaiškina šiuos atvejus tuo pačiu metu esančiais antikūnais prieš trombocitus, todėl vienu metu hemolizinė anemija ir trombocitopenija dėl autoimuninių kūnų veikimo – Evanso sindromas. Osmosinis atsparumas šiek tiek sumažėja, bet ne tokiu mastu ir ne taip nuolat, kaip konstitucinės rutulinių ląstelių anemijos atveju. Atsparumo karščiui testas (Hegglin-Maier) po 6 valandų taip pat gali duoti nedidelę hemolizę (savo stebėjimas), bet mažiau nei dėl Marchiafava anemijos. Hemosiderinas taip pat randamas šlapime (savo stebėjimas).

Antikūnai, esantis eritrocitų paviršiuje, gali būti statinės arba laisvos kraujo plazma. Priklausomai nuo antikūnų būklės, atliekama tiesioginė arba netiesioginė Kumbso reakcija. Jei yra pagrindo manyti, kad antikūnai yra fiksuoti raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, atliekamas tiesioginis Kumbso testas. Šiuo atveju testas vyksta vienu etapu – pridedant antiglobulino serumas. Jei raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra nepilnų antikūnų, agliutinacija raudonieji kraujo kūneliai

Netiesioginė reakcija

Netiesioginė Kumbso reakcija vyksta 2 etapais. Pirmiausia reikia dirbtinai įgyvendinti jautrinimas raudonieji kraujo kūneliai Tam inkubuojami raudonieji kraujo kūneliai ir tiriamas kraujo serumas, dėl kurio antikūnai fiksuojasi ant raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus. Po to atliekamas antrasis Kumbso testo etapas - antiglobulino serumo pridėjimas.

Kritulių reakcija - RP (iš lot. praecipilo į nuosėdas) yra tirpaus molekulinio antigeno komplekso su antikūnais susidarymas ir nusodinimas drumstumo pavidalu. nuosėdos. Jis susidaro sumaišius antigenus ir antikūnus lygiaverčiais kiekiais, vieno iš jų perteklius sumažina imuninio komplekso susidarymo lygį. Nusodinimo reakcija vykdoma mėgintuvėliuose (žiedo nusodinimo reakcija), geliuose, maistinėse terpėse ir kt. Nusodinimo reakcijos variantai pusiau skystame agare arba agarozės gelyje, dviguba imunodifuzija Ouchterlony, spindulinė imunodifuzija, imunoektroforezė ir kt.

Žiedo kritulių reakcija. Reakcija vykdoma siauruose nusodinimo mėgintuvėliuose: ant imuninio serumo uždedamas tirpus antigenas. Esant optimaliam antigeno ir antikūnų santykiui, prie šių dviejų tirpalų ribos susidaro nepermatomas sluoksnis. nuosėdų žiedas. Jei reakcijoje kaip antigenai naudojami virti ir filtruoti audinių ekstraktai, tai ši reakcija vadinama pirmąja termoprecipitacijos reakcija (reakcija, kurios metu aptinkamas juodligės haptenas).
Ouchterlony dviguba imunodifuzijos reakcija. Reakcijai nustatyti plonu sluoksniu ištirpusio agaro gelio pilamas ant stiklinės plokštelės ir, sukietėjus, išpjaunamos joje duobutės. Antigenai ir imuniniai serumai dedami atskirai į gelio šulinėlius, kurie difunduoja vienas į kitą. Susitikimo vietoje lygiavertėmis proporcijomis jie sudaro baltos juostelės pavidalo nuosėdas. Daugiakomponentėse sistemose tarp šulinių su antigenais ir antikūnais atsiranda kelios nuosėdų linijos; identiškuose AG nuosėdų linijos susilieja; neidentiškuose AG jie susikerta.
Radialinė imunodifuzijos reakcija. Imuninis serumas su išlydytu agaro geliu tolygiai pilamas ant stiklinės. Sustingus gelyje, padaromos duobutės, į kurias dedamas įvairiais atskiedais antigenas. Antigenas, difunduodamas į gelį, aplink šulinėlius su antikūnais sudaro žiedines nuosėdų zonas. Nusodinimo žiedo skersmuo yra proporcingas antigeno koncentracijai. Reakcija naudojama kraujo serume nustatyti įvairių klasių imunoglobulinus, komplemento sistemos komponentus ir kt.
Imunoelektroforezė- elektroforezės ir imunoprecipitacijos metodo derinys: į gelio duobutes įvedamas antigenų mišinys ir elektroforezės būdu atskiriamas gelyje, tada į griovelį, lygiagrečiai elektroforezės zonoms, įpilamas imunoserumas, kurio antikūnai difunduoja į gelį ir suformuoja nusodinimo linijas „susitikimo“ su antigenu vietoje.
Flokuliacijos reakcija(pagal Ramonas) (iš lot. f1oecus – vilnos dribsniai) – opalescencijos arba flokuluojančios masės (imunoprecipitacijos) atsiradimas mėgintuvėlyje reakcijos metu toksinas – antitoksinas arba toksoidas – antitoksinas. Jis naudojamas antitoksinio serumo ar toksoido aktyvumui nustatyti.

HLA tipavimas- žmogaus pagrindinio histokompatibilumo komplekso – ŽLA komplekso tyrimas. Šis darinys apima 6 chromosomos genų sritį, koduojančią HLA antigenus, dalyvaujančius įvairiuose imuniniuose atsakuose.

Užduotys skirtos HLA tipavimas gali būti labai įvairus – biologinis identifikavimas (HLA tipas paveldimas kartu su tėvų genais), polinkio į įvairių ligų, donorų atranka organų transplantacijai – tai apima donoro ir recipiento audinių HLA tipo nustatymo rezultatų palyginimą. Naudojant ŽLA tipavimą, nustatoma, kiek sutuoktiniai yra panašūs ar skiriasi pagal histokompatibilumo antigenus, siekiant diagnozuoti nevaisingumo atvejus.

ŽLA tipavimas siūlo ŽLA polimorfizmo analizė ir atliekama dviem metodais – serologiniu ir molekuliniu genetiniu. Klasikinis serologinis ŽLA tipavimo metodas pagrįstas mikrolimfocitotoksiniu tyrimu, o molekuliniame – PGR (polimerazės grandininė reakcija).

Serologinis HLA tipavimas atliekama su izoliuotomis ląstelių populiacijomis. Pagrindinius histokompatibilumo komplekso antigenus daugiausia nešioja limfocitai. Todėl T limfocitų suspensija naudojama kaip pagrindiniai I klasės antigenų nešėjai, o B limfocitų suspensija II klasės ŽLA antigenams nustatyti. Norint atskirti reikiamas ląstelių populiacijas nuo viso kraujo, naudojama centrifuga arba imunomagnetinis atskyrimas. Manoma, kad pirmasis metodas gali sukelti klaidingai teigiamus duomenis, nes dėl to kai kurios ląstelės miršta. Antrasis metodas yra pripažintas specifiškesniu – daugiau nei 95% ląstelių išlieka gyvybingos.

Bet pagrindas atlikti limfocitotoksinį tyrimą HLA tipavimas yra specifinis serumas, kuriame yra antikūnų prieš įvairius HLA I ir II klasės antigenų alelinius variantus. Serologinis tyrimas gali nustatyti ŽLA tipą, tiriant, kurie serumai reaguoja su limfocitais, o kurie ne.

Jei tarp ląstelių ir serumo įvyksta reakcija, ląstelės paviršiuje susidaro antigeno-antikūno kompleksas. Pridėjus tirpalo, kuriame yra komplemento, įvyksta ląstelių lizė ir mirtis. Serologinis ŽLA tipo nustatymo testas vertinamas naudojant fluorescencinę mikroskopiją, siekiant įvertinti teigiamas (raudona fluorescencija) ir neigiamas (žalioji fluorescencija) reakcijas, arba fazinio kontrasto mikroskopiją, kad būtų nudažyti negyvų ląstelių branduoliai. ŽLA tipavimo rezultatas gaunamas atsižvelgiant į sureagavusių serumų ir kryžmiškai reaguojančių antigenų grupių specifiškumą bei citotoksiškumo reakcijos intensyvumą.

Serologinio gydymo trūkumai HLA tipavimas yra kryžminių reakcijų buvimas, silpnas antikūnų afinitetas arba maža ŽLA antigenų ekspresija, baltymų produktų nebuvimas daugelyje ŽLA genų.

Modernesni, molekuliniai metodai HLA tipavimas jie naudoja jau standartizuotus sintetinius mėginius, kurie reaguoja ne su leukocitų paviršiuje esančiais antigenais, o su DNR ir tiesiogiai nurodo, kokių antigenų yra mėginyje. Molekuliniai metodai nereikalauja gyvų leukocitų; bet kokie žmogaus ląstelė galima tirti, o darbui užtenka kelių mikrolitrų kraujo arba galima apsiriboti gramdymu nuo burnos gleivinės.

Molekulinė genetinė HLA tipavimas naudoja PGR metodą, kurio pirmas žingsnis – grynos genominės DNR gavimas (iš viso kraujo, leukocitų suspensijos, audinių).

Tada DNR mėginys nukopijuojamas – amplifikuojamas in vitro naudojant pradmenis (trumpą viengrandę DNR), būdingus konkrečiam ŽLA lokusui. Kiekvienos pradmenų poros galai turi būti griežtai papildantys unikalią seką, atitinkančią konkretų alelį, kitaip amplifikacija neįvyks.

Po PGR, pakartotinio kopijavimo metu, paaiškėja didelis skaičius DNR fragmentai, kuriuos galima įvertinti vizualiai. Tam reakcijų mišiniai yra elektrolizuojami arba hibridizuojami, o ar įvyko specifinis amplifikavimas, nustatoma naudojant programą arba lentelę. ŽLA tipavimo rezultatas pateikiamas kaip išsami ataskaita genų ir alelių lygiais. Dėl naudojamų mėginių standartizacijos, molekulinės HLA tipavimas tiksliau serologinis. Be to, ji suteikia daugiau informacijos (daugiau naujų DNR alelių) ir kt aukštas lygis jos detalizavimas, nes leidžia identifikuoti ne tik antigenus, bet ir pačius alelius, kurie nustato, kuris antigenas yra ląstelėje.

Imuninės lizės reakcija. Reakcija grindžiama specifinių antikūnų gebėjimu sudaryti imuninius kompleksus su ląstelėmis, įskaitant eritrocitus ir bakterijas, o tai sukelia komplemento sistemos aktyvavimą klasikiniu būdu ir ląstelių lizę. Iš imuninės lizės reakcijų dažniausiai naudojama hemolizės reakcija, o bakteriolizės reakcija – retai (daugiausia diferencijuojant cholerą ir į cholerą panašius vibrionus).

Hemolizės reakcija. Reakcijai su antikūnais, esant komplementui, drumsta raudonųjų kraujo kūnelių suspensija virsta ryškiai raudonu skaidriu skysčiu - „lako krauju“ dėl hemoglobino išsiskyrimo. Nustatant diagnostinę komplemento fiksavimo reakciją (FFR), hemolizės reakcija naudojama kaip indikatorius: laisvo komplemento buvimui ar nebuvimui (fiksacijai) patikrinti.

Vietinė hemolizės reakcija gelyje(Erne reakcija) yra vienas iš hemolizės reakcijos variantų. Tai leidžia nustatyti antikūnus formuojančių ląstelių skaičių. Ląstelių, išskiriančių antikūnus – hemolizinus, skaičių lemia hemolizės plokštelių skaičius, atsirandantis agaro gelyje, kuriame yra eritrocitų – tiriamo limfoidinio audinio ląstelių suspensijos ir komplemento.

Imunofluorescencinis metodas

(RIF, imunofluorescencinė reakcija) yra specifinių Ag (Ab) aptikimo metodas, naudojant Abs (Ags), konjuguotus su fluorochromu. Jis pasižymi dideliu jautrumu ir specifiškumu. Naudojamas greitajai infekcijų diagnostikai. ligų (patogeno identifikavimas tyrimo medžiagoje), taip pat leukocitų Ab ir paviršiaus receptoriams bei žymenims nustatyti (imunofenotipui nustatyti) ir kitoms ląstelėms. Tiesioginis I. m. susideda iš audinio pjūvio arba patologinės medžiagos arba mikrobinės plutos, turinčios specifinių Abs, konjuguotų su fluorochromu, apdorojimo; preparatas nuplaunamas, kad būtų pašalintas nesurištas Abs, ir tiriamas fluorescenciniu mikroskopu. Teigiamais atvejais aplink objekto periferiją atsiranda švytintis imuninis kompleksas. Kontroliuoti būtina, kad būtų išvengta nespecifinės liuminescencijos. At netiesioginis. Juos. pirmajame etape audinio pjūvis arba tepinėlis apdorojamas nefluorescencine specifine priemone, antrajame - liuminescencine priemone prieš gyvūno -globulinus, kurie buvo naudojami pirmajame etape. Teigiamu atveju susidaro šviesos kompleksas, susidedantis iš Ar, At to ir At prieš At (sumuštinių metodas). Be fluorescencinio mikroskopo, nustatant ląstelių fenotipą atsižvelgiama į RIF. lazerinis ląstelių rūšiatorius .

Srauto citometrija- ląstelės, jos organelių ir joje vykstančių procesų parametrų optinio matavimo metodas.

Metodas apima šviesos sklaidos iš lazerio spindulio aptikimą, kai ląstelė praeina per jį skysčio sraute, o šviesos sklaidos laipsnis leidžia susidaryti supratimą apie ląstelės dydį ir struktūrą. Be to, atliekant analizę atsižvelgiama į cheminių junginių, kurie yra ląstelės dalis (autofluorescencija) arba pridedami prie mėginio prieš srauto citometriją, fluorescencijos lygį.

Ląstelių suspensija, iš anksto pažymėta fluorescenciniais monokloniniais antikūnais arba fluorescuojančiais dažais, patenka į skysčio srautą, einantį per srauto ląstelę. Sąlygos parenkamos taip, kad ląstelės išsirikiuotų viena po kitos dėl vadinamųjų. hidrodinaminis purkštuko fokusavimas srove. Tuo metu, kai ląstelė kerta lazerio spindulį, detektoriai registruoja:

šviesos sklaida mažais kampais (nuo 1° iki 10°) (ši charakteristika naudojama ląstelių dydžiui nustatyti).

šviesos sklaida 90° kampu (leidžia spręsti apie branduolio/citoplazmos santykį, taip pat apie ląstelių nevienalytiškumą ir granuliuotumą).

fluorescencijos intensyvumas per kelis fluorescencijos kanalus (nuo 2 iki 18-20) - leidžia nustatyti ląstelių suspensijos subpopuliacijos sudėtį ir kt.

Antiglobulino testas arba Kumbso testas atliekami siekiant nustatyti specifinius antikūnus, kurie atakuoja raudoną spalvą kraujo ląstelės(eritrocitai).

Antikūnai yra baltymai, kuriuos gamina imuninė sistema. Paprastai antikūnai jungiasi su svetimomis medžiagomis, tokiomis kaip bakterijos ir virusai, ir jas sunaikina.

Mūsų klinikoje šiuo klausimu dirba specializuoti specialistai.

(4 specialistai)

2. Kodėl reikalingas antikūnų tyrimas?

Antikūnų tyrimas gali būti atliekamas šiais atvejais:

Prieš kraujo perpylimą

Tikriausiai žinote, kad žmogus gali turėti vieną iš keturių kraujo grupių. O kraujo perpylimo galimybei nustatyti galima atlikti antiglobulino tyrimą. Jei jums perpilama, donoro kraujas turi atitikti jūsų tipą (turėti tuos pačius antigenus). Jei perpylimo metu antigenai skiriasi, imuninę sistemą sunaikins perpiltas ląsteles. Tai gali sukelti sunkios ligos ir net mirtį. Štai kodėl taip svarbu rasti tinkamą kraujo grupę.

Nustatyti Rh jautrinimo riziką

Rhesus yra antigenas. Visas jo pavadinimas yra Rh faktorius. Kumbso testas naudojamas antikūnams prieš Rh faktorių nustatyti nėščių moterų kraujyje. Jei moteris, kurios Rh kraujas yra neigiamas, nėščia su vaiku, turinčiu teigiamą Rh faktorių (jis gali būti perduotas iš tėvo), kyla Rh jautrinimo rizika. Rh jautrinimas atsiranda, kai nėštumo ar gimdymo metu kūdikio kraujas susimaišo su motinos krauju. Jei mamos kraujo grupė nesuderinama su kūdikio kraujo grupe, tuomet jos imuninė sistema gali atakuoti vaisių, suvokdama jį kaip svetimkūnį. Tokiu atveju gali išsivystyti sunki liga, vadinama vaisiaus eritroblastoze. IN retais atvejais Jei liga negydoma, vaisius ar naujagimis gali mirti.

Moteriai, kurios kraujas yra Rh neigiamas, gali būti suleidžiama anti-Rh gamaglobulino (pvz., RhoGAM), kuris naudojamas siekiant užkirsti kelią Rh išsivystymui. hemolizinė liga.

Autoimuninei hemolizinei anemijai diagnozuoti

Autoimuninė hemolizinė anemija yra reta liga susijęs su antikūnų prieš eritrocitų antigenus susidarymu.

3. Antiglobulino tyrimo tipai

Yra dviejų tipų antiglobulino testas arba Kumbso testas: tiesioginis ir netiesioginis.

Tiesioginis Kumbso testas arba tiesioginis antiglobulino testas aptinka antikūnus, prisijungusius prie raudonųjų kraujo kūnelių. Jis naudojamas anemijai nustatyti. Sergant šia liga, raudonieji kraujo kūneliai sunaikinami greičiau nei susidaro.

Netiesioginis Kumbso testas arba netiesioginis antiglobulino testas atliekama ieškant antikūnų, nesusijusių su raudonaisiais kraujo kūneliais. Tyrimui naudojamas kraujo serumas, kuriame yra antikūnų. Ši procedūra yra gana reta: ji daugiausia atliekama siekiant nustatyti kraujo perpylimo galimybę arba kaip nėščiųjų apžiūros etapas.

4. Kumbso reakcijos rezultatai

Norma:

Neigiamas tyrimo rezultatas – antikūnų neaptikta.

• Tiesioginis Kumbso testas. Neigiamas tiesioginis antiglobulino testas reiškia, kad jūsų kraujyje nėra antikūnų, susijusių su raudonaisiais kraujo kūneliais.
• Netiesioginis Kumbso testas. Neigiamas netiesioginio antiglobulino tyrimo rezultatas reiškia, kad jūsų kraujas yra suderinamas su donoro krauju. Nėščiai moteriai šis rezultatas reiškia, kad jos organizmas negamina antikūnų prieš Rh teigiamą vaiko kraujo grupę (Rh jautrinimas nepasireiškė).

Nukrypimas nuo normos:

• Tiesioginis Kumbso testas. Teigiamas tiesioginis antiglobulino testas reiškia, kad jūsų kraujyje yra antikūnų, kovojančių su raudonaisiais kraujo kūneliais. Tai gali sukelti nesuderinami kraujo perpylimai arba tokios ligos kaip hemolizinė anemija arba naujagimio hemolizinė liga (HDN).
• Netiesioginis Kumbso testas. Teigiamas netiesioginis antiglobulino testas reiškia, kad jūsų kraujas nesuderinamas su donoro krauju. Nėščios moters organizme tokie rezultatai reiškia, kad yra antikūnų prieš teigiamą vaiko kraujo Rh faktorių (Rh jautrinimą). Jei kūdikio Rh kraujo faktorius yra teigiamas, motina visą nėštumo laikotarpį bus atidžiai stebima gydytojo.

Kumbso testas

Kumbso testas– antiglobulino testas, skirtas Rh neigiamame kraujyje nustatyti nepilnus anti-eritrocitų antikūnus prieš Rh faktorių – specifinį baltymą, esantį Rh teigiamo kraujo eritrocitų paviršiuje. Yra du šio tyrimo tipai: tiesioginis – antikūnų nustatymas raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, netiesioginis – antikūnų nustatymas kraujo serume. Tiesioginiai tyrimai atliekami diagnozuojant ir gydant kraujo ligas: hemolizinę anemiją, naujagimių hemolizinę ligą ir kt. Netiesioginis tyrimas atliekamas siekiant įvertinti donoro ir recipiento kraujo suderinamumą perpylimo metu, taip pat nustatyti Rh konflikto buvimą ir riziką planuojant ir valdant nėštumą. Kumbso testo medžiaga yra deguonies pašalintas kraujas, tyrimas atliekamas naudojant agliutinacijos reakcija paremtus metodus. Paprastai abu testai duoda neigiamą rezultatą. Analizė atliekama per vieną dieną.

Kumbso testas – klinikinis tyrimas Rh neigiamas kraujas, skirtas aptikti antikūnus prieš Rh faktorių. Testas naudojamas Rh konflikto ir hemolizinių reakcijų atsiradimo rizikai nustatyti. Kiekvieno žmogaus raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje yra tam tikras antigenų arba agliutinogenų rinkinys – įvairios prigimties junginiai, kurių buvimas ar nebuvimas naudojamas kraujo grupei ir Rh faktoriui nustatyti. Yra daugybė antigenų tipų, įskaitant Medicininė praktika Didžiausią praktinę reikšmę turi agliutinogenai A ir B, lemiantys kraujo grupę, ir agliutinogenas D, Rh faktorius. Esant teigiamam Rh faktoriui, D antigenai aptinkami ant išorinės eritrocitų membranos, o esant neigiamam faktoriui – ne.

Kumbso testas, dar vadinamas antiglobulino testu, skirtas kraujyje nustatyti nepilnus anti-eritrocitinius antikūnus prieš Rh faktoriaus sistemą. Antikūnai prieš Rh faktorių yra specifiniai imunoglobulinai, kurie gaminasi Rh neigiamame kraujyje, kai į jį patenka raudonųjų kraujo kūnelių su agliutinogenu D. Tai gali nutikti susimaišius vaisiaus ir nėščios moters kraujui, perpylus kraują be išankstinio kraujo. spausdinant. Kumbso testas egzistuoja dviem versijomis – tiesioginiu ir netiesioginiu. Darant tiesioginis testas Kumbsas aptinka antikūnus, pritvirtintus prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus. Tyrimas naudojamas hemolizinės reakcijos priežasčiai nustatyti. Netiesioginis Kumbso testas skirtas anti-eritrocitų antikūnų aptikimui kraujo plazmoje. Būtina nustatyti kraujo suderinamumą tarp donoro ir recipiento arba motinos ir vaisiaus ir padeda išvengti Rh konflikto išsivystymo ir vėlesnės raudonųjų kraujo kūnelių hemolizės.

Abiejų Kumbso testo versijų kraujas imamas iš venos. Analizė atliekama agliutinacijos būdu, naudojant antiglobulino serumą. Tyrimo rezultatai naudojami hematologijoje hemolizinių reakcijų priežastims nustatyti, chirurgijoje ir reanimacijoje perpilant kraują, akušerijoje ir ginekologijoje stebint nėštumą moterims, turinčioms Rh neigiamą kraują.

Indikacijos

Hemolizinėms reakcijoms (raudonųjų kraujo kūnelių sunaikinimui) skiriamas tiesioginis Kumbso testas, kuriuo aptinkami prie raudonųjų kraujo kūnelių paviršiaus prisitvirtinę antikūnai. įvairios kilmės. Tyrimas skirtas pirminei autoimuninei hemolizinei anemijai, potransfuzinei hemolizinei anemijai, naujagimio hemolizinei ligai, eritrocitų hemolizei, kurią sukelia autoimuninė, naviko ar užkrečiamos ligos, taip pat priėmimas vaistai pavyzdžiui, chinidinas, metildopa, prokainamidas. Netiesioginis Kumbso testas, nustatantis antikūnus kraujo plazmoje, naudojamas siekiant užkirsti kelią Rh konflikto vystymuisi. Jis skirtas pacientams, besiruošiantiems kraujo perpylimui, taip pat nėščiosioms, turinčioms neigiamą Rh faktorių, jei būsimas vaiko tėvas turi teigiamą Rh faktorių.

Norint nustatyti Rh suderinamumą, Kumbso testas neskiriamas pacientams, kurių kraujas Rh teigiamas. Tokiais atvejais raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje jau yra antigenų, antikūnų gamybos negali išprovokuoti kraujo perpylimas ar vaisiaus kraujo patekimas į nėščiosios kraują. Taip pat tyrimas neindikuotinas nėščiosioms, jei abu tėvai turi neigiamą Rh faktorių – paveldimą recesyvinis požymis. Vaikas tokiose porose visada turi Rh neigiamas kraujas, imunologinis konfliktas su mama neįmanomas. Esant hemolizinėms patologijoms, antiglobulino testas nenaudojamas gydymo sėkmei stebėti, nes rezultatai neatspindi raudonųjų kraujo kūnelių naikinimo proceso aktyvumo.

Kumbso testo apribojimas yra tyrimo procedūros sudėtingumas – norint gauti patikimus rezultatus, būtina laikytis temperatūros ir laiko sąlygų, reagentų ir biomedžiagos paruošimo taisyklių. Kumbso testo pranašumai yra didelis jautrumas. Sergant hemolizine anemija, šio tyrimo rezultatai išlieka teigiami, net jei hemoglobino, bilirubino ir retikulocitų kiekis normalus.

Pasirengimas analizei ir medžiagos rinkimas

Medžiaga, naudojama Kumbso tyrimui atlikti, yra veninis kraujas. Specialių reikalavimų kraujo paėmimo procedūros laikui ir paciento paruošimui nėra. Kaip ir bet kurio tyrimo metu, pavalgius rekomenduojama daryti bent 4 valandų pertrauką, o per paskutines 30 minučių mesti rūkyti. fizinė veikla, vengti emocinis stresas. Taip pat verta iš anksto aptarti su gydytoju, ar reikia nutraukti vaistų vartojimą – kai kurie vaistai gali iškreipti Kumbso testo rezultatus. Kraujas imamas švirkštu iš kubitalinės venos arba rečiau iš venos plaštakos gale. Per kelias valandas medžiaga pristatoma į laboratoriją.

Atliekant tiesioginį Kumbso testą, į paciento kraujo serumą pridedamas antiglobulino serumas. Po kurio laiko mišinys tiriamas, ar nėra agliutinatų – jie susidaro, jei ant raudonųjų kraujo kūnelių yra antikūnų. Jei rezultatas teigiamas, nustatomas agliutinacijos titras. Netiesioginis Kumbso testas susideda iš daugiau etapai. Pirma, serume esantys antikūnai fiksuojami ant suleistų raudonųjų kraujo kūnelių inkubacijos metu. Tada į mėginį pridedamas antiglobulino serumas, po kurio laiko nustatomas agliutinatų buvimas ir titras. Analizės laikotarpis yra 1 diena.

Normalūs rezultatai

Paprastai tiesioginio Kumbso testo rezultatas yra neigiamas (-). Tai reiškia, kad kraujyje nėra su raudonaisiais kraujo kūneliais susijusių antikūnų ir jie negali sukelti hemolizės. Normalus rezultatas Netiesioginis Kumbso testas taip pat yra neigiamas (-), tai yra, kraujo plazmoje nėra antikūnų prieš Rh faktorių. Rengiantis recipiento kraujo perpylimui, tai reiškia suderinamumą su donoro krauju, o stebint nėštumą – motinos Rh jautrinimo nebuvimą, mažą imunologinio konflikto išsivystymo riziką. Fiziologiniai veiksniai, pavyzdžiui, mitybos įpročiai arba fizinė veikla, negali turėti įtakos bandymo rezultatui. Todėl, jei rezultatas yra teigiamas, būtina gydytojo konsultacija.

Diagnostinė analizės vertė

Teigiamas Kumbso testo rezultatas išreiškiamas kokybiškai nuo (+) iki (++++) arba kiekybiškai, titrais nuo 1:16 iki 1:256. Antikūnų koncentracija ant raudonųjų kraujo kūnelių ir kraujo serume nustatoma abiejų tipų mėginiuose. Jei tiesioginis Kumbso testas yra teigiamas, ant išorinės raudonųjų kraujo kūnelių membranos aptinkami antikūnai, dėl kurių šie kraujo kūneliai sunaikinami. Priežastis gali būti kraujo perpylimas be išankstinio tipavimo – hemolizinė reakcija po perpylimo, taip pat naujagimio eritroblastozė, hemolizinė reakcija dėl vaistų vartojimo, pirminė ar antrinė autoimuninė hemolizinė anemija. Antrinį raudonųjų kraujo kūnelių destrukciją gali sukelti sisteminė raudonoji vilkligė, Evanso sindromas, Waldenströmo makroglobulinemija, paroksizminė šalto hemoglobinurija, lėtinė limfocitinė leukemija, limfoma, infekcinė mononukleozė, sifilis, mikoplazminė pneumonija.

Teigiamas netiesioginio Kumbso testo rezultatas rodo, kad plazmoje yra antikūnų prieš Rh faktorių. Praktiškai tai reiškia, kad įvyko Rh sensibilizacija ir nėštumo metu po donoro kraujo infuzijos gali išsivystyti Rh konfliktas. Siekiant išvengti nėštumo komplikacijų, moterys, kurių Kumbso testo rezultatas teigiamas, įtraukiamos į specialų registrą.

Anomalijų gydymas

Kumbso testas susijęs su izoserologiniais tyrimais. Jo rezultatai leidžia nustatyti hemolizinę reakciją, taip pat nustatyti donoro ir recipiento, motinos ir vaisiaus kraujo suderinamumą, kad būtų išvengta Rh konflikto vystymosi. Jei tyrimo rezultatas yra teigiamas, turite kreiptis į savo gydantį gydytoją - akušerį-ginekologą, hematologą, chirurgą.

Antiglobulino principas. Nepilno tipo anti-eritrocitų antikūnai ir komplemento molekulės (C), esančios eritrocitų paviršiuje, aptinkamos – tiesioginis tyrimas – jų agliutinacijos būdu kontaktuojant su gyvūno serumu, kuriame yra antikūnų prieš žmogaus antiglobuliną (antiglobulino serumą). Daliniai serume laisvi antikūnai aptinkami – netiesioginis tyrimas – fiksuojant juos ant mišinio normalių raudonųjų kraujo kūnelių 0 grupė, kurios visi antigenai priklauso žinomai Rh sistemai, vėliau agliutinuojami veikiant antiglobulino serumui.

Medžiagos, reagentai Kumbso antiglobulino tyrimui: mėgintuvėliai 10/100 ml; graduotos pipetės 1,2 ml; Pasteur pipetės; Trikojai; šlifuoto stiklo skaidres; 8,5‰ NaCl tirpalas; raudonieji kraujo kūneliai. Paciento raudonieji kraujo kūneliai, taip pat priklausantys 0 grupei, bus paimti iš šviežiai paimto kraujo, naudojant antikoaguliantą (EDTA tirpalą).

0 grupės raudonieji kraujo kūneliai turėtų būti parinkti taip, kad jie būtų iš normalių asmenų ir juose būtų visi Rh antigenai. Jas galima laikyti iki 7 dienų autologinėje plazmoje + 4°C temperatūroje. Jei nėra 0 grupės raudonųjų kraujo kūnelių, galima naudoti žinomą antigeninę mozaiką, 0 grupės raudonųjų kraujo kūnelių, Rh teigiamų ir Rh neigiamų raudonųjų kraujo kūnelių mišinį.

Serumas pacientas turi būti šviežiai atrinktas.

Antiglobulino serumas pagamino institutas. Dr. I. Cantacuzino, tiekiamas liofilizuotas 1 ml ampulėse. Ištirpinus serumą laikyti -20°C temperatūroje.

Kumbso antiglobulino tyrimo technika:
A) Tiesioginis Kumbso testas: 3 kartus išskalaukite paciento raudonuosius kraujo kūnelius 8,5‰ NaCl tirpalu.
Ant kelių stiklelių užlašinkite didelį lašą antiglobulino serumo skiedimo, o šalia – nedidelį lašelį paciento eritrocitų nuosėdų; sumaišykite lašus su stiklo kampu. Paruoštą medžiagą palikite ant stalo 5 minutes, tada patikrinkite, ar nėra agliutinatų. Kada teigiamas rezultatas nustatyti didžiausią agliutinacijos titrą.

b) Netiesioginis Kumbso testas: 0 grupės eritrocitai, Rh teigiami ir Rh neigiami, 3 kartus nuplaukite 8,5‰ NaCl tirpalu ir padėkite į paciento serumą 2 lašais eritrocitų 8-10 serumo lašų, ​​tada inkubuokite 60 minučių 37° temperatūra SU. Po to dar kartą tris kartus nuplaukite raudonuosius kraujo kūnelius ir apdorokite juos antiglobulino serumu pagal tiesioginio Kumbso testo instrukcijas.

Kada mes kalbame apie apie šaltus aktyvius antikūnus jautrinti 0 grupės raudonuosius kraujo kūnelius 60 minučių. esant + 4°C temperatūrai.

Pastaba 1) Neatlikite tiesioginio Kumbso tyrimo su raudonaisiais kraujo kūneliais, kurie vieną ar kelias dienas buvo laikomi + 4°C arba kambario temperatūroje, nes rezultatai gali būti klaidingai teigiami dėl neužbaigtų šaltai aktyvių antikūnų, esančių normaliame serume, fiksacijos. 2) Esant sunkiai hiperproteinemijai, raudonuosius kraujo kūnelius plaukite 4-5 kartus ir sulfosalicilo rūgštimi patikrinkite, ar paskutiniame plovimo skystyje nėra serumo baltymų.

Galimas 2 μg IgG/ml likutis eritrocitų nuosėdose gali neutralizuoja antiglobulino serumą. Kumbso testą taip pat galima atlikti naudojant monospecifinius anti-IgG, -IgM, -IgA -C3 ir -C4 serumus, siekiant išsiaiškinti ląstelių, esančių raudonųjų kraujo kūnelių paviršiuje, tipą, pavyzdžiui, pacientams, sergantiems autoimunine hemolizine liga. anemija.